L型钙离子通道α1C亚基基因多态性与精神分裂症的Meta分析

目的：用Meta分析的方法综合评价L型钙离子通道α1C亚基基因（calcium channel,voltage-dependent,L type,alpha1C subunit gene,CACNA1C）多态性位点与精神分裂症（schizophrenia,SCZ）的关系,为SCZ的遗传背景提供询证医学证据。方法：通过计算机对PubMed、中国生物医学文献光盘数据库（CBMdisc）数据库进行检索（2000年1月至2013年11月）。根据纳入标准收集CACNA1C多态性位点与SCZ病例对照研究的国内外全文文献。应用RevMan 5.1软件对符合条件的研究结果进行Meta分析,包括异质性检验,OR值以及评估发表偏倚。结果：共5篇外文文献符合条件并纳入分析,累计精SCZ组3 555例,健康对照组19 566例。数据合并结果显示,CACNA1C多态性位点rs1006737A型基因与SCZ有关联。按种族分为高加索亚组和亚洲亚组进行分析,组内无显著异质性,G/A＋A/A vs.G/G基因型合并OR=1.16（95%CI=1.03~1.31）和1.29（95%CI=1.10~1.52）,总效应测定结果 Z=2.39、3.09（均P〈0.05）。结论：CACNA1C多态性位点rs1006737 A型基因与SCZ有明显关联,且与高加索人和亚洲人群SCZ易感性相关,携带A型基因可能增加SCZ的患病风险。

宫颈癌HPV16型L1基因的克隆和序列分析

目的 获取人乳头瘤病毒 16 (HPV16 )晚期表达基因L1,为HPV感染的检测和诊断奠定基础。方法 收集宫颈癌组织标本 ,设计一对L1基因特异引物 ,用PCR方法从宫颈癌组织中获得L1基因片段 ,构建入克隆载体 pGEM -T ,双向测定插入片段序列并进行序列分析。 结果 这一株HPV16型L1蛋白序列 ,与既往报道的L1序列高度同源 .

骨骼肌二氢吡啶敏感的L型钙离子通道α1亚基基因多态性与甲状腺功能亢进性低钾周期性瘫痪的相关性

目的研究骨骼肌二氢吡啶敏感的L型钙离子通道α1亚基(CACNA1S)基因11外显子1551位点T/C和1564位点C/T多态性与中国西南地区汉族男性甲状腺功能亢进(甲亢)性低钾周期性瘫痪(THPP)的相关性。方法选取中国西南地区男性THPP患者90例(THPP组),甲亢不伴周期性瘫痪者98例(GD组),正常对照95名(CN组),采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法,对CACNA1S基因第11外显子区1551T/C多态性位点和1564C/T多态性位点进行基因分型。结果①在CACNA1S基因1551位点,THPP组TT、TC、CC基因型频率分别为56.7%、34.4%、8.9%,GD组分别为71.4%、25.5%、3.1%,CN组分别为74.7%、23.2%、2.1%,THPP组TC+CC基因型和C等位基因频率显著高于GD组和CN组(P值均<0.05),GD组与CN组的差异无统计学意义(P值均>0.05);②在CACNA1S基因1564位点, THPP组CC、CT、TT基因型频率分别为70.0%、26.7%、3.3%,GD组分别为84.7%、14.3%、1.0%,CN组分别为86.3%、12.6%、1.1%,THPP组CT+TT基因型和T等位基因频率显著高于GD组和CN组(P值均<0.05),GD组与CN组的差异无统计学意义(P值均>0.05)。结论CACNA1S基因11外显子1551T/C多态性位点和1564C/T多态性位点可能与中国西南地区汉族男性THPP的发生有关。

L型钙离子通道α1C基因多态性与氨氯地平降压疗效相关性分析

目的探讨L型钙离子通道α1C基因（CACNA1C）多态性与氨氯地平降压疗效的相关性,为指导临床合理用药提供理论依据。方法选取医院2014年1月至2015年1月收治的原发性高血压患者92例,经过2周洗脱期后均给予苯磺酸氨氯地平片2.5 mg/d的降压方案,疗程为4周。4周后根据血压下降幅度将患者分为氨氯地平高效组[收缩压下降幅度（ΔSBP）≥20 mmHg]、中效组（10 mmHg≤ΔSBP〈20 mmHg）和低效组（ΔSBP〈10 mmHg）,记录3组患者性别、年龄、体重指数（BMI）等一般资料,并采用聚合酶链式反应（PCR）-直接测序法对患者CACNA1C基因rs2238032、rs2239128及rs1051375等位点进行分型,经单因素χ^2检验和Logistic多因素回归方法分析影响氨氯地平降压疗效的因素。结果 3组患者的收缩压（SBP）和舒张压（DBP）的基线水平比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,其中高效组、中效组的SBP和DBP的基线水平均明显高于低效组（P〈0.05）;3组患者的BMI比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,其中高效组和中效组BMI明显低于低效组（P〈0.05）;rs2238032位点不同型别的降压幅度由高到低依次为TT型（突变型纯合子）、GT型（野生型杂合子）和GG型（野生型纯合子）,两两比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。经Logistic多因素回归分析,患者BMI、血压基线水平和rs2238032基因型是影响氨氯地平降压疗效的相关因素。结论原发性高血压患者的BMI、血压基线水平及rs2238032基因型与氨氯地平疗效明显相关,临床应参考相关因素制订合理的用药方案。

pQE32-HPV18 L1重组质粒的构建及鉴定

目的 构建重组原核表达质粒获得HPV1 8L1活性蛋白 ,为进一步研制HPV1 8基因工程疫苗打下基础。方法 以重组质粒pBR32 2 HPV1 8为模板 ,利用PCR方法扩增HPV1 8L1DNA片段 ,将HPV1 8L1DNA与pUC1 9质粒重组构建pUC1 9 HPV1 8L1重组质粒。用酶切电泳验证重组结果的正确性 ;并通过测序检查质粒重组后序列有无变化。再利用pQE32质粒做表达载体构建pQE32 HPV1 8L1重组质粒 ,并用酶切电泳验证。结果 PCR扩增DNA片段约为 1 .7Kb ,与预期结果相同。pUC1 9 HPV1 8L1克隆重组质粒酶切后显示 4 .39Kb ,酶切图谱与预期相同。测序验证插入片段全序列无改变。pQE32 HPV1 8L1表达重组质粒酶切后显示其大小约 5 .1 6Kb ,酶切图谱亦与预p期相同。结论 pQE32 HPV1

CACNA1C基因多态性与中国新疆维吾尔族精神分裂症患者的相关性研究

目的:探究L型钙离子通道α1C亚基(CACNA1C)多态性与新疆维吾尔族精神分裂症患者的相关性。方法:选取2010年5月至2016年5月在我区治疗的新疆维吾尔族精神分裂症患者985例为病例组,并以2016年1月至5月健康体检者1123例为对照组。采用Taqman探针分型对CACNA1C基因rs1006737、rs2239015位点进行基因分型,观察等位基因及基因型与精神分裂症发病风险的关系;比较两组CACNA1C基因rs1006737、rs2239015位点基因型与等位基因频率;比较两组阳性与阴性症状量表(PANSS)评分;分析CACNA1C基因rs1006737位点(A/G)、rs2239015位点(C/T)多态性与精神分裂症及PANSS评分的相关性。结果:病例组rs1006737位点A等位基因频率低于对照组(P<0.05);经多元Logistic回归分析,精神分裂症家族史、CACNA1C基因rs1006737位点(GG型)、rs2239015位点(TT型)与精神分裂症患病因素呈正相关(P<0.05)。结论:新疆维吾尔族精神分裂症患者CACNA1C基因rs1006737位点(GG型)、rs2239015位点(TT型)基因检出率较高,并且CACNA1C基因rs1006737位点(GG型)、rs2239015位点(TT型)与患者PANSS量表评分呈正相关,可能是精神分裂症的危险因素。

人乳头瘤病毒18型主要衣壳蛋白原核表达系统的构建及鉴定

目的构建重组原核表达质粒获得人乳头瘤病毒18型(HPV18)主要衣壳蛋白,为进一步研制HPV18基因工程疫苗打下基础。方法以重组质粒pBR322-HPV18为模板,利用PCR方法扩增HPV18L1 DNA片段,将HPV18L1 DNA与pUC 19质粒重组构建pUC19-HPV18L1重组质粒;用酶切电泳验证重组结果的正确性;并通过测序检查质粒重组后序列有无变化;再利用pQE32质粒做表达载体构建重组质粒pQE32-HPV18L1,并用酶切电泳验证;利用SDS-PAGE检测HPV18L1目的蛋白;利用Western杂交鉴定HPV18L1目的蛋白的特异性。结果PCR扩增DNA片段约为1.7kb,与预期结果相同;克隆重组质粒pUC19-HPV18L1酶切后显示的酶切图谱与预期相同,而且测序验证插入片段全序列无改变;表达重组质粒pQE32-HPV18L1酶切图谱亦与预期相同;SDS-PAGE显示,约63×103处可见目的蛋白带,与预期结果一致;Western杂交鉴定,在Mr约63×103处可见目的条带,与预期结果一致。结论成功构建原核表达重组质粒pQE32-HPV18L1并能表达HPV18主要衣核蛋白。

尖锐湿疣组织中人乳头瘤病毒6和11型的感染率及其L1基因的表达

目的了解尖锐湿疣组织标本中人乳头瘤病毒6型（HPV-6）和11型（HPV-11）感染率的差异,构建HPV-6型主要衣壳蛋白L1基因原核表达系统,建立ELISA方法检测标本中L1基因表达情况.方法采用基于HPV-6型和HPV-11型11基因的双重PCR,检测尖锐湿疣组织标本中HPV-6型和HPV-11型的感染率;采用PCR扩增HPV-6型全长L1基因,T-A克隆后测序,构建原核表达系统pET32a-L1-E.coli BL21（DE3）,采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rL1的表达.制备rL1兔抗血清,用免疫双扩散试验检测抗血清的效价;建立ELISA方法检测标本中L1基因的表达情况.结果116例患者尖锐湿疣组织标本中,92.2%（107/116）检出HPV-6型和/或HPV-11型.其中单一HPV-6型阳性者占70.1%（75/107）,单一HPV-11型阳性者占23.4%（25/107）,HPV-6型和HPV-11型混合感染者占6.5%（7/107）.与报道的相应序列比较,所克隆的HPV-6型L1基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为99.20%～99.93%和99.80%～100%.IPTG能诱导rL1表达,rL1兔抗血清免疫双扩散效价为1：4.尖锐湿疣组织标本88.8%（103/116）检出L1蛋白.结论成功地构建了HPV-6型L1基因原核表达系统,并建立了HPV-6型和HPV-11型L1基因分型的双重PCR和L1蛋白ELISA检测方法.浙江省尖锐湿疣患者主要感染HPV-6型,病灶中HPV高频率表达病毒主要衣壳蛋白L1.

lncRNA KCNQ1OT1调控miR-384/CACNA1C轴对心肌细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA钾电压门控通道亚家族Q成员1反向转录物1(lncRNA KCNQ1OT1)调控miR-384/L型钙离子通道α1C亚基基因(CACNA1C)轴对心肌细胞增殖、凋亡的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot分别检测正常培养的大鼠心肌H9c2、CP-R073细胞及缺氧/复氧(H/R)诱导的H9c2、CP-R073细胞中的KCNQ1OT1、miR-384、CACNA1C蛋白表达。将H9c2细胞分为Ct组、Model组、si-NC组、si-KCNQ1OT1组、mimic NC组、miR-384 mimic组、si-KCNQ1OT1+inhibitor NC组、si-KCNQ1OT1+miR-384 inhibitor组。除Ct组外,其他组H9c2细胞均需转染对应物质后构建H/R损伤模型。qRT-PCR检测细胞中KCNQ1OT1、miR-384表达;CCK-8法、EdU染色检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测细胞中肌红蛋白(Mb)、肌钙蛋白-Ⅰ(cTnⅠ)水平;Western blot检测CACNA1C、增殖细胞核抗原(PCNA)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证KCNQ1OT1与miR-384、miR-384与CACNA1C的关系。结果H/R诱导的H9c2、CP-R073细胞中KCNQ1OT1、CACNA1C蛋白表达升高,miR-384表达降低,且H/R诱导的H9c2细胞中KCNQ1OT1、CACNA1C蛋白表达最高,miR-384表达最低,因此,后续选择H9c2细胞为研究对象。与Ct组比较,Model组细胞中KCNQ1OT1、细胞凋亡率、Mb、cTnⅠ水平、CACNA1C、Caspase-3、Bax蛋白表达升高,miR-384表达、D 450值、EdU阳性率、PCNA蛋白表达降低(P<0.05);沉默KCNQ1OT1或过表达miR-384可促进H/R诱导的H9c2细胞增殖,抑制细胞凋亡;miR-384 inhibitor减弱了沉默KCNQ1OT1对H/R诱导的H9c2细胞增殖的促进作用,以及对细胞凋亡的抑制作用;KCNQ1OT1靶向调控miR-384/CACNA1C轴。结论沉默KCNQ1OT1可能通过上调miR-384来抑制CACNA1C表达,进而促进H/R诱导的H9c2细胞增殖,抑制细胞凋亡。

体质量指数和L型钙离子通道α1C基因多态性对小剂量氨氯地平降压疗效的交互作用

目的研究体质量指数(BMI)和L型钙离子通道α1C基因(CACNA1C)单核苷酸多态性(SNP)对小剂量氨氯地平降压疗效的交互作用。方法采用PCR直接测序法对服用以氨氯地平为主要降压药物的原发性高血压患者181例的CACNA1C基因SNPrs1051375、rs2238032、rs2239050、rs2239128等位点进行基因分型。采用多因素方差分析和有序Logistic回归方法分析BMI和SNP对降压疗效的交互作用。结果经多元线性回归方法调整基线血压、年龄、性别、尿酸、三酰甘油、药物等因素后,BMI和rs2238032G/T位点与用药后收缩压降幅均相关(B=-0.612,P=0.044;B=11.818,P=0.037),rs2238032G/T位点与用药后舒张压降幅亦相关(B=12.450,P=0.001)。多因素方差分析显示rs2238032G/T位点基因型与BMI存在交互作用(P<0.05),携带rs2238032G/T位点TT基因型和BMI正常(<25kg/m2)患者对氨氯地平的降压疗效高于携带GT和GG基因型的超重患者。有序Logistic回归分析亦显示出rs2238032G/T位点GT基因型与BMI存在交互作用的趋势(B=0.212,P=0.066)。结论 BMI和CACNA1C基因rs2238032G/T位点基因型对小剂量氨氯地平的降压疗效可能存在交互作用。

白芍提取物对PMS肝气郁证大鼠下丘脑Cav1.2介导的CaM/CaMK Ⅱ/BDNF信号通路的影响

目的:本文主要探讨白芍提取物对PMS肝气郁证大鼠下丘脑Cav1.2钙通道关键蛋白CACNA1C及其下游信号通路中CaM、BDNF蛋白表达和对CaMKⅡ磷酸化的影响,从而明确白芍提取物治疗肝气郁结证的分子作用靶点。方法:利用慢性束缚应激法制备PMS肝气郁证大鼠模型,使用白芍提取物进行药物干预。模型制备成功后检测下丘脑CACNA1C蛋白表达,以及下游信号通路中CaM、BDNF蛋白表达和CaMKⅡ的磷酸化水平。离体培养海马原代神经元,通过KCl激活L型钙通道,检测白芍提取物中的有效成分单体芍药苷对细胞内钙超载的影响。结果:PMS肝气郁证大鼠下丘脑CACNA1C蛋白表达增加,CaMKⅡ磷酸化水平提高,BDNF表达减少,说明白芍提取物可显著改善上述蛋白表达异常的现象,抑制KCl激活的L型钙通道引起的细胞内钙离子浓度的增加。结论:白芍提取物可能是通过调控细胞内Cav1.2,抑制其下游CaM/CaMKⅡ信号通路的活化发挥治疗PMS肝气郁证的作用。

L型钙离子通道α1C亚基基因多态性与钙通道阻滞药降压疗效的关系

目的观察终末期肾病(ESRD)患者L型钙离子通道α1C基因(CACNA1C)多态性和二氢吡啶类钙通道阻滞药降压疗效的关系。方法入选215例ESRD患者,用聚合酶链式反应(PCR)-直接测序法检测CACNA1C基因多态性,同时多元线性回归分析基因型与钙通道阻滞药降压疗效间的关系。结果 CACNA1C基因频率分布符合Hardy-Weinberg平衡分布。rs2238032 GT型携带者与TT型比较,血红蛋白(Hb)水平显著增加(117.53±20.89)vs(99.52±20.59)g·L^(-1)(P<0.01)。rs1051375高血压未控制组中AA型与GA、GG型比较,血肌酸酐显著降低(656.79±288.74)vs(937.8±295.15)vs(1113.2±433.44)μmol·L^(-1)(P<0.01)。rs2239128 CT型携带者与TT型和CC型比较,治疗有效者明显增加(P<0.01),CT型舒张压降幅(ΔDBP)表现出增加的趋势(P<0.05)。rs2238032基因型与血压的降幅相关(P<0.001),TT型收缩压降幅(ΔSBP)和ΔDBP明显高于GT型(P<0.01)。结论 CACNA1C基因多态性与钙通道阻滞药的降压疗效相关。

人乳头瘤病毒重组质粒的构建及蛋白表达

目的 构建重组原核表达质粒获得人乳头瘤病毒 18型L1片段 (HPV18L1)活性蛋白 ,为进一步研制人乳头瘤病毒 18型 (HPV18)基因工程疫苗打下基础。方法 以重组质粒 (pBR32 2 -HPV18)为模板 ,利用PCR方法扩增HPV18L1DNA片段 ,将HPV18L1DNA与质粒 (pUC19)重组构建重组质粒 (pUC19-HPV18L1)。用酶切电泳验证重组结果的正确性 ;并通过测序检查质粒重组后序列有无变化。再利用质粒 (pQE32 )做表达载体构建重组质粒(pQE32 -HPV18L1) ,并用酶切电泳验证。将重组质粒 pQE32 -HPV18L1转入工程菌 (M 15 ) ,用酶切电泳验证重组工程菌 (pQE32 -HPV18L1/M15 )正确性。利用SDS -聚丙酰胺凝胶电泳 (SDS -PAGE)检测HPV18L1目的蛋白。采用不同浓度异丙基 - β-D -半乳糖苷 (IPTG)、不同诱导时间来优化HPV18L1目的蛋白表达条件。利用Western印迹检测蛋白质 (Westernblot)鉴定HPV18L1目的蛋白的特异性。结果 PCR扩增DNA片段约为 1 7Kb ,与预期结果相同。克隆重组质粒 pUC19-HPV18L1酶切后显示的酶切图谱与预期相同 ,而且测序验证插入片段全序列无改变。表达重组质粒 pQE32 -HPV18L1酶切图谱亦与预期相同。蛋白表达条件优化结果为 1mmol/LIPTG诱导 4h后 ,获得HPV18L1最佳蛋白表达量 :SDS -PAGE显示 ,约 6

CACNA1C基因多态性与精神分裂症的关联研究

目的探讨L型钙离子通道cdC亚基（calcium channel，voltage-dependent，Ltype，Mpha 1C subunit，CACNA1C）基因多态性与精神分裂症的关联。方法纳入1432例精神分裂症患者及1153名正常对照，采用连接酶检测一聚合酶链反应（1igasedetectionreaction—polymerasechainreaction，LDR．PCR）方法对CACNAlC基因rs1006737、rs1024582位点进行基因分型，观察其等位基因及基因型与精神分裂症发病风险的关系。结果患者组rs1006737位点的基因分布（A、G等位基因频率分别为5．3％、94．7％，AA、AG、GG基因型频率分别为O．2％、10．2％、89．6％）与对照组（A、G等位基因频率分别为4．0％、96．0％，AA、AG、GG基因型频率分别为0．4％、7．4％、92．3％）比较，差异有统计学意义（P〈0．05），患者组rsl024582位点的基因分布（A、G等位基因频率分别为4．9％、95．1％，AA、AG、GG基因型频率分别为0．2％、9．3％、90．5％）与对照组（A、G等位基因频率分别为4．0％、96．O％，AA、AG、GG基因型频率分别为0．1％、7．8％、92．1％）比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。rs1006737位点G等位基因（OR=1．332，95％CI=1．016～1．746）与精神分裂症相关联（P〈0．05）。结论本研究支持在汉族人群中CACNA1C基因rs1006737位点多态性与精神分裂症相关联。