肝脂肪变性细胞模型的建立与优化

目的在原有的乙醇或高脂诱导的细胞模型上进行优化,拟建立新的肝脂肪变性细胞模型,为研究脂肪肝提供更为高效、便捷的体外模型方法。方法采用油红O染色法观察血清、油酸和乙醇在不同作用时间和作用浓度下对人源肝细胞株L02中脂滴蓄积的影响。同时采用RT-PCR法检测过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)-γ、脂肪酸转运蛋白-2(AP)-2的mRNA表达,筛选出肝脂肪变性细胞模型建立的合适条件。两组之间比较采用t检验,三组以上采用单因素方差分析。结果油红O染色显示随着血清、油酸和乙醇作用时间和作用浓度的增加,L02细胞中的桔红色颗粒(脂滴)逐渐增多;并确定,与0%油酸和2%乙醇刚开始作用诱导的红色颗粒计数值100.00%±17.63%相比,0.003%油酸和2%乙醇共同作用于L02细胞24 h后,再用2%乙醇和无血清的DMEM培养基继续培养48h的条件下,细胞中脂滴蓄积水平最高,计数值为802.38%±71.06%(t=42.36,P<0.001)。RT-PCR检测显示,诱导的脂滴蓄积与脂肪化相关因子PPARγ、AP-2的mRNA表达呈正相关。结论成功将高脂、乙醇等复合因素共暴露L02细胞,建立并优化了肝脂肪变性的细胞模型,提示肝细胞脂肪化的发生与PPARγ、AP-2的上调有关。