微RNA-27a介导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的作用机制

目的研究微RNA 27a(miR 27a)介导3T3 L1脂肪细胞胰岛素抵抗的作用机制。方法将3T3 L1细胞诱导分化为脂肪细胞,采用肿瘤坏死因子 α(TNF α)法建立3T3 L1脂肪细胞的胰岛素抵抗模型,检测miR 27a对3T3 L1细胞葡萄糖摄取的影响,蛋白质印迹法(Western Blot)检测miR 27a对胰岛素信号通路的影响。实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(qPCR)及双荧光素酶报告基因检测法检测miR 27a的作用靶点。结果miR 27a介导了3T3 L1脂肪细胞的胰岛素抵抗[正常对照组,模型组,miR 27a mimics+模型组,miR 27a inhibitor+模型组四组的吸光度值分别为(2.03±0.20),(1.28±0.27),(1.43±0.20),(1.97±0.18),P<0.01],蛋白质印迹法显示miR 27a抑制了胰岛素信号通路中胰岛素受体底物1(IRS1)及Akt蛋白的磷酸化。qPCR显示miR 27a抑制了过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达[对照组和mir 27a组的相对值分别为(1.00±0.08)和(0.59±0.14),P=0.0048],双荧光素酶报告基因检测验证了PPARγ为miR 27a的作用靶点[PPARγWT+miR NC,PPARγWT+miR 27a,PPARγMut+miR NC,PPARγMut+miR 27a四组的相对荧光值分别为(5.37±0.80)、(3.17±0.57)、(4.94±0.63)、(4.68±0.74),P<0.01]。结论miR 27a通过抑制胰岛素信号通路及靶向PPARγ介导3T3 L1细胞胰岛素抵抗。

LYRM1基因过表达对3T3-L1脂肪细胞线粒体代谢的影响

目的观察LYRM1基因过表达对3T3-L1脂肪细胞线粒体代谢的影响。方法体外培养3T3-L1前体脂肪细胞,分别构建LYRM1基因过表达细胞株(LYRM1-pcDNA3.1/myc-His B)和空载对照细胞株(pcDNA3.1/myc-His B);实时定量RT-PCR验证转染情况;RT-PCR检测诱导分化成熟后的线粒体代谢酶HKI,ACC,CS,CPT1和Cyc-C基因表达水平。结果 RT-PCR结果证实LYRM1质粒转染成功;与空载对照组比较,LYRM1过表达组HKI,ACC,CS,CPT1和Cyc-C mRNA表达水平均显著降低(P均<0.05)。结论 LYRM1基因过表达下调了3T3-L1脂肪细胞中线粒体的代谢关键酶基因表达水平,可能参与调节脂肪细胞线粒体的代谢。

DHA对IFN-γ诱导的3T3L1脂肪细胞MHCⅡ及炎症分子表达的影响

目的探讨二十二碳六烯酸(DHA)对IFN-γ诱导的3T3L1脂肪细胞组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)及炎症分子MCP-1、IL-6、iNOS表达的影响。方法 3T3L1脂肪细胞诱导分化成成熟脂肪细胞,加入IFN-γ诱导炎症反应,再加入DHA处理,通过real time-PCR及Western blot观察DHA对分化成熟的脂肪细胞MHCⅡ及炎症分子MCP-1、IL-6、iNOS表达的影响。结果分化成熟的脂肪细胞加入IFN-γ后,MHCⅡ的相关基因Ciita及H2Ab1,炎症分子MCP-1、IL-6、iNOS明显上升,加入DHA后,Ciita、H2Ab1、iNOS、IL-6表达明显下调,MCP-1的变化比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 DHA能明显下调IFN-γ诱导的3T3L1成熟脂肪细胞MHCⅡ及炎症分子表达,DHA通过下调MHCⅡ基因改善脂肪细胞的炎症。

gAd对3T3-L1脂肪细胞肉碱酯酰转移酶-1表达的影响

目的探讨脂联素球状结构域(gAd)对3T3-L1脂肪细胞肉碱酯酰转移酶-1的影响。方法用gAd蛋白干预分化成熟的3T3-L1脂肪细胞,干预结束后用RT-PCR法检测各组细胞脂肪酸分解途径关键酶肉碱酯酰转移酶-I转录水平的变化,用Western blot法检测各组细胞肉碱酯酰转移酶-1翻译水平的变化。结果与对照组相比,各实验组肉碱酯酰转移酶-1在转录和翻译水平的表达均显著增高(P<0.001),且呈剂量依赖性。结论 gAd蛋白能够激活3T3-L1脂肪细胞内脂肪酸的分解途径,促进脂肪酸氧化。

睾酮对3T3-L1脂肪细胞胰岛素敏感性影响的机制研究

目的:探讨睾酮(T)对离体3T3-L1脂肪细胞胰岛素(Ins)信号通路影响的分子机制。方法:将3T3-L1前脂肪细胞诱导成熟,用10-5 mol/L T处理12 h,免疫印迹检测细胞Ins受体底物-1(IRS-1)的酪氨酸磷酸化水平及其总蛋白IRS-1、葡萄糖转运蛋白-4(GLUT-4)的表达,以及Ins刺激下膜蛋白GLUT-4的表达。加入核因子-κB(NF-κB)或ERK1/2的抑制剂预处理,再用免疫印迹检测细胞总蛋白中IRS-1的酪氨酸磷酸化水平及其总蛋白IRS-1、GLUT-4的表达,以及Ins刺激下膜蛋白GLUT-4的表达,[3H]-2-脱氧葡萄糖([3H]-2-DG)掺入法检测葡萄糖摄取率。结果:10-5 mol/L睾酮处理12 h与非T处理组相比,细胞总蛋白IRS-1及GLUT-4的表达均增多(P<0.05),但使Ins刺激下的IRS-1的酪氨酸磷酸化水平及膜蛋白GLUT-4的表达减少(P<0.05),加入ERK1/2或NF-κB的抑制剂后,IRS-1的酪氨酸磷酸化水平及膜蛋白GLUT-4的表达、葡萄糖摄取率能部分逆转。结论:ERK1/2/NF-κB信号通路是睾酮引起胰岛素抵抗(IR)的途径之一。

胰高血糖素样肽-1对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞脂肪酸代谢的作用及机制

目的研究胰高血糖素样肽-1(GLP1)对胰岛素抵抗3T3L1脂肪细胞脂肪酸代谢的作用及机制。方法采用高糖高胰岛素造成胰岛素抵抗3T3L1脂肪细胞模型,通过ELISA及Western blot等方法观察GLP1对此模型脂肪酸代谢的影响及机制。结果 ELISA结果显示,GLP1对胰岛素抵抗3T3L1脂肪细胞中游离脂肪酸(FFA)的含量影响与胰岛素相关:在有胰岛素(100 nmol.L-1)存在时,GLP1可增加上清液中FFA含量;而无胰岛素存在时,GLP1可减少上清液中FFA含量。GLP1升高细胞中脂肪酸合成酶(FAS)表达量的作用也必须依赖胰岛素的存在。Western blot结果显示在有胰岛素存在时,GLP1可促进蛋白激酶B(PKB)磷酸化;而无胰岛素存在时则无此作用。PKB磷酸化的抑制剂LY294002或Wortmannin可阻断胰岛素存在时GLP1对PKB磷酸化的促进作用及对上清液FFA含量的升高作用。另外,在有(无)胰岛素存在时,GLP1均可降低激素敏感性脂肪酶(HSL)的蛋白表达量。结论 GLP1可增强胰岛素抵抗3T3L1脂肪细胞对胰岛素的敏感性并降低HSL的含量;胰岛素可影响GLP1对胰岛素抵抗3T3L1脂肪细胞脂肪酸代谢的调节作用。

丁香酚通过激活cAMP抑制3T3⁃L1前脂肪细胞分化

为研究丁香酚对3T3⁃L1前脂肪细胞成脂分化过程的影响及其分子机制,以未分化的3T3⁃L1前脂肪细胞为对照组,3⁃异丁基⁃1⁃甲基黄嘌呤、地塞米松、胰岛素和罗格列酮诱导分化的成熟脂肪细胞为模型组,探究3T3⁃L1细胞分化过程中的丁香酚处理对脂质积累的影响;使用腺苷酸环化酶抑制剂SQ22536处理细胞,探究环腺苷酸(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)在丁香酚抑制脂质积累中发挥的关键作用。结果表明,与模型组相比,50µmol/L丁香酚处理显著降低脂质含量(P<0.0001),显著升高胞内cAMP水平(P<0.01)。当培养基中存在SQ22536时,丁香酚对3T3⁃L1细胞成脂分化过程中脂质积累的抑制作用由24.7%被削弱至6.7%,而丁香酚对细胞内cAMP水平的促进效果被完全消除。实时荧光定量聚合酶链式反应分析结果表明,丁香酚显著下调3T3⁃L1细胞成脂分化过程中脂质生成基因CEBPα(P<0.05)和aP2(P<0.01)的表达,显著上调产热相关基因UCP1的表达(P<0.01);SQ22536处理削弱或完全消除丁香酚对3T3⁃L1细胞脂质积累的抑制作用。因此,丁香酚可有效抑制3T3⁃L1细胞脂质积累,其作用机制与cAMP的激活有关。

紫甘薯花色苷制备及其抑制3T3-L1前脂肪细胞生长增殖研究

目的:制备紫甘薯花色苷提取物并分析其主要成分,研究其对3T3-L1前脂肪细胞生长增殖的抑制作用。方法:应用响应曲面法优化提取条件;用高效液相色谱法(HPLC)分析其主要成分;以3T3-L1前脂肪细胞为体外模型,利用MTT法得到最佳铺板密度,得到细胞生长曲线,从而在最佳密度和对数生长期检测不同浓度紫甘薯花色苷提取物对3T3-L1前脂肪细胞的增殖的影响。结果:花色苷提取物总量达到39.79 mg/g;选择细胞接板密度为5×103 cfu/mL,细胞铺板12h之后继续培养24 h,紫甘薯花色苷从最低质量浓度15.625μg/mL时即相对于空白组能显著抑制3T3-L1前脂肪细胞生长增殖的作用(P<0.05)且具有剂量效应关系,紫甘薯花色苷半数抑制浓度IC50为(413.853±2.617)μg/mL。结论:体外细胞实验显示紫甘薯花色苷具有抑制脂肪细胞生长增殖,提示紫甘薯花色苷具有预防肥胖的作用。