用显微注射法建立转bcl-x_l基因小鼠

建立转bcl xl基因小鼠 ,继而传代建系 ,用于缺血性脑血管疾病的研究。采用显微注射法 ,将人bcl xl基因注入昆明小白鼠受精卵获得子代鼠 ,然后作PCR ,Southern blot ,mRNA ,Western blot检测以获得阳性鼠。实验中注射受精卵 16 5 4枚 ,移植卵数 14 4 8枚 ,受体鼠 4 9只 ,怀孕鼠 7只 ,子代鼠 13只 ,整合数 4只并均有表达 ,植入受精卵的存活率 83% ,受精卵的总存活率 0 .78% ,移植鼠的怀孕率 14 .3% ,整合效率 30 .7% ,总有效率为 0 .2 4 %。初步获得了转bcl

抑凋亡基因bcl-X_L在胰腺癌组织中的表达及意义

目的 探讨抑凋亡基因 bcl- XL 在胰腺癌组织中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组织化学链霉亲和素方法 (SABC) ,检测 5 2例份胰腺癌组织中凋亡抑制基因 bcl- XL 的基因蛋白产物 ,并与良性和正常胰腺组织作对照分析。结果 胰腺癌组织中 bcl- XL 的阳性表达率为 73.1% ,显著高于胰腺良性组织及正常组织 ,bcl-XL 的表达与肿瘤的 TNM分期有关 ,而与肿瘤直径、淋巴结转移、分化程度、病理类型等无关。结论 bcl- XL

鼠bcl-X_L基因在CHO细胞中的表达

目的 :构建携带鼠bcl XL 基因的真核表达载体 ,并将其在CHO细胞中表达 .方法 :用反转录PCR获取鼠bcl XL全长cDNA序列 ,将其克隆进pEGFP重组融合表达质粒 .脂质体法转染CHO细胞 ,荧光检测目的蛋白表达 .结果 :成功获得了鼠bcl XLcDNA ,构建了编码鼠bcl XL 的真核融合表达载体pEGFP bcl XL,转染CHO细胞后观察到融合蛋白表达 .结论 :鼠bcl XL 基因的克隆及融合表达 ,为进一步在高密度、大规模细胞培养中利用bcl

大鼠液压脑损伤后 bax/ bcl-x_L的表达在 m RNA和蛋白质水平的相关性(英文)

目的 :探讨脑创伤后 bax/bcl- x L 在 m RNA和蛋白水平的变化规律及其与神经细胞凋亡发生、发展的关系。方法 :在液压脑损伤模型中 ,应用逆转录聚合酶链反应、免疫组化分别检测大鼠脑创伤后不同时程 bax和 bcl- x L 表达 ;采用凋亡原位末端标记、电镜超微结构、DNA凝胶电泳观察脑创伤后细胞凋亡的形态和生化特征。结果 :伤后 6 h,bcl- x L m RNA表达下调 [伤侧半球为对侧的 (6 7.42± 7.5 4) % ],bcl- x L 蛋白水平下降 [伤侧为对侧的 (85 .85± 5 .72 ) % ]。伤后 3d,bcl- x L m RNA和 bcl- x L蛋白表达分别为对侧的 (39.97± 3.6 1) %和 (5 7.5 0± 6 .2 1) % ;bax m RNA和 bax蛋白分别为对侧半球的 (2 0 3.95± 17.5 3) %和 (189.0 2± 7.2 3) %。伤后 bax/bcl- x L 比率升高比细胞凋亡提前出现 ,早期由于 bcl- x L 的表达下降 ,后期主要是由于 bax的升高所致。结论 :细胞凋亡及其调节基因的表达间具有一致性 ;脑创伤对 bax和 bcl- x L 的调节发生在转录水平以前的某一环节。bax/bcl- x L

细菌内同源重组高效制备含绿色荧光蛋白和抗凋亡基因bcl-X_L的重组腺病毒载体

目的 :制备含绿色荧光蛋白和抗凋亡基因bcl-XL 的重组腺病毒载体。方法 :采用PCR方法从质粒pEGFP -C3 -bcl-XL 中扩增出bcl-XL 基因 ,再亚克隆至腺病毒穿梭质粒中 ,形成转移质粒pAdTrack -CMV -bcl-XL;然后与pAdEasy - 1共转化BJ51 83菌 ,采用细菌内同源重组法构建重组腺病毒质粒pAdEasy - 1 -gfp -bcl-XL,筛选同源重组的阳性克隆 ;抽提的pAdEasy - 1 -gfp -bcl-XL 经PacI线性化后 ,再用LIPOFECTAMINETM2 0 0 0介导转染至人胚肾 2 93细胞内包装扩增出重组腺病毒颗粒 ;采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定 ;用氯化铯超高速梯度离心纯化获取高滴度的重组腺病毒rAd -gfp -bcl-XL。结果 :由pAdTrack -CMV -bcl-XL 和pAdEasy - 1共转化BJ51 83菌1 6 - 2 0h后 ,可获得 35 %的阳性重组体细菌克隆。由重组质粒DNA经 2 93细胞包装后产生的重组腺病毒 ,经PCR检测表明含有目的基因bcl-XL。氯化铯纯化所得重组腺病毒滴度约为 6 5× 1 0 1 2 PFU/L。结论 :用细菌内同源重组法可以高效、简便、快捷地制备出重组腺病毒质粒载体 ,重组体病毒质粒经 2 93细胞包装、扩增和氯化铯纯化后可制备出高滴度的重组腺病毒颗粒rAd -gfp -bcl-XL,为人类相关疾病的基因治疗提供良好的基因转染载体。

BAD和Bcl-X/L基因在小鼠胸腺细胞凋亡时的表达及其意义

目的检测BAD和Bcl-X/L基因在小鼠胸腺细胞凋亡的表达,探讨细胞凋亡调控基因在小鼠胸腺细胞凋亡时的作用。方法应用免疫组织化学染色法,观察不同剂量糖皮质激素诱导的小鼠胸腺细胞凋亡时BAD和Bcl-X/L基因的表达。结果免疫组织化学结果表明,正常对照组胸腺内BAD呈低表达,地塞米松组随剂量的增加BAD的表达成递增趋势,地塞米松各组与对照组比较差异有有统计学意义(P<0.05);正常对照组胸腺内Bcl-X/L呈高表达,地塞米松组随剂量的增加Bcl-X/L的表达成递减趋势,地塞米松各组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论促凋亡蛋白BAD和抗凋亡蛋白Bcl-X/L在糖皮质激素诱导引起的胸腺细胞凋亡调控中起重要作用。

大鼠液压脑损伤后bax和bcl-X_L的表达改变在mRNA和蛋白水平的相关性

目的 探讨脑创伤后bax和bcl xL 在mRNA和蛋白水平的变化规律及其与神经细胞凋亡发生、发展的关系。方法 在液压脑损伤模型中 ,应用逆转录聚合酶链反应、免疫组化分别检测大鼠脑创伤后不同时程bax和bcl xL 的表达 ;采用凋亡原位末端标记、电镜超微结构、DNA凝胶电泳观察脑创伤后细胞凋亡的形态和生化特征。结果 伤后 6h ,bcl xL mRNA下调 [伤侧半球为对侧的 (6 7.42± 7.5 4) % ],bcl xL 蛋白水平下降 [伤侧为对侧的 (85 .85± 5 .72 ) % ]。伤后 3d ,bcl xL mRNA和bcl xL 蛋白表达分别为对侧的 (39.97± 3.6 1) %和 (5 7.5 0± 6 .2 1) % ;baxmRNA和bax蛋白分别为对侧半球的 (2 0 3.95± 17.5 3) %和 (189.0 2± 7.2 3) %。伤后bax/bcl xL 比率升高比细胞凋亡提前出现 ,早期由于bcl xL 的表达下降 ,后期主要是由于bax的升高所致。结论 细胞凋亡及其调节基因的表达间具有一致性 ;脑创伤对bax和bcl xL 的调节发生在转录水平以前的某一环节。bax/bcl xL 平衡体系的维持或紊乱影响脑创伤后神经细胞生存或死亡。

反义RelA下调白血病耐药细胞株HL-60/E6 bcl-x_L mRNA

为了探讨NF κB对白血病耐药细胞株HL 6 0 E6bcl x基因转录的影响 ,首先在体外采用间歇小剂量表阿霉素 (6ng ml)作用于HL 6 0细胞的方法 ,建立了性能稳定的广谱耐药细胞株HL 6 0 E6。然后用RT PCR方法检测 5 μmol L硫代修饰反义RelA作用于HL 6 0 E6细胞后bcl x基因mRNA水平的变化。同时应用免疫荧光技术和流式细胞术分别对HL 6 0 E6细胞中NF κB RelA的功能状态及脂质体作为寡核苷酸载体的转染效率进行评估。结果表明 ,在HL 6 0 E6细胞中RelA表达于胞核 ,NF κB处于持续活化状态。脂质体介导的寡核苷酸 (ODN)的转染效率明显高于裸ODN组 ,在 4 ,6和12小时时有显著差异 (P <0 .0 1)。反义RelA作用于HL 6 0 E6细胞后 ,bcl xL mRNA水平下降呈时间依赖性 ,8小时抑制达到最高峰 ,15小时后逐渐恢复 ,而对照组bcl xL mRNA水平变化不明显。分析结果认为 ,NF κB对bcl x有转录调节作用 ,反义技术封闭RelA亚基可以减弱NF κB对bcl xL 基因的转录激活 ,进而推测NF κB可能是白血病细胞耐药的一个重要因子。

5-Fu诱导HepG2细胞凋亡过程中Fas抗原和bcl-X_L蛋白的表达及意义

目的 研究 5 -氟尿嘧啶 (5 -Fu)诱导人肝癌HepG2细胞凋亡过程中Fas抗原和bcl-XL 蛋白的表达及意义。方法 采用免疫细胞化学法对 5 -Fu处理的HepG2细胞进行染色 ,运用图像处理和分析系统定量分析Fas抗原和bcl-XL 蛋白表达。流式细胞仪检测抗 -Fas -抗体对氟尿嘧啶诱导人肝癌HepG2细胞凋亡百分率的影响。结果 在未用药处理的对照组细胞Fas抗原呈弱表达(0 .17± 0 .0 3) ,加入 0 .0 1mol L 5 -Fu后Fas阳性表达的细胞数目增加 ,表达强度增强。作用 16h后Fas抗原表达强度达高峰 (0 .4 5± 0 .0 5 ) ,与对照组比较两者有显著差异 (P <0 .0 1)。但在 0 .0 1mol L5 -Fu诱导HepG2细胞凋亡过程中癌基因蛋白bcl-XL 表达逐渐减弱 ,经药物处理 4、8、16、2 4h后 ,其表达分别为 0 .2 8± 0 .0 3、0 .2 0± 0 .0 3、0 .14± 0 .0 3和 0 .0 7± 0 .0 2。癌基因蛋白bcl-XL 的表达与Fas抗原表达呈负相关 (r =- 0 .787,P <0 .0 1)。流式细胞仪分析显示 5 -Fu作用 4 8h后 ,肝癌细胞凋亡百分率为 (16 .2 3± 0 .90 ) % ,而加入抗 -Fas -抗体后细胞凋亡百分率显著上升为 (40 .13± 1.4 5 ) % (P<0 .0 1)。结论 5 -Fu诱导HepG2细胞凋亡是通过Fas依赖途径 ,属于第Ⅱ型Fas信号传导途径。

Bcl-x_L及DNA-PKcs在ⅡB期骨肉瘤中的表达及临床意义

目的 探讨Bcl-xL及DNA-PKcs在ⅡB骨肉瘤中的表达及与预后的关系。方法 应用免 疫组化方法检测40例ⅡB期骨肉瘤中Bcl-xL及DNA-PKcs的表达,并分析其与无瘤生存率及生存时间 的关系。结果 Bcl-xL及DNA-PKcs表达阳性率分别为55%及60%;复发转移组Bcl-xL表达阳性率 明显高于无瘤生存组(P=0.001);Bcl-xL表达阳性者无瘤生存率较阴性者低(P=0.0039)。复发转移者 DNA-PKcs阳性率同样显著高于无瘤生存者(P=0.002);DNA-PKcs阳性组累计无瘤生存率也明显低于 阴性组(P=0.0078)。多因素分析提示Bcl-xL及DNA-PKcs的表达是影响无瘤生存率的预后因素。结 论 Bcl-xL阳性表达者预后差,其作用与抑制肿瘤细胞凋亡及化疗耐药相关。DNA-PKcs的表达与骨肉 瘤的不良预后关系密切,表明骨肉瘤细胞中的凋亡抑制普遍存在,并使肿瘤细胞修复化疗药物所致DNA 损伤的能力增强。

bcl-X/L蛋白在食管鳞癌癌变过程中的表达及临床意义

目的 :探讨bcl X L蛋白在食管鳞癌癌变过程中的表达。方法 :采用SABC免疫组化法 ,检测 4 5例食管鳞癌组织、癌旁粘膜及切缘正常粘膜上皮的bcl X L表达情况。结果 :非典型增生的bcl X L阳性率明显高于正常及单纯增生上皮 ,差异有高度显著性 (P <0 0 1)。随着非典型增生的加重 (轻、中、重 )bcl X L的阳性率逐渐升高 ,差异有显著性 (P <0 0 1)。癌组织中bcl X L表达较高且与癌分化程度、淋巴结转移无关 (P >0 0 5 )。结论 :bcl X L高表达在食管鳞癌的发生中起一定作用 。

食管鳞癌端粒酶活性、端粒酶逆转录酶及bcl-X/L表达的研究

目的 探讨食管鳞癌组织中端粒酶活性、端粒酶逆转录酶 (hTERT )及bcl X /L的表达及其它们之间的关系。方法 应用TRAP -银染法检测 45例食管鳞癌组织的端粒酶活性 ,采用原位杂交及免疫组织化学方法对癌组织进行hTERT及bcl X/L表达的检测。结果 癌组织端粒酶活性阳性率为 82 .2 % ,hTERT及bcl X/L的表达阳性率分别为 64 .4%及 71.1% ,bcl X/L的蛋白表达及hTERT的mRNA表达与端粒酶活性均有相关性。结论 食管鳞癌组织中端粒酶活性、hTERT及bcl X /L的表达阳性率均较高。hTERT及bcl X/L的表达对端粒酶活性有一定调节作用。

热诱导颊癌细胞凋亡与Bcl-x_L蛋白表达的关系

目的 探讨热诱导BcaCD885细胞凋亡与Bcl-xL 蛋白表达变化的关系。方法 4 3 C 4 0min水浴加温诱导BcaCD885细胞产生凋亡。采用流式细胞仪 (FCM) -DNA及抗体检测技术分别测定细胞凋亡率及Bcl-xL蛋白表达量 ,观测热诱导颊癌细胞凋亡过程中Bcl-xL 蛋白表达的动态变化 ,探讨二者间的关系。结果 凋亡组内Bcl-xL 蛋白表达量明显低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,凋亡率与Bcl-xL 蛋白表达水平存在负相关关系 (r =- 0 .89,P<0 .0 5 )。结论 Bcl-xL

大鼠bcl-x_L cDNA的克隆和高滴度重组bcl-x_L腺相关病毒的制备

以RT PCR法从大鼠脑组织中克隆bcl XL 基因 ,将其定向插入带rep cap基因和neu基因的三功能腺相关病毒 (AAV)载体 ,转染HeLa细胞并以G4 18筛选 ,然后用腺病毒感染筛选后的细胞克隆 ,包装成重组腺相关病毒 .用带rep cap基因的C12细胞筛选和滴定产生重组腺相关病毒的细胞克隆 ,粗制细胞裂解物中病毒滴度最高只有 3× 10 5IU ml.从产病毒量较高的克隆大量制备重组病毒 ,经肝素柱高压液相亲和层析法纯化、浓缩病毒后获得了高达 4× 10 11IU ml的重组病毒 .为研究脑缺血动物模型中BCL XL

用于变形分析的L-X-1'平差方法

为了直接处理含有粗差的变形观测数据，文献［１］提出了Ｌ－Ｘ－１平差模型，但这种Ｌ－Ｘ－１平差模型解的唯一性较差。为此，本文提出了Ｌ－Ｘ－１＇平差方法。该方法与Ｌ－Ｘ－１平差比较，更容易得到唯一的平差结果。

Bcl-x_L、Bcl-Xs/L以及Bcl-6在骨肉瘤组织中的表达及临床意义

目的:检测凋亡相关蛋白Bcl-xL、Bcl-Xs/L以及Bcl-6在骨肉瘤中的表达,并探讨其与骨肉瘤预后的关系。方法:应用免疫组化方法检测Bcl-xL、Bcl-Xs/L以及Bcl-6在41例骨肉瘤组织中的表达,并分析其与无瘤生存率及生存时间的关系。结果:Bcl-xL、Bcl-Xs/L在骨肉瘤组织中表达的阳性率分别为53.7%和75.6%,而Bcl-6为阴性表达,是否行术前化疗不影响Bcl-xL的表达(P>0.05),Bcl-xL表达阳性者无瘤生存率较阴性者低(P<0.01),而Bcl-Xs/L表达与复发转移及无瘤生存率无相关关系。结论:Bcl-xL、Bcl-Xs/L在骨肉瘤中有不同程度的表达,Bcl-xL的表达与预后相关,Bcl-xL阳性表达者复发、转移率高,无瘤生存率低,这与Bcl-xL抑制骨肉瘤细胞凋亡导致化疗耐药的特性相关。

安桥Liverpool L-X7迷你组合

在音响发烧友的眼中,迷你组合也许个值一提,但对那些不怎么发烧、而且又讲究格调的时尚人士来说,设计精美的迷你组合却有着独特的魅力:完整实用的功能集于一身,体积小巧不占空间,尤其是漂亮精致的外观,即使不开声,看着也是一种享受,当然,纯粹从音质的角度讲,多数迷你组合都很一般。

Effect of Antisense Oligodeoxynucleotide Directed to NF-κB-RelA on Bcl-x_L mRNA in Extended Drug Resistance Leukemia Cell Line HL- 60/E6

To explore the effect of NF κB on bcl x gene transcription in extended drug resistance leukemia cell line HL 60/E6, drug resistant subline HL 60/E6 was derived by intermittently exposing HL 60 cells to 6 ng/ml epirubicin. Indirect immunofluorescence was used to demonstrate the location of NF κB RelA in HL 60/E6 cells. FCM analysis and RT PCR were used to detect the efficiency of liposome mediated ODN transfection and the change of bcl x L mRNA levels after 5 μmol/L phosphorothioate (PS) derivatized antisense (AS) oligodeoxynucleotide (ODN) directed to RelA was transferred into HL 60/E6 cells. The results showed that RelA remained persistently active and located at the nuclei of HL 60/E6 cells,but in the cytoplasm of HL 60 cells, the efficiency of liposome mediated ODN transfection was significantly higher than that of null ODN ( P <0.01 in 4 h, 6 h, 12 h, 24 h). Exposure of HL 60/E6 cells to 5 μmol/L AS PS ODN directed to RelA led to a maximal 40 % decline of bcl x L mRNA levels within 8 h. The inhibition rate of bcl x L mRNA was (15±1.79) %, (28±2.34) %, (40±3.47) %, (20±1.54) % in 4 h, 6 h, 8 h, 15 h, respectively, but it was less than 15 % in control group. It was concluded that NF κB was involved in regulating bcl x transcription. It was suggested that NF κB was an important factor for drug resistance in leukemia cells.

紧L-X半群上不同分布的组合乘积的极限性质

本文讨论一类紧拓扑半群上不同分布概率测度组合乘积的极限性质,利用“局部群化”的方法将紧群上,紧交换半群上的一些结果以相应的形式建立到紧L-X半群上.

重组腺病毒介导的gfp-bcl-X_L对视网膜变性鼠光感受器细胞保护作用的研究

目的 观察重组腺病毒rAd gfp bcl XL治疗视网膜变性 (retinaldegeneration ,RD)鼠的疗效。方法 40只RD鼠随机分成A、B组 ,每组 2 0只 ,右眼为治疗眼 ,左眼为对照眼。A、B组治疗眼分别于RD鼠生后 10d及 2 2d视网膜下腔注射含绿色荧光蛋白基因gfp和抗凋亡基因bcl XL 的重组腺病毒颗粒 ;术后 15、30d摘除治疗眼和对照眼行冰冻切片、透射电镜下观察、石蜡切片、HE染色并提取视网膜总RNA ;行逆转录聚合酶链反应分析bcl XL 基因的mRNA表达水平 ;免疫组化分析治疗眼和对照眼的Bcl XL 蛋白水平。结果 治疗眼视网膜有较广泛的绿色荧光蛋白表达 ,说明重组腺病毒成功的将bcl XL 转染至视网膜光感受器细胞 ,且有bcl XL 表达 ;术后 30d ,A组鼠治疗眼和对照眼bcl XL的mRNA表达水平及Bcl XL 蛋白含量有明显差异 ;透射电镜下可见治疗眼的内节段较对照眼完好 ;HE染色示治疗眼视网膜光感受器细胞层较对照眼厚。而B组鼠治疗眼和对照眼的视网膜光感受器细胞层的厚度无明显差异。结论 注射至早期RD鼠视网膜下腔中的rAd gfp bcl XL 能有效转染光感受器细胞并发挥抗凋亡作用 ,但对晚期RD鼠的疗效不明显。