左旋精氨酸通过激活L-arg-NO通路对异丙肾上腺素致大鼠心力衰竭的作用

目的探究左旋精氨酸(L-arg)通过激活L-arg-NO通路对异丙肾上腺素(ISO)导致的大鼠心力衰竭的保护作用。方法雄性SD大鼠随机分为对照组、ISO组、L-arg干预组。腹腔注射ISO复制大鼠心力衰竭模型,灌胃给予L-arg。30 d后监测血流动力学参数:心率(HR)、左室收缩压力(LVSP)、左室舒张末期压力(LVEDP)、左室压力最大上升或下降速率(±dp/dtmax),计算心肺系数,检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(NO)含量以及一氧化氮合酶(NOS)活性;HE染色观察心肌组细胞排列;Masson染色观察心肌胶原纤维并计算心肌胶原纤维容积分数(CVF)。结果与对照组比较,ISO组大鼠血流动力学参数:HR、LVSP、+dp/dtmax降低,LVEDP、-dp/dtmax升高,心肺系数增加,血清TNF-α、SOD升高,NO、NOS降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。L-arg干预组HR、LVSP、+dp/dtmax均高于ISO组,LVEDP、-dp/dtmax、心肺系数低于ISO组,血清SOD和TNF-α降低,NO和NOS增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。HE染色显示对照组心肌细胞形态正常,间质无扩张充血,心肌细胞排列整齐;ISO组心肌细胞排列紊乱,炎性细胞浸润,而L-arg干预组心肌细胞接近对照组。ISO组Masson染色心肌细胞间可见大量蓝染的胶原纤维,而对照组观察不到蓝染区域,L-arg干预组在对照组与ISO组之间;ISO组CVF明显高于L-arg干预组(P<0.05),L-arg干预组高于对照组(P<0.05)。结论 L-arg可以通过激活Larg-NO通路,增加机体内NO含量,改善血流,减轻心肌重构,产生对心力衰竭心肌的保护作用。

L-精氨酸通过L-Arg-NO途径促进大鼠背部跨区皮瓣的成活

背景:有研究表明一氧化氮可有效改善皮瓣术后血供,促进皮瓣成活,但具体机制尚不清楚。目的:通过实验验证L-Arg-NO途径在L-精氨酸促进大鼠背部跨区皮瓣成活中的作用。方法:成功建立大鼠背部三穿支体跨区皮瓣模型的雄性SD大鼠81只,随机被分为3组,分别于术后即刻、术后1-7 d腹腔注射不同药物,L-Arg组注射L-精氨酸400 mg/(kg·d);L-NAME组注射一氧化氮合酶抑制剂40 mg/(kg·d);空白组注射等体积等渗氯化钠溶液。术后7 d观察皮瓣成活情况,计算皮瓣成活率;颈总动脉灌注明胶-氧化铅行血管造影,观察血管走形和分布;硝酸还原酶法测定术后即刻、1,3,5,7 d chokeⅡ区一氧化氮水平;苏木精-伊红染色观察chokeⅡ区新生血管密度和管径;蛋白印记法检测术后3,7 d chokeⅡ区血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶2蛋白表达。实验方案经解放军联勤保障部队第九四〇医院动物实验伦理委员会批准(批准号为2015KYLL046)。结果与结论:①术后7 d,L-Arg组大鼠皮瓣成活率最高(89.47±3.17)%,3组比较差异有显著性意义(F=49.908,P<0.001);②术后7 d,L-Arg组chokeⅡ区血管结构较完整,走形清楚,扩张达到真性吻合的血管沿着皮瓣纵轴方向一直延伸到皮瓣末端,空白组和L-NAME组chokeⅡ区血管结构和走形杂乱,L-NAME组皮瓣末端血管结构消失;③L-Arg组一氧化氮水平术后开始升高,术后3 d达到高峰,之后逐渐下降;④术后7 d,L-Arg组新生血管密度和管径最高,3组比较差异有显著性意义(均P<0.001);⑤术后3 d,L-Arg组血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶2蛋白表达量最高,3组比较差异有显著性意义(均P<0.05);术后7 d,L-Arg组血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶2蛋白表达量最高,3组之间比较血管内皮生长因子差异有显著性意义(P<0.05),基质金属蛋白酶2蛋白差异无显著性意义;⑥结果说明,一氧化氮可有效改善大鼠背部三穿支体皮瓣chokeⅡ区血供,促进chokeⅡ区微血管扩张和增生,而L-精氨酸可通过L-Arg-NO途径提高皮瓣术后组织内一氧化氮水平,促进皮瓣术后成活。

STUDY ON INVOLVEMENT OF L-ARG-NO IN THE PROTECTIVE ACTION OF ELECTROACUPUNCTURE ON CEREBRAL ISCHEMIC INJURY IN THE RAT

In the present study, the involvement of L-arginine(L-Arg) NO on the protective action of electroacupuncture(EA) on cerebral ischemic injury was observed in acute ischemia-reperfusion(IR) rat model by taking regional cerebral blood flow(r-CBF),cerebral water content(CWC),and blood nitric oxide(NO) contents as indexes. Results showed that 1) EA could cause r-CBF and serum NO content to increase and CWC to lower, suggesting an protective action of EA on IR cerebral injury; 2) intravenous injection of L-Arg also had an protective effect on cerebral IR cerebral injury, while L-NNA had no this effect; and 3) pre-treatment with L-Arg might strengthen the effect of EA further, while pretreatment with L-NNA could weaken its effect. It indicates that L-Arg-NO may be involved in the effect of EA in protecting the brain from ischemic injury.

微血管病性心绞痛患者血小板L-精氨酸-一氧化氮系统改变及静脉L-精氨酸输入的逆转效应

目的:观察微血管病性心绞痛(MVA)患者血小板左旋精氨酸(L-Arg)转运动力学、一氧化氮合酶(NOS)活性及一氧化氮(NO)产量,探讨血小板L-Arg-NO系统变化在MVA发病中的意义,及静脉输入L-Arg对L-Arg转运的逆转效应。方法:15例MVA患者及15例健康对照者,静脉血制备血小板悬液,用放射性核素标记法测定3H-L-Arg在血小板的转运动力学特征;测定血小板NOS活性及NO产物——亚硝酸盐(NO2-)量;15例MVA患者基础检查后,给予静脉滴入L-Arg20g/d,10d后重复上述检查。结果:MVA患者血小板L-Arg转运功能明显减低,最大转运速率(Vmax)较对照组减低34.4%(P<0.01);L-Arg转运米氏常数(Km)值增加21.4%(P<0.05);NO2-产量较对照组减少47.1%(P<0.05),NOS活性较对照组减低25.4%(P<0.01)。而应用L-Arg可明显逆转上述改变,与MVA组治疗前比较Vmax增加11.9%(P<0.01),Km降低18%(P<0.05),NO2-产量明显增加,是治疗前的1.33倍(P<0.05),NOS活性增加为治疗前的1.2倍(P<0.05)。L-Arg静滴后心绞痛发作及心电图明显改善。结论:MVA患者存在L-Arg-NO系统转运及功能障碍,MVA患者冠脉微血管内皮依赖性舒张功能障碍可能与L-Arg-NO系统障碍有关。L-Arg的补充可逆转L-Arg-NO系统障碍,在MVA治疗上有重要作用。

高血压病人血小板L-精氨酸/一氧化氮系统的改变

目的原发性高血压（ＥＨ）病人（２３例）与健康成年人（１４）例作对照，观察高血压时血小板（Ｐｔ）左旋精氨酸（Ｌ－Ａｒｇ）－一氧化氮（ＮＯ）系统的改变及Ｌ－Ａｒｇ转运的特征。方法微盘测定法测定血小板孵育液中亚硝酸盐（ＮＯ２－）的含量来反映ＮＯ产生量、ＡＤＰ刺激下ＮＯ的产生量；采用张新波等建立的一氧化氮合酶（ＮＯＳ）测定改良法测定血小板ＮＯＳ活性；放射性同位素标记测定血小板３Ｈ－Ｌ－Ａｒｇ转运的动力学特征。结果ＥＨ患者Ｐｔ的ＮＯ产生量及ＮＯＳ活性较对照组明显降低（Ｐ＜０．０１），用ＡＤＰ刺激后，ＥＨ患者Ｐｔ的ＮＯ增加量仅为正常对照组增加量的６０％，其Ｌ－Ａｒｇ转运能力亦显著低于正常人（各浓度点Ｐ均＜０．０１）。最大转运速率（Ｖｍａｘ）仅为正常人的７９％（Ｐ＜０．０１），而米氏常数（Ｋｍ）则无明显改变（Ｐ＞０．０５）。结论高血压时Ｐｔ的Ｌ－Ａｒｇ－ＮＯ系统存在明显异常，提示对ＥＨ患者，在降压的同时，联合应用改善Ｌ－Ａｒｇ－ＮＯ系统的药物，对预防和治疗高血压减少并发症可能会有更好的效果。

一氧化氮及一氧化氮合酶抑制剂对小鼠血吸虫病肝纤维化程度的影响

目的研究一氧化氮(NO)对小鼠日本血吸虫病肝纤维化程度的影响。方法昆明小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫,于感染后第4周末治疗组和抑制剂组分别给予NO前体-L-精氨酸(L-Arg)及一氧化氮合酶(NOS)抑制剂-NG-左旋-硝基精氨酸甲基乙酯(L-NAME),于第10周末处死小鼠,取血,分离血清,剖取肝脏。应用病理组织学方法及生物化学方法,观察各组小鼠血吸虫病肝纤维化程度,同时测定血清NO、层粘连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、谷-草转氨酶(AST)及谷-丙转氨酶(ALT)活性和肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量。结果小鼠感染血吸虫后,感染组肝脏有明显的纤维化,血清中HA、LN、AST、ALT等指标显著升高,肝组织内Hyp含量也明显增加。与感染组相比:L-Arg高、中剂量组肝纤维化程度评分降低显著,低剂量组虽有减轻但无统计学意义,同时,L-Arg高、中剂量组血清LN、HA、AST、ALT的水平和肝组织Hyp的含量有所降低;低剂量组HA、LN、AST、ALT的水平虽然降低,但无统计学意义,Hyp水平降低明显;抑制剂组血清LN、HA、AST、ALT含量和肝组织Hyp的水平均明显升高。血清NO的水平随着精氨酸剂量的增加而显著增加,而精氨酸抑制剂组NO的水平降低明显。结论NO能明显降低血吸虫病肝纤维化的程度和减轻肝纤维化所造成的损伤作用。

L-精氨酸对肺动脉高压肉鸡肺动脉NOS活性的影响

240羽商品代肉鸡于14d时随机等分为常温对照组(NT),低温组(LT)和低温加L精氨酸(L arg)组(LA)。自14d起,对LT和LA组肉鸡采用低温诱导肺动脉高压综合征(PHS)。此外,LA组自14d起在饲料中按100mg·kg-1剂量添加L arg。测定右心室/全心室(RV/TV)和血浆一氧化氮(NO)水平。肺组织切片经βNADPH组织化学染色后,检测直径在100～200μm的肺小动脉平均光密度(D)值,以D值代表NOS的活性。结果显示:LT组PHS发病率显著高于对照组(P<0.05);LA组与对照组相比无显著差异(P>0.05),但显著低于LT组(P<0.05)。LT组肉鸡RV/TV在45d时显著升高(P<0.05),血浆NO浓度总体上与NT组差异不显著(P>0.05);LA组肉鸡RV/TV值与NT组相比无显著差异(P>0.05),其血浆NO浓度自32d时起较NT和LT组显著升高(P<0.05)。LT组肉鸡肺动脉D值较NT组显著降低(P<0.05);LA组D值仅在24d时降低(P<0.05),在其余时间段与NT组相比无显著差异(P>0.05),但显著高于LT组(P<0.05)。上述结果提示,添加L arg可在一定程度上保护并激活肺动脉NOS活性,从而使内源性NO合成增加。

一氧化氮的心血管生物学作用

一氧化氮(NO)是重要的细胞信使物质,它参与心血管活动的调节,许多心血管疾病与一氧化氮生物学功能紊乱有关,深人研究一氧化氮的生物学作用将会给心血管疾病的临床治疗提供新的思路。

血小板L-arg/NO系统在妊高征中的表达及意义

目的:观察重度妊高征患者血小板L-arg/NO系统的变化。方法:选择正常妊娠孕晚期患者19例(对照组),重度妊高征患者21例(观察组),采用放射性核素3H-L-arg标记法测定血小板内NOS的活性,血小板L-arg转运,比色法测定血小板内NO含量。结果:重度妊高征患者血小板L-arg转运为3.28±0.71pmol/108pt·min-1,较正常降低43.15%(P<0.01);血小板NOS活性为5.33±1.75pmol/108pt·min-1,较正常降低31.84%(P<0.01);NO水平较正常降低,有显著性差异(P<0.05)。结论:重度妊高征时血小板L-arg转运降低,NOS的活性降低,血小板内NO水平降低,血小板L-arg/NOS/NO系统明显损伤。

大鼠蛛网膜下腔微量注射NO前体物质和NOS抑制剂对痛觉的调制

目的：多数关于ＮＯ对痛觉调制的报道，认为ＮＯ在脑内有痛敏作用。本工作研究ＮＯ在脊髓中的作用。方法：由于ＮＯ的半衰期很短，因此本工作采用给动物脊髓蛛网膜下腔注射（ｉｔｈ）ＮＯ的前体，精氨酸、精精二肽和在体内自发释放ＮＯ的硝普钠（ＳＮＰ）以及ＮＯ合成酶（ＮＯＳ）抑制剂ＮＧ硝基Ｌ精氨酸（ＮＮＬＡ），借以调制脊髓中ＮＯ的释放，并用大鼠幅射热甩尾实验观察脊髓中ＮＯ对大鼠痛阈的影响。结果：ｉｔｈ不同剂量（１０μｇ、２０μｇ、４０μｇ）的Ｌ精氨酸、精精二肽以及三种剂量（１．０μｇ、２．０μｇ、４．０μｇ）的ＳＮＰ，均引起明显的痛敏效应，并在该剂量范围内呈量效关系。三种剂量的精精二肽的痛敏作用，要比Ｌ精氨酸的痛敏作用强，并持续更长的时间。ｉｔｈ三种剂量（２．５μｇ、５μｇ、１０μｇ）的ＮＯＳ抑制剂ＮＮＬＡ则具有明显的镇痛作用，镇痛可持续２０ｍｉｎ以上，并呈剂量效应关系。结论：提高脊髓中ＮＯ水平具有痛敏作用，降低脊髓中ＮＯ水平具有镇痛作用。

同型半胱氨酸影响妊娠晚期孕妇血小板功能的探讨

目的观察同型半胱氨酸（Homocysteine，Hcy）对妊娠晚期孕妇的血浆中血小板L—arg/NO系统功能的影响。并探讨Hey对血小板机制的损伤。方法选择妊娠晚期孕妇的血浆32例，采用放射性核素3H—L—arg标记法，分别测定妊娠晚期孕妇（对_照组）及经同型半胱氨酸孵育过（Hcy组）的血小板内L-arg转运、NOS的活性，比色法测定血小板内N0含量。结果经Hey组的血小板L—arg转运为（3．244-0．82）pmol／108ptunfin-1，对照组的血浆中血小板L—arg转运为（5．12±1．75）pmol／108ptumln—1（P〈0．01）；在Aeh刺激下，NOS活性明显提高，但Hey组提高的程度明显低于对照组（P〈0．01）；在Ach刺激下，NO生成及cGMP含量明显提高（P〈0．01），但Hcy组仍明显低于对照组（P〈0．05）。结论同型半胱氨酸影响血小板L—arg的转运，使NOS的活性降低，血小板内NO水平降低，同型半胱氨酸损伤血小板L—arg／NOS／NO系统。

交通心肾法对老龄雌性大鼠血管内皮L-Arg/NOS/NO通路的影响

目的探讨交通心肾法对老龄雌性大鼠血管内皮L-精氨酸/一氧化氮合酶/一氧化氮(LArg/NOS/NO)通路的影响。方法选用15月龄雌性SD大鼠,随机将其分为老龄空白组、中药治疗组、西药对照组和中药对照组,分别给予生理盐水、交通心肾方药(20.65 g/kg)、戊酸雌二醇(0.12 mg/kg)和更年安(0.65 g/kg)灌胃,共28 d,另选3月龄大鼠作为青年组。采用放免法检测大鼠血清雌二醇(E2)、促卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH),硝酸还原酶法测定主动脉外膜NO,比色法测定主动脉外膜NOS、L-Arg。结果与老龄空白组相比,中药治疗组NOS无明显差异(P>0.05),西药对照组和中药对照组NOS含量均明显下降,且有显著性差异(P<0.05)。与老龄空白组相比,中药治疗组和西药对照组L-Arg含量无显著性差异(P>0.05);中药对照组L-Arg含量明显下降,且有显著性差异(P<0.05)。与老龄空白组相比,中药治疗组和西药对照组NO均升高,且有显著性差异(P<0.05),中药对照组NO稍有升高,但无显著性差异(P>0.05)。雌激素和NO呈正相关性。结论交通心肾法能升高老龄雌性大鼠雌激素水平,对血管内皮L-Arg/NOS/NO通路有一定的调节作用。

潜艇艇员血小板L-精氨酸／一氧化氮合酶／一氧化氮通路变化

目的观察潜艇人员血小板L-精氨酸（L-Arg）转运动力学，一氧化氮合酶（NOS）活性，血浆、血小板一氧化氮（NO）含量，探讨潜艇人员内皮功能变化，为预防心血管疾病提供依椐。方法48名健康男性潜艇人员及18名健康男性陆勤人员为对照者，静脉血制备血小板血浆，用放射性同位素标记法测定^3H-L-Arg在血小板转运中的动力学特征；测定血小板NO产物——亚硝酸盐量及NOS活性。结果潜艇艇员血小板L-Arg转运功能明显减低，L-Arg最大转运速度（Vmax）较同期陆勤人员低31．4％（P〈0，01），米氏常数（Km）值增加11．4％（P〈0．01），NOS活性较陆勤组减少51．1％（P〈0．01），血浆及血小板NO2^-水平分别低于陆勤组35．2％（P〈0.01）、82．8％（P〈0．01）。结论由于特殊环境，潜艇艇员存在血小板L-Arg／NOS／NO系统功能异常，L-Arg转运障碍，NOS活性显著减低，血浆及血小板NO生成明显减少，提示潜艇艇员有血管内皮功能受损征象，其特殊职业可影响心血管疾病发病学基础。