反义酸性转化酶基因对低温贮藏马铃薯块茎还原糖和淀粉含量的影响

对2个含有酸性转化酶(AcInv)反义基因的转基因马铃薯品系及对照品种进行低温贮藏(4℃)及室温还暖处理。随低温贮藏时间的延长,供试材料均表现出还原糖含量升高,总淀粉含量下降的趋势。低温处理40d时,“Ac转Atlantic”和“Ac转甘农薯2号”的还原糖含量比未转基因品种低23%和18%。总淀粉含量分别比未处理前下降约1.0%和1.3%,支链淀粉含量分别下降约1.4%和1.7%,淀粉直/支比明显低于对照,分别为0.29和0.38。块茎的石蜡切片显示,转基因块茎中深蓝色淀粉颗粒明显少于未转基因对照。另外,对低温贮藏的块茎室温还暖后,2个转基因品系的还原糖含量仍低于对照品种。实验结果证明反义AcInv基因对低温贮藏下块茎还原糖和淀粉含量具有下向调节作用。

甜瓜果实酸性转化酶基因反义表达载体的构建(英文)

应用RNA反义技术抑制甜瓜果实发育过程中酸性转化酶活性,促进蔗糖积累,从而为培育优质品种提供了可行的新方法。将已克隆到pMD18-T载体上的甜瓜酸性转化酶基因用BamHⅠ和HincⅡ双酶切,得到该基因编码区1038bp的cDNA片段,将其定向插入到植物表达载体pROK2的BamHⅠ/SmaⅠ克隆位点,构建了甜瓜酸性转化酶cDNA反义表达载体(Anti-MAI1)。采用冻融法将其转入根癌农杆菌LBA4404,得到了完整的Ti质粒表达载体系统。利用叶盘法转化烟草,经PCR和PCR-Southern杂交检测,证明此基因已整合入烟草的核基因组中。

马铃薯块茎RNA提取及RT-PCR法克隆酸性转化酶基因

马铃薯块茎由于富含多糖和酚类物质造成RNA提取难度大。通过在SDS-phenol提取缓冲液中加入2%PVP及10mmol/L半胱氨酸以除去大量的酚类物质,利用改进后的SDS-酚法提取的马铃薯块茎总RNA电泳结果表明,总RNA质量高于未经改进的方法。并进行RT-PCR克隆与马铃薯块茎低温糖化反应过程密切相关的块茎酸性转化酶(acidinvertase)基因,经核酸序列对比分析,与公布的已知序列具有98.96%的同源性,为利用反义技术抑制酸性转化酶活性进行马铃薯块茎抗低温糖化研究作好了准备工作。