人源pEGFP-C1-p38γ真核表达质粒的构建及其功能研究

目的构建人源pEGFP-C1-p38γ表达质粒,并观察其对乙醇刺激的L0-2肝细胞的增殖和凋亡及炎症因子分泌的影响。方法在人源L0-2肝细胞中提取RNA并且逆转录为cDNA,同时将引物稀释到10μmol/L,其余作为储液备用。采用PCR技术扩增p38γ并鉴定,使用AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒进行PCR产物的纯化回收,再对PCR产物及载体进行酶切回收,酶切片段连接后,进行连接产物的转化、挑菌、摇菌、质粒小抽。酶切鉴定后,进行测序鉴定。将构建好的质粒转染至乙醇刺激的人源L0-2细胞中,通过MTT实验和流式细胞术检测对其增殖和凋亡的影响,并用Western blot技术检测炎症因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在L0-2肝细胞中的表达。结果测序显示pEGFP-C1-p38γ真核表达质粒构建成功。同时,MTT实验显示,乙醇刺激L0-2细胞24 h后p38γ过表达组细胞的增殖率为(0.42±0.08)%,低于转染空载体的对照组(0.60±0.03)%;流式细胞术检测结果显示,p38γ过表达组细胞的凋亡率为(17.46±1.52)%,高于转染空载体质粒的对照组(13.18±1.34)%;Western blot检测显示p38γ过表达组中的IL-6和TNF-α表达较对照组升高。结论 p38γ能够抑制乙醇刺激的L0-2肝细胞的增殖,并促进其凋亡。同时,p38γ能够促进乙醇刺激后的L0-2肝细胞中IL-6和TNF-α的表达。

中药内服、外洗联合左氧氟沙星治疗老年盆腔炎随机平行对照研究

[目的]观察中药内服、外洗联合左氧氟沙星治疗老年盆腔炎疗效。[方法]使用随机平行对照,将90例患者按就诊顺序编号方法简单随机分为两组。对照组45例左氧氟沙星0.3g+5%葡萄糖250mL,静滴,2次/d,滴注≥2h。治疗组45例中药内服:巴戟天30g,补骨脂、菟丝子各25g,肉桂20g,附子5g,杜仲、白术各20g,山药15g,人参20g,水煎300mL,早晚温服;中药外洗:消炎汤(金银花、蒲公英、败酱草、紫花地丁各30g,香附、丹参各15g、红花6g,延胡索30g,苦参20g),熬制2h,留置300mL,取100mL兑温水至400mL外洗,2次/d,30min/次,注意防止烫伤;西药治疗同对照组。连续治疗10d为1疗程。观测临床症状、血清炎症因子(TNF-α、IL-2、IL-4、IL-10)、不良反应。治疗1疗程(10d),判定疗效。[结果]治疗组痊愈5例,显效18例,有效20例,无效2例,总有效率95.56%;对照组痊愈2例,显效16例,有效19例,无效8例,总有效率82.22%;治疗组疗效优于对照组(P<0.05)。TNF-α、IL-2、IL-4、IL-10两组均有改善(P<0.01),治疗组改善优于对照组(P<0.01)。[结论]中药内服、外洗联合左氧氟沙星治疗老年盆腔炎,疗效满意,无严重不良反应,值得推广。