H_(2)O_(2)抑制ERK通路诱导L-O2细胞铁死亡

目的:探讨过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导人肝实质细胞(L-O2细胞)铁死亡的作用及潜在机制。方法:采用不同浓度梯度H_(2)O_(2)刺激L-O2细胞,分别于处理12、24 h后使用CCK-8法检测细胞存活率,从而确定最有效的H_(2)O_(2)诱导条件。在实验中设立了以下处理组:空白对照组、H_(2)O_(2)组、Erastin组、H_(2)O_(2)+Fer-1组;确定H_(2)O_(2)可诱导L-O2细胞发生铁死亡,为了进一步明确具体的机制,细胞分为空白对照组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+不同浓度的ERK激动剂以及ERK抑制剂,使用试剂盒检测各处理组的细胞死亡情况、ROS水平和MMP水平,利用RT-qPCR检测铁死亡标记物PTGS2和ACSL4 mRNA表达水平。结果:800μmol/L H_(2)O_(2)刺激24 h可诱导L-O2细胞死亡;与空白对照组相比,H_(2)O_(2)组和Erastin组细胞受损明显,细胞内ROS水平升高、MMP水平显著降低,同时PTGS2和ACSL4 mRNA的表达水平升高;与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)+Fer-1组细胞受损减弱,细胞内ROS水平降低、MMP水平恢复,PTGS2和ACSL4 mRNA的表达水平降低。与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)+ERK激动剂组细胞受损减弱,细胞内ROS水平降低、MMP水平恢复、PTGS2和ACSL4 mRNA的表达水平降低;然而,加入ERK抑制剂组则出现了相反的结果。结论:800μmol/L的H_(2)O_(2)处理24 h能显著诱导L-O2细胞发生铁死亡,且此过程可能主要通过ERK通路的抑制作用来实现。

牛樟芝固态发酵成分缓解L-O2细胞酒精损伤的研究

牛樟芝谷物固态发酵可产生多种生物活性成分,是具有良好应用潜力的培养方式。本文以牛樟芝青稞固态发酵物为原料,通过硅胶柱层析获得4种生物活性成分,然后利用人正常肝细胞L-O2酒精损伤模型对这4种活性成分进行功能评价。研究结果显示,酒精损伤能够导致L-O2细胞收缩,贴壁能力减弱。在所研究的4种活性成分中,AdA和Aq均能够有效抑制L-O2细胞形态变化并增强细胞的贴壁性能。进一步分析发现,这些活性成分能够通过提高肝细胞抗氧化能力缓解酒精性损伤,其中AdA和Aq具有较好的抗肝损伤能力,能显著降低细胞培养液中ALT(Alanine transaminase,谷丙转氨酶)和AST(Aspertate aminotransferase,谷草转氨酶)的活力,显著降低细胞中MDA(Molondialdehyde,丙二醛)的含量,并提升SOD(Super oxide dismutase,超氧化物歧化酶)和GSH(Glutathione,谷胱甘肽)的含量。本文为研究牛樟芝固态发酵产物缓解酒精性肝损伤机制奠定了基础。

梓白皮、桑白皮和楸树皮对H_2O_2致损的L-O2肝细胞的保护作用

目的研究梓白皮、楸树皮和桑白皮对体外H2O2致损肝细胞的保护作用及其机制。方法采用H2O2(100μmol/L)体外诱导L-O2肝细胞损伤,CCK-8法检测细胞活性,检测细胞上清中天门冬氨酸转换酶(AST)、丙氨酸氨基转换酶(ALT),超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平,ELISA法检测细胞中TNF-α和IL-1水平,流式细胞术检测细胞周期。结果 H2O2可以改变L-O2细胞的形态结构,抑制其活性;促进细胞代偿性增殖;提高细胞AST、ALT和TNF-α、IL-1的水平;降低细胞SOD活性。而梓白皮、楸树皮和桑白皮可拮抗H2O2对细胞的损伤。结论梓白皮、楸树皮和桑白皮对H2O2致损的LO2肝细胞有保护作用。

柴胡皂苷d对人肝细胞L-O2体外毒性机制探讨

目的:考察柴胡主要成分之一柴胡皂苷d(ssd)体外肝毒性以及主要机制。方法:通过MTT试验、细胞形态学改变、DNAladder、DAPI荧光染色法、乳酸脱氢酶释放率、溶血试验等方法考察ssd对人肝细胞L-O2是否具有毒性作用,进而阐明ssd肝毒性产生的可能机制。结果:MTT法测得ssd的半抑制浓度(IC50)为2.44μmol/L,5μmol/L处理组细胞形态学发生明显改变,乳酸脱氢酶释放率增高和溶血试验结果发现毒性作用呈剂量依赖性,但DNAladder和DAPI荧光检测均未见明显细胞凋亡。结论:ssd具有较强的体外肝毒性,其机制可能是由于ssd诱导细胞膜通透性增加从而导致细胞损伤或坏死,而不是诱导细胞凋亡。

麻黄连轺赤小豆汤三方对H_2O_2诱导损伤的L-O2人肝细胞的保护作用

目的研究麻黄连轺赤小豆汤三种组方(简称"三方")对体外肝细胞损伤的保护作用及其机制。方法培养L-O2人肝细胞,采用H2O(2100μmol.L-1)体外诱导肝细胞损伤,检测细胞上清中天门冬氨酸转换酶(AST)和丙氨酸氨基转换酶(ALT)、丙二醛(MDA)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力,cck-8法检测细胞活性。结果与阴性对照组比较,H2O(2100μmol.L-1)可抑制肝细胞活性,增加MDA的生成和ALT、AST的水平,降低SOD的活力(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,麻黄连轺赤小豆汤三方均可拮抗H2O2对肝细胞的损伤作用,可促进细胞增殖,显著降低细胞上清ALT(除楸树皮方低剂量组)和AST水平(除楸树皮方高剂量组)及MDA含量(除梓白皮方低剂量组),明显提升SOD活力(P<0.01,P<0.05)。结论麻黄连轺赤小豆汤三方对体外肝细胞损伤均有直接保护作用,该作用可能与其抗氧化作用有关。

改构型酸性成纤维细胞生长因子对白花丹素诱导的人胚肝细胞L-O2损伤的保护作用

目的研究改构型酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对白花丹素引起的人胚肝细胞L-O2损伤的保护作用及机理。方法用白花丹素体外诱导肝细胞损伤,同时用aFGF对肝细胞进行保护,测定培养上清液中的SOD,MDA,LDH值,MTT法测定肝细胞活性。结果与损伤组比较,aFGF对白花丹素引起的胚肝细胞损伤有明显的保护作用(P<0.05)。结论 aFGF可保护肝细胞,其机制可能与其拮抗自由基产生有关。

改构型酸性成纤维细胞生长因子对紫杉醇诱导的人胚肝细胞L-O2及人胚肾细胞293损伤的保护作用

目的观察紫杉醇对人胚肝细胞L-O2及人胚肾细胞293的毒性作用,及加入改构型酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)后对紫杉醇引起的肝肾细胞损害的保护,并探讨其可能机制。方法用紫杉醇诱导人胚肝细胞L-O2及人胚肾细胞293损伤,同时加入aFGF对肝、肾细胞进行保护,并测定培养上清液中的SOD,MDA,LDH值,MTT法测定肝、肾细胞活性。结果紫杉醇在体外对人胚肝细胞L-O2、人胚肾细胞293有一定的毒性作用,使用aFGF对肝、肾细胞进行保护后,IC50值有明显的提高,SOD值与未加aFGF组相比明显升高,而MDA,LDH值明显降低(P<0.05)。结论 aFGF可有效对抗紫杉醇引起的肝、肾细胞损伤。

果蔬中四种农药残留二元混合物对人肝细胞L-O2的毒性探索

为了探索四种农药(克百威、多菌灵、氯氟氰菊酯、毒死蜱)的二元混合物对离体人肝细胞L-O2的毒性,首先研究了L-O2细胞染毒接种浓度、显色时间和溶剂DMSO含量对细胞的毒性,得出染毒的最佳实验条件;然后研究了四种药物对L-O2细胞的单独和联合染毒作用,结果发现四种药物在国家限量值允许范围内对L-O2细胞的单独毒性均低于20%;进一步增加染毒浓度得出克百威和多菌灵的联合毒性类型为相加作用,氯氟氰菊酯和毒死蜱的联合毒性类型为独立作用。本研究为后期多元混合物的联合毒性研究打下一定基础,并为完善果蔬中农药混合物的残留限量提供一定理论依据。

百草枯急性暴露对肝细胞L-O2的毒理研究

百草枯(paraquat,PQ)是目前农业生产上使用较为广泛的除草剂,PQ毒性极大,能造成人和动物多器官损伤。因肝脏是主要的受损器官之一,故以肝细胞L-O2为研究对象,探讨PQ急性暴露对肝细胞产生的毒理影响。结果显示在40!640μmol·L^(-1)暴露浓度下作用24 h,PQ显著抑制肝细胞L-O2的增殖活性(P<0.01),半抑制浓度(IC50)为263.2μmol·L^(-1)。将肝细胞L-O2暴露于不同浓度的PQ(60、120、180和250μmol·L^(-1)),作用24 h后,与对照组相比,PQ暴露组的活性氧(ROS)累积和细胞凋亡率都表现出明显的浓度依赖性升高(P<0.01; P<0.05),细胞周期阻滞在S期。Western blot结果显示,除60μmol·L^(-1)外的其他暴露组中活化的胱天蛋白酶9(caspase-9)表达显著上调,Bax和Bcl-2的比值显著增大,提示细胞凋亡机制可能与内源性线粒体通路的激活有关。此外,碳酸酐酶9(CA9) mRNA表达显著升高,提示PQ暴露下可能引起酸性代谢产物出现,对细胞产生酸毒害,但其内在的机制还需进一步研究。

二至丸保肝活性成分群对体外肝细胞损伤的保护作用

二至丸出自明代吴旻辑的《扶寿精方》[1],由女贞子（蒸）和墨旱莲等量组成,用于治疗肝肾阴虚、眩晕耳鸣等症。通过前期二至丸乙酸乙酯部位对体外肝细胞损伤保护作用的研究表明了该部位的保肝活性[2],本实验进一步通过聚酰胺柱层析对乙酸乙酯部位分离得到50%乙醇洗脱活性成分群（AIEP）,采用体外培养L-O2型肝细胞,用四氯化碳（CCl4）和过氧化氢（H2O2）分别诱导肝细胞损伤模型。观察AIEP对体外肝细胞损伤的保护作用及其机制。

二至丸保肝活性成分群对体外肝细胞损伤的保护作用

目的:研究二至丸保肝活性成分群(70%乙醇部位)(active ingredients group in liver protection from Erzhi Pill,AIEP)对体外肝细胞损伤的保护作用及其机理。方法:培养L-O2型肝细胞,采用CCl4和H2O2体外诱导肝细胞损伤,检测培养上清液中天门冬氨酸转换酶(AST)和丙氨酸氨基转换酶(ALT)水平,测定上清液中丙二醛(MDA)的含量和过氧化物歧化酶(SOD)活力及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,MTT法检测细胞存活和增殖活性。结果:(1)AIEP(0.32～40μg.mL-1)剂量组可明显降低由CCl4所致肝细胞培养上清液中AST和ALT水平及MDA含量的升高,还可显著提高由CCl4所致肝细胞存活率和SOD活力及GSH-Px活性的降低;(2)AIEP(0.32～40μg.mL-1)剂量组可使H2O2升高的肝细胞培养上清液中AST和ALT水平及MDA含量明显降低或恢复,还可显著提高CCl4降低的肝细胞存活率和SOD活力及GSH-Px活性。结论:提示AIEP对体外肝细胞损伤有较强的保护作用,该作用可能与其抗氧化作用有关。

二至丸水提物对体外肝细胞损伤的保护作用

目的研究二至丸水提物（aqueous extract of Erzhi Pill,AEEP）对体外肝细胞损伤的保护作用及其机制。方法培养L-O2型肝细胞,采用H2O2和CCl4体外分别诱导肝细胞损伤,检测培养上清液中天门冬氨酸转换酶（AST）和丙氨酸氨基转换酶（ALT）水平,测定上清液中丙二醛（MDA）的含量和过氧化物岐化酶（SOD）活力,MTT法检测细胞存活和增殖活性。结果①AEEP（0.32~40μg/ml）剂量组可明显降低由H2O2升高的肝细胞培养上清液中AST和ALT水平及MDA含量,还可提高H2O2降低的肝细胞存活率和SOD活力;②AEEP（0.32~40μg/ml）剂量组可使CCl4升高的肝细胞培养上清液中ALT和ALT水平及MDA含量明显降低或恢复,还可提高CCl4降低的肝细胞存活率和SOD活力。结论提示AEEP对体外肝细胞损伤有直接保护作用,该作用可能与其抗氧化作用有关。

雷公藤甲素对肝癌细胞生长的影响及其机制

目的观察雷公藤甲素对肝癌HepG2细胞及L-O2肝细胞增殖的影响及其机制。方法利用不同浓度雷公藤甲素处理HepG2细胞和L-O2细胞,采用噻唑蓝(MTT)试验检测雷公藤甲素对HepG2细胞和L-O2细胞的抑制率;采用Western blotting检测雷公藤甲素对HepG2细胞和L-O2细胞Ras蛋白质表达水平的影响。结果雷公藤甲素能明显抑制肝癌细胞HepG2的生长,较低程度抑制L-O2细胞生长。雷公藤甲素处理24 h导致HepG2细胞半数死亡的浓度为52.21 ng/mL,使L-O2细胞半数死亡的浓度为17892.78 ng/mL,8 ng/mL雷公藤甲素能显著抑制HepG2细胞增殖,而对L-O2正常肝细胞的增殖无显著抑制作用;雷公藤甲素处理48 h导致HepG2细胞半数死亡的浓度为24.57 ng/mL,使L-O2细胞半数死亡的浓度为163.25 ng/mL,4 ng/mL雷公藤甲素能显著抑制HepG2细胞增殖,而对L-O2正常肝细胞的增殖无显著抑制作用。雷公藤甲素下调HepG2细胞Ras的表达。结论雷公藤甲素对肝癌HepG2细胞的增殖呈现抑制效应,对L-O2正常肝细胞的增殖影响较小;雷公藤甲素可能下调HepG2细胞中Ras的表达,雷公藤甲素可能成为一种新型的治疗肝癌药物。

腐乳毛霉醇提物不同极性部位抗氧化活性及细胞保护作用研究

目的:观察腐乳毛霉醇提物不同极性部位抗氧化活性及对L-O2细胞保护作用.方法:分别将腐乳毛霉醇提物萃取后的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇及水部位进行体外抗氧化活性和对CCl_4致LO2细胞损伤的保护实验.结果:腐乳毛霉醇提物均具有较强的抗氧化、清除DPPH和ABTS自由基及FRAP能力,对CCl_4引起L-O2细胞的氧化损伤具有显著的保护作用,可降低细胞内ROS及培养液中MDA含量和LDH活性,升高SOD、GSH-Px和CAT活性,从而减轻CCl_4对L-O2细胞氧化损伤,其作用效果由高到低依次是乙酸乙酯、正丁醇、水和石油醚部位.结论:腐乳毛霉醇提物不同极性部位对CCl_4引起L-O2细胞的氧化损伤具有显著的保护作用,其作用机制可能与抗氧化作用有关.

氯化两面针碱在体外对肝细胞L-O2和肾细胞293增殖的影响

目的:观察氯化两面针碱在体外对人胃癌细胞7901、人鼻咽癌细胞cne1-1、人肾癌细胞ketr-3、人肝癌细胞BEL 7404的增殖抑制作用和对人胚肝细胞L-O2和人胚肾细胞293的增殖影响。方法:采用MTT法检测不同浓度氯化两面针碱对4种肿瘤细胞和人胚肝细胞L-O2及人胚肾细胞293增殖的影响,比较其IC50值;采用紫外分光光度法测定氯化两面针碱作用后肝、肾细胞培养上清液中SOD,MDA,LDH值的变化。结果:氯化两面针碱在体外对肿瘤细胞具有较强的增殖抑制作用,同时对人胚肝细胞L-O2和人胚肾细胞293有一定的增殖抑制作用。结论:氯化两面针碱能抑制多种肿瘤细胞的增殖,对肿瘤细胞有明显细胞毒性作用,同时可抑制人胚肝细胞L-O2和人胚肾细胞293的增殖,对人体肝、肾细胞有一定的毒性。

白花丹素的体外肝毒性研究

目的观察白花丹素在体外对4种肿瘤细胞的作用及其在体外对人胚肝细胞L-O2的毒性作用。方法采用MTT法检测不同浓度白花丹素对肿瘤细胞和人胚肝细胞L-O2的毒性,比较其IC50值;采用紫外分光光度法测定白花丹素作用后肝细胞培养上清液中SOD,MDA,LDH值的变化。结果白花丹素在体外具有较强抗肿瘤作用,同时对人胚肝细胞L-O2有一定的毒性作用。结论白花丹素是优良的抗肿瘤药物,对肿瘤细胞有明显毒性作用,同时具有一定肝毒性,使用时应注意监测肝功能。

不同品种桑椹中的矢车菊-3-芸香苷(C3Y)含量及桑椹C3Y的抗氧化作用

矢车菊-3-芸香苷(C3Y)是桑椹花青素的主要成分之一。采用超声波辅助有机溶剂浸提法提取8个果桑品种桑椹鲜果中的C3Y,当料液质量浓度为0.125 g/mL时的提取效率较高。以体积比91∶9的0.2%磷酸-乙腈为高效液相色谱(HPLC)流动相可有效分离检测桑椹提取液中的C3Y。8个果桑品种桑椹鲜果中的C3Y含量存在明显差异,桑品种日本田橙的桑椹C3Y质量分数高达0.135 5%左右,而桑品种桂花蜜的桑椹C3Y质量分数仅有0.000 4%。常温保存桑椹鲜果中的C3Y不稳定,4 h后降解率达23.15%左右,48 h后降解率高达67.13%左右,所以采摘后的桑椹鲜果应及时提取C3Y,并在密闭、低温环境中储藏。体外试验结果表明,桑椹C3Y对羟自由基(·OH)具有明显的清除效果,但对超氧阴离子自由基(O2-)的清除作用不明显,对H2O2诱导损伤人胚肝细胞L-O2具有明显的促增殖保护作用,提示桑椹C3Y是桑椹花青素抗氧化及对H2O2诱导损伤肝细胞起保护作用的主要功能性成分。

二至丸提取物对体外肝细胞损伤的保护作用

目的:研究二至丸乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extractsof Erzhi pill,EAEP)对体外肝细胞损伤的保护作用及其机理。方法:培养L-O2型肝细胞,采用CCl4和H2O2体外分别诱导肝细胞损伤,检测培养上清液中天门冬氨酸转换酶(AST)和丙氨酸氨基转换酶(ALT)水平,测定上清液中丙二醛(MDA)的含量和过氧化物岐化酶(SOD)活力及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,MTT法检测细胞存活和增殖活性。结果:①EAEP(0.32～40μg.mL-1)剂量组可明显降低由CCl4所致肝细胞培养上清液中AST和ALT水平及MDA含量的升高,还可提高由H2O2所致肝细胞存活率和SOD活力及GSH-Px活性的降低。②EAEP(0.32～40μg.mL-1)剂量组可使H2O2升高的肝细胞培养上清液中ALT和ALT水平及MDA含量明显降低或恢复,还可提高CCl4降低的肝细胞存活率和SOD活力及GSH-Px活性。结论:提示AEEP对体外肝细胞损伤有直接保护作用,该作用可能与其抗氧化作用有关。

二至丸保肝有效部位群对体外肝细胞损伤的保护作用

目的研究二至丸保肝有效部位群(50%乙醇部位)(EFEP)对体外肝细胞损伤的保护作用及机理。方法培养L-O2型肝细胞,采用四氯化碳(CCl4)和过氧化氢(H2O2)体外诱导肝细胞损伤,检测培养上清液中AST和ALT水平,测定上清液中丙二醛(MDA)的含量、过氧化物岐化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,MTT法检测细胞存活和增殖活性。结果 EFEP0.32-40μg/ml明显降低由CCl4所致肝细胞培养上清液中AST和ALT水平和MDA含量的升高,也显著提高由CCl4所致肝细胞存活率和SOD活力及GSH-Px活性的降低。EFEP 0.32-40μg/ml使H2O2升高的肝细胞培养上清液中AST和ALT水平及MDA含量明显降低,还显著提高由H2O2降低的肝细胞存活率和SOD活力及GSH-Px活性。结论 EFEP对体外肝细胞损伤有较强的保护作用。该作用可能与其抗氧化作用有关。