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子宫颈病变中HPV L1蛋白和p16的表达 被引量:23
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作者 李俐 黄文斌 +4 位作者 黄悦 赵有财 杨小兵 王劲松 赵建华 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期576-579,共4页
目的研究HPV L1蛋白和p16在子宫颈各种病变中的表达情况,探讨它们在子宫颈病变进展中的预测价值。方法应用免疫组化方法检测41例各种子宫颈病变(CIN1级18例、CIN2级9例、CIN3级8例和浸润性鳞状细胞癌6例)中HPV L1蛋白和p16的表达。结果H... 目的研究HPV L1蛋白和p16在子宫颈各种病变中的表达情况,探讨它们在子宫颈病变进展中的预测价值。方法应用免疫组化方法检测41例各种子宫颈病变(CIN1级18例、CIN2级9例、CIN3级8例和浸润性鳞状细胞癌6例)中HPV L1蛋白和p16的表达。结果HPV L1蛋白在各种子宫颈病变中的阳性率为26.8%。其中HPV L1在CIN1中的阳性表达率为38.9%,CIN2为44.4%,CIN3和浸润性鳞状细胞癌均无表达。p16在各种子宫颈病变中的阳性率为68.3%,其在CIN1中的阳性表达率为38.9%,CIN2为77.8%,CIN3和浸润性鳞状细胞癌均表达阳性。100%CIN3和浸润性鳞状细胞癌为p16+/HPV L1-,而61.1%CIN1中为p16-/HPV L1+或p16-/HPV L1-。结论随着子宫颈病变的进展,HPV L1阳性表达率降低而p16阳性表达率增高。p16+/HPV L1-提示子宫颈鳞状上皮内瘤变有进展的可能,而p16-/HPV L1+和p16-/HPV L1-可能为无进展的或潜在消退的子宫颈病变。 展开更多
关键词 子宫颈肿瘤 上皮内瘤变 HPV l1蛋白 P16
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人乳头瘤病毒16型L1蛋白B细胞表位预测 被引量:8
2
作者 王爱萍 蒋敏 +5 位作者 栗宁 张改平 祁艳华 刘燕凯 席宇 周景明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期442-445,共4页
目的预测人乳头瘤病毒16型L1(HPV-16 L1)蛋白的B细胞表位。方法先从NCBI的蛋白质数据库中获得HPV-16 L1蛋白的氨基酸序列,再采用DNAStar中的Protean模块分析HPV-16型L1蛋白的二级结构、柔韧性、亲水性、表面可及性以及抗原性,然后结... 目的预测人乳头瘤病毒16型L1(HPV-16 L1)蛋白的B细胞表位。方法先从NCBI的蛋白质数据库中获得HPV-16 L1蛋白的氨基酸序列,再采用DNAStar中的Protean模块分析HPV-16型L1蛋白的二级结构、柔韧性、亲水性、表面可及性以及抗原性,然后结合吴玉章等建立的氨基酸抗原性指数方法计算其平均抗原指数(AI),综合分析上述多个参数,预测其可能的B细胞表位区域,并用在线BLAST进行同源性匹配分析。结果综合分析多个参数,预测得出HPV-16 L1蛋白的B细胞表位可能位于第51~58、87~97、214~220、290~296、335~341、351~366、408~418、430~442和475~496肽段,进一步的同源性匹配分析显示肽段51~58、335~341、351~366、408~418、430~442以及475~496为其B细胞表位优势区域,其中肽段51(PIKKPNNN)58、351(SETTYKNTNFKEYLRH)366、408(PPPGGTLEDTY)418和430(KHTPPAPKEDPLK)442的氨基酸序列为HPV-16型L1蛋白所特有,而肽段475(KAKPKFTLGKRKATPTTSSTST)496与HPV-16 E1蛋白具有同源性、335(DTTRSTN)341的氨基酸序列与很多其他型别的HPV的L1蛋白具有同源性。结论综合多种方案预测得到HPV-16 L1的多个B细胞表位优势区域。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 l1蛋白 宫颈癌 B细胞表位 生物信息学
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截短型人乳头瘤病毒58型L1蛋白的表达及其体外生物活性研究 被引量:7
3
作者 李文生 郑瑾 +4 位作者 刘红莉 陈宏伟 杨军 王一理 司履生 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期536-539,共4页
利用PCR技术克隆截短型HPV5 8L1基因并重组入杆状病毒表达系统穿梭质粒pFastBac Htb ,通过转座反应 ,将目的基因片段重组入杆状病毒基因组 ,分离重组的BacmidDNA ,并转染Sf 9昆虫细胞 ,收集被转染的Sf 9细胞 ,提取细胞蛋白 ,SDS PAGE检... 利用PCR技术克隆截短型HPV5 8L1基因并重组入杆状病毒表达系统穿梭质粒pFastBac Htb ,通过转座反应 ,将目的基因片段重组入杆状病毒基因组 ,分离重组的BacmidDNA ,并转染Sf 9昆虫细胞 ,收集被转染的Sf 9细胞 ,提取细胞蛋白 ,SDS PAGE检测可见在大约 5 8Kda处出现一新生蛋白条带 ,Westernblot证实为HPV5 8L1蛋白。用ProBondTM 纯化系统纯化所表达的蛋白。小鼠红细胞凝集试验证实纯化的蛋白可介导小鼠红细胞凝集 ,透射电镜观察证实纯化蛋白可自组装成VLP。结果表明昆虫杆状病毒表达系统可高效表达截短型HPV5 8L1蛋白 ,纯化后的截短型HPV5 8L1蛋白在体外可自组装VLP 。 展开更多
关键词 截短型HPV58 l1蛋白 昆虫-杆状病毒表达系统 蛋白纯化 病毒样颗粒
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原核表达系统中HPV16L1蛋白的表达与纯化 被引量:3
4
作者 包广宇 谷鸿喜 +3 位作者 林道虹 庄敏 隋丽华 王静 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 2002年第2期280-283,共4页
为了建立 HPV16 L1蛋白原核表达系统的纯化方法 ,纯化目的蛋白 ,我们构建了 p GEX4 T- HPV16 L1表达质粒。在大肠杆菌 BL2 1表达系统中表达 ,经过包涵体提取 ,8M尿素溶解 ,分级透析除去尿素 ,亲和层析进行提纯。结果显示 ,HPV16 L1蛋白... 为了建立 HPV16 L1蛋白原核表达系统的纯化方法 ,纯化目的蛋白 ,我们构建了 p GEX4 T- HPV16 L1表达质粒。在大肠杆菌 BL2 1表达系统中表达 ,经过包涵体提取 ,8M尿素溶解 ,分级透析除去尿素 ,亲和层析进行提纯。结果显示 ,HPV16 L1蛋白在原核表达系统以不溶性包涵体形式存在 ,通过本方法可以获得纯化的 HPV16 L1蛋白 ,为 HPV16 展开更多
关键词 原核表达系统 HPV16 l1蛋白 纯化
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经基因优化的HPV16L1蛋白在毕赤酵母中的表达 被引量:3
5
作者 董金蓉 谢飞 +3 位作者 刘勇 郭仁 彭建新 刘红岩 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第5期333-336,共4页
目的利用毕赤酵母表达系统(Pichia pastoris)高效表达HPV16L1蛋白。方法按照Pichia pastoris密码子偏爱性合成HPV16L1基因,构建pAO819r-16L1表达载体,电转化至GS115菌株中,经MD板和不同浓度G418筛选,挑取高拷贝整合菌株,甲醇诱导目的蛋... 目的利用毕赤酵母表达系统(Pichia pastoris)高效表达HPV16L1蛋白。方法按照Pichia pastoris密码子偏爱性合成HPV16L1基因,构建pAO819r-16L1表达载体,电转化至GS115菌株中,经MD板和不同浓度G418筛选,挑取高拷贝整合菌株,甲醇诱导目的蛋白的表达,用HPV16L1抗血清,经Western blot检测蛋白的特异性。结果重组质粒pAO819r-16L1在甲醇营养型酵母菌株中经甲醇诱导后可表达HPV16L1蛋白,在试管中的表达量超过10mg/ml,经Western blot验证,该蛋白可与抗血清特异结合,在相对分子质量55000附近出现目的条带,证明该蛋白确为HPV16L1蛋白。结论利用毕赤酵母表达系统可高效表达HPV16L1蛋白,为研制HPV疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 l1蛋白 毕赤酵母 基因优化
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HPVL1蛋白在宫颈鳞状上皮内病变中的表达及意义 被引量:7
6
作者 张静 张亚静 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第19期3199-3201,共3页
目的:探讨HPV L1蛋白在宫颈鳞状上皮内病变(SIL)中的表达及意义。方法 :以免疫组织/细胞化学和非同位素标记核酸分子杂交技术为基础,在免疫水平和核酸水平上检测73例SIL患者中HPV L1蛋白的表达情况,取40例液基细胞学中宫颈无上皮内病变... 目的:探讨HPV L1蛋白在宫颈鳞状上皮内病变(SIL)中的表达及意义。方法 :以免疫组织/细胞化学和非同位素标记核酸分子杂交技术为基础,在免疫水平和核酸水平上检测73例SIL患者中HPV L1蛋白的表达情况,取40例液基细胞学中宫颈无上皮内病变或恶性病变(NILM)作对照。结果:HPV L1蛋白在NILM中的阳性率是10.0%(4/40),在宫颈低度鳞状上皮内病变(LSIL)中的阳性率是54.2%(26/48),差异具有统计学意义(P<0.01)。HPV L1蛋白在宫颈高度鳞状上皮内病变(HSIL)中的阳性率是16.0%(4/25),与LSIL比较差异具有统计学意义(P<0.01)。HPV L1蛋白在不大于45岁SIL患者的阳性率是44.0%(22/50),在45岁以上SIL患者的阳性率是34.8%(8/23),差异无统计学意义(P>0.05)。结论:(1)SIL的发生、发展可能和HPV L1蛋白的异常表达有关。(2)HPV L1蛋白可作为预测SIL发展的指标,协助临床处理。 展开更多
关键词 宫颈上皮内瘤样病变 宫颈鳞状上皮内病变 HPV l1蛋白 液基细胞学
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按酵母基因优化的HPV6型L1蛋白在大肠杆菌中高效表达 被引量:1
7
作者 李平川 张晓光 +1 位作者 周玲 曾毅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期266-269,共4页
Human papillomavirus 6(HPV6) causes a common sexually transmitted disease,the genital warts.L1-capsid protein is a highly promising preventive vaccine that has entered phase Ⅱ clinical trial.But the existing methodol... Human papillomavirus 6(HPV6) causes a common sexually transmitted disease,the genital warts.L1-capsid protein is a highly promising preventive vaccine that has entered phase Ⅱ clinical trial.But the existing methodologies for producing L1-capsid protein in insect cells is expensive for use in developing countries.In order to get larger amount of L1 protein in E.coli economically,we rebuilt whole L1 gene with preferred codons for yeast P.pastoris,abolished A-T rich regions,subcloned the modified L1 gene (mL1) into pTXB1 and induced expression by IPTG.SDS-PAGE and Western blot showed that mL1-6×His fused proteins could be overexpressed in BL21(DE3).This success will facilitate the HPV vaccine development and structure-function study. 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒6型 l1蛋白 酵母 基因优化 表达 大肠杆菌
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人乳头瘤病毒-6L1蛋白B-细胞优势表位作为多肽疫苗的研究 被引量:2
8
作者 李元朝 吕凤林 +4 位作者 曹伟 左国伟 艾军华 金丹 胡承香 《中国病毒学》 CSCD 2004年第6期541-544,共4页
本研究分析了人乳头瘤病毒-6 型 L1 外壳蛋白之 B-细胞优势表位,并拟以此为基础制作表位多肽疫苗。研究中采用 Goldkey 和 PC/Gene 软件系统综合分析 HPV6 之 L1 蛋白 B-细胞优势表位后,Fmoc 固相合成表位多肽,通过 HPLC 纯化和毛细管... 本研究分析了人乳头瘤病毒-6 型 L1 外壳蛋白之 B-细胞优势表位,并拟以此为基础制作表位多肽疫苗。研究中采用 Goldkey 和 PC/Gene 软件系统综合分析 HPV6 之 L1 蛋白 B-细胞优势表位后,Fmoc 固相合成表位多肽,通过 HPLC 纯化和毛细管电泳分析其纯度。与佐剂完全乳化后,免疫小鼠,进行动物水平的免疫效果评价。取免疫小鼠血清,与 HPV-6 DNA 阳性的尖锐湿疣患者疣体组织上清液结合,以鉴定免疫小鼠所产生抗体的特异性。发现 L1 蛋白第 425-439 位和第 486-500 位具有较高的免疫原性,可明显诱导小鼠血清抗体滴度升高,且该抗体与人尖锐湿疣疣体组织上清液呈阳性反应。说明所选这两个肽段为 HPV6 之 L1 蛋白的 B-细胞优势表位,但诱导产生的抗体是否具有功能特异性,正在做进一步研究。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒-6 l1蛋白 B细胞表位 多肽疫苗
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人乳头瘤病毒18型L1蛋白的包涵体和可溶性表达及纯化 被引量:3
9
作者 麻粉莲 张骞 郑丽舒 《生物技术通讯》 CAS 2014年第6期800-803,共4页
目的:原核表达系统表达人乳头瘤病毒18型(HPV18)L1蛋白,建立包涵体和可溶性表达的L1蛋白的纯化方法。方法:构建重组表达质粒p GEX-4T-1-HPV18 L1,在大肠杆菌BL21中以包涵体和可溶性方式表达HPV18 L1蛋白。通过超声波破碎菌体、洗涤包涵... 目的:原核表达系统表达人乳头瘤病毒18型(HPV18)L1蛋白,建立包涵体和可溶性表达的L1蛋白的纯化方法。方法:构建重组表达质粒p GEX-4T-1-HPV18 L1,在大肠杆菌BL21中以包涵体和可溶性方式表达HPV18 L1蛋白。通过超声波破碎菌体、洗涤包涵体、碱变性、透析复性和谷胱甘肽(GST)琼脂糖凝胶4B亲和层析纯化包涵体蛋白;在菌体中加入三磷酸腺苷(ATP)和3.5 mol/L尿素孵育后,GST 4B亲和层析纯化可溶性蛋白,凝血酶酶切。SDS-PAGE和Western印迹鉴定表达和纯化产物。结果:SDS-PAGE结果表明,HPV18 L1蛋白以包涵体和可溶性方式在大肠杆菌BL21内高效表达,均产生相对分子质量约为86 000的HPV18 L1-GST融合蛋白。Western印迹结果显示,包涵体纯化后获得的融合蛋白降解条带较多;而可溶性蛋白纯化后获得的融合蛋白未降解,凝血酶酶切后得到HPV18 L1蛋白,可与HPV18 L1蛋白单克隆抗体结合。结论:采用原核系统表达了HPV18 L1-GST融合蛋白,分别建立了包涵体和可溶性蛋白的纯化方法,获得HPV18 L1蛋白,为其进一步应用奠定了基础。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒18型l1蛋白 包涵体 可溶性蛋白 纯化
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人乳头状瘤病毒L1蛋白与宫颈病变相关性研究进展 被引量:2
10
作者 张岚 玛依努尔·尼亚孜 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期571-574,共4页
人乳头状瘤病毒(HPV)被认为是宫颈癌发生的必要因素,宫颈癌发展期间对宫颈上皮内瘤变早诊断、早治疗可以有效阻止病变进程。HPV Ll蛋白具有与宿主细胞识别并黏附的抗原表位,在HPV感染及引发宫颈癌变过程中发挥重要作用。
关键词 人乳头状瘤病毒 l1蛋白 宫颈癌
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人乳头瘤病毒18型L1蛋白在昆虫杆状病毒系统中的表达 被引量:1
11
作者 麻粉莲 张骞 郑丽舒 《生物技术通讯》 CAS 2015年第6期763-766,共4页
目的:利用昆虫杆状病毒系统表达人乳头瘤病毒18型(HPV18)L1蛋白。方法:将L1基因与p Fast Bac1(p FB1)载体连接,构建转移载体p FB1-L1,转化含Bacmid的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,获得穿梭质粒r Bacmid-L1;r Bacmid-L1转染Sf9细胞,获得重... 目的:利用昆虫杆状病毒系统表达人乳头瘤病毒18型(HPV18)L1蛋白。方法:将L1基因与p Fast Bac1(p FB1)载体连接,构建转移载体p FB1-L1,转化含Bacmid的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,获得穿梭质粒r Bacmid-L1;r Bacmid-L1转染Sf9细胞,获得重组病毒r Bac-L1;PCR法检测重组杆状病毒基因组L1基因,间接免疫荧光法和Western印迹检测L1蛋白的表达。结果:穿梭质粒r Bacmid-L1经PCR鉴定构建正确;感染r Bac-L1的Sf9细胞经PCR扩增可见1629 bp的特异性条带,间接免疫荧光检测可见绿色荧光,Western印迹鉴定与小鼠抗L1单克隆抗体发生特异性反应,在相对分子质量约60 000处可见特异性条带。结论:利用昆虫杆状病毒表达系统表达了HPV18 L1蛋白。 展开更多
关键词 l1蛋白 人乳头瘤病毒18型 杆状病毒 SF9细胞
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人乳头瘤病毒16型L1蛋白的纯化及免疫学活性
12
作者 安静 周旭 +2 位作者 席亮 包红 陈汉泉 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第7期522-524,共3页
目的纯化人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1蛋白,并分析其免疫学活性,为诊断试剂和疫苗的研制奠定基础。方法采用电洗脱的方法纯化目的蛋白,通过免疫双扩散和ELISA法检测其免疫反应性。将该蛋白免疫BALB/c小鼠,分析其免疫原性。结果纯化后的目... 目的纯化人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1蛋白,并分析其免疫学活性,为诊断试剂和疫苗的研制奠定基础。方法采用电洗脱的方法纯化目的蛋白,通过免疫双扩散和ELISA法检测其免疫反应性。将该蛋白免疫BALB/c小鼠,分析其免疫原性。结果纯化后的目的蛋白经凝胶灰度扫描显示,其纯度达到95%,免疫双扩散和ELISA结果显示,宫颈癌病人血清抗体效价明显高于健康人,表明该蛋白具有良好的抗原性,小鼠免疫力试验结果表明该蛋白具有较好的免疫原性。结论电洗脱法得到的目的蛋白纯度较高,且有较好的免疫学活性。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 l1蛋白 纯化 免疫学活性
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人乳头瘤病毒16型L1蛋白表达及其单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立
13
作者 王燕 商庆龙 +4 位作者 谷鸿喜 韩聪 邵迪 李茉 李承刚 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期98-100,共3页
目的表达并纯化重组人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1蛋白,建立分泌抗HPV16 L1单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株。方法以基因工程表达HPV16L1蛋白。用Ni—NTA技术进行纯化后免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经含次黄嘌... 目的表达并纯化重组人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1蛋白,建立分泌抗HPV16 L1单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株。方法以基因工程表达HPV16L1蛋白。用Ni—NTA技术进行纯化后免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经含次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶(HAT)的选择培养基及有限稀释法进行克隆化,用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,对获得的杂交瘤细胞株染色体进行计数.同时测定细胞培养上清mAb的效价。结果筛选出2株可分泌抗HPV16 L1 mAb的杂交瘤细胞,命名为AE3和AG7,染色体数分别为130条和98条。2株杂交瘤细胞AE3和AG7培养上清的效价分别为1:5120和1:80。结论成功建立了2株可分泌抗HPV 16 L1 mAb的杂交瘤细胞,为进一步研制HPV感染检测试剂盒提供实验基础。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 乳头状瘤病毒 l1蛋白 抗体 单克隆
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HPV16 L1蛋白在原核表达系统中的表达与纯化
14
作者 包广宇 林道虹 +4 位作者 庄敏 隋丽华 王静 李迪 谷鸿喜 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 2001年第4期235-237,共3页
目的 建立HPV16L1蛋白原核表达系统的纯化方法 ,纯化目的蛋白。方法 构建pGEX4T HPV16L1表达质粒。在大肠杆菌BL2 1表达系统中表达 ,经过包涵体提取 ,8mol/L尿素溶解 ,分级透析除去尿素 ,亲和层析进行提纯。结果 HPV16L1蛋白在原核... 目的 建立HPV16L1蛋白原核表达系统的纯化方法 ,纯化目的蛋白。方法 构建pGEX4T HPV16L1表达质粒。在大肠杆菌BL2 1表达系统中表达 ,经过包涵体提取 ,8mol/L尿素溶解 ,分级透析除去尿素 ,亲和层析进行提纯。结果 HPV16L1蛋白在原核表达系统以不溶性包涵体形式存在 ,通过本方法可以获得纯化的蛋白。结论 建立了一套纯化HPV16L1蛋白的方法。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16型 原核表达系统 晚期蛋白 纯化 HPV16l1蛋白 宫颈癌
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人乳头瘤病毒18型L1蛋白在大肠埃希菌中的可溶性表达及病毒样颗粒的形成
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作者 安静 付生芳 +4 位作者 李雄雄 包红 寇桂英 白幕群 余黎 《微生物学免疫学进展》 2014年第5期11-16,共6页
目的利用大肠埃希菌系统可溶性表达人乳头瘤病毒18型(HPV18)L1蛋白,纯化和重组装获得HPV18病毒样颗粒(VLPs),为进一步研制HPV18基因工程疫苗奠定基础。方法首先按大肠埃希菌密码子偏好进行HPV18L1全基因合成,经PCR扩增出截短的HPV18L1基... 目的利用大肠埃希菌系统可溶性表达人乳头瘤病毒18型(HPV18)L1蛋白,纯化和重组装获得HPV18病毒样颗粒(VLPs),为进一步研制HPV18基因工程疫苗奠定基础。方法首先按大肠埃希菌密码子偏好进行HPV18L1全基因合成,经PCR扩增出截短的HPV18L1基因,构建重组表达载体PET30a-L1,通过优化表达在大肠埃希菌BL21中可溶性表达L1蛋白,其次采用硫酸铵沉淀、离子交换层析、疏水层析后,获得高纯度的的L1蛋白,再通过解聚和重聚获得VLPs。结果全基因优化并截短的HPV18L1蛋白在大肠埃希菌系统中以可溶形式表达,纯化后的蛋白纯度达到90%以上,电镜下观察到直径为60 nm的VLPs颗粒。结论利用大肠埃希菌系统可溶性表达非融合HPV18L1蛋白,并获得均一的VLPs颗粒,为疫苗的开发奠定基础。 展开更多
关键词 大肠埃希菌表达系统 人乳头瘤病毒18型 l1蛋白 优化 可溶性表达 病毒样颗粒
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HPV16 L1蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性研究
16
作者 商庆龙 谷鸿喜 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2001年第4期15-16,共2页
用IPTG诱导目的工程菌 pQE31 HPV16L1/M 15 (pREP4) ,对表达产物进行SDS PAGE和Westernblot分析 ;用表达的L1蛋白免疫BALB/C小鼠得到抗血清后 ,利用真核源性的VLP粗提物验证小鼠抗血清的特异性。利用IMAC金属亲和层析柱纯化L1蛋白。SDS ... 用IPTG诱导目的工程菌 pQE31 HPV16L1/M 15 (pREP4) ,对表达产物进行SDS PAGE和Westernblot分析 ;用表达的L1蛋白免疫BALB/C小鼠得到抗血清后 ,利用真核源性的VLP粗提物验证小鼠抗血清的特异性。利用IMAC金属亲和层析柱纯化L1蛋白。SDS PAGE结果显示表达产物在约 5 7ku处有蛋白条带 ;Westernblot结果证实此条带可与HPV16L1蛋白的单克隆抗体反应 ;纯化后的L1蛋白也同样保留免疫特异性 ;小鼠抗血清可与HPV16L1VLP(病毒样颗粒 )发生特异性反应 ,证实重组表达的L1蛋白具有免疫原性。本实验表明HPV16L1蛋白在工程菌M15 (pREP4)中高效表达 。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16型 l1蛋白 表达 免疫原性 HPH16 纯化
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分子伴侣促进截短型人乳头瘤病毒58亚型L1蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达 被引量:4
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作者 冉云伟 张改平 +4 位作者 刘运超 陈玉梅 王聚财 孟凤丽 王爱萍 《生物技术通讯》 CAS 2017年第3期295-300,共6页
目的:采用分子伴侣pTf16共表达的形式促进截短型人乳头瘤病毒(HPV)58亚型L1蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达。方法:将重组表达质粒pGEX-6P-HPV58-L1转入含有分子伴侣pTf16的大肠杆菌BL21感受态细胞中,在2.0 mg/mL L-阿拉伯糖诱导表达20 mi... 目的:采用分子伴侣pTf16共表达的形式促进截短型人乳头瘤病毒(HPV)58亚型L1蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达。方法:将重组表达质粒pGEX-6P-HPV58-L1转入含有分子伴侣pTf16的大肠杆菌BL21感受态细胞中,在2.0 mg/mL L-阿拉伯糖诱导表达20 min之后加入1.0 mmol/L的IPTG,18℃诱导表达24 h,使目的蛋白与伴侣蛋白共表达;重组蛋白经GST亲和纯化后去除GST标签免疫昆明鼠,ELISA检测免疫血清效价。结果:分子伴侣pTf16能显著提高目的蛋白的可溶性表达,经纯化及去除GST标签,用SDS-PAGE与Western印迹检测,约在相对分子质量50×103处出现特异性反应条带,该条带与截短型HPV58 L1蛋白预期大小相符,免疫动物后经ELISA检测小鼠血清的抗体效价为1∶6400。结论:获得了截短型HPV58 L1蛋白,动物免疫试验证实该蛋白具有较好的免疫原性,为进一步研制HPV58预防型疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒58亚型 截短型l1蛋白 伴侣分子pTf16
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人乳头状瘤病毒L1蛋白在宫颈上皮内瘤样病变中的表达及临床意义
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作者 唐振利 《大医生》 2020年第18期48-50,共3页
目的通过研究人乳头状瘤病毒(Human Papilloma Virus,HPV)Ll蛋白在不同级别宫颈上皮内瘤样病变(Cervical Intraepithelial Neoplasia,CIN)中的表达,探讨HPV L1蛋白在临床上的应用价值。方法选取2013年12月至2015年12月北京市垂杨柳医院... 目的通过研究人乳头状瘤病毒(Human Papilloma Virus,HPV)Ll蛋白在不同级别宫颈上皮内瘤样病变(Cervical Intraepithelial Neoplasia,CIN)中的表达,探讨HPV L1蛋白在临床上的应用价值。方法选取2013年12月至2015年12月北京市垂杨柳医院收治的经病理结果确诊为CIN合并高危HPV感染的76例患者作为研究对象,免疫组化方法检测不同级别CIN中HPV L1蛋白的表达,并与液基薄层细胞检测(TCT)比较预测结果。结果76例患者中,HPV Ll蛋白总阳性率26.32%(20/76)。低级别鳞状上皮内病变(LSIL)HPV L1蛋白的阳性率为44.12%(15/34),高级别鳞状上皮内病变(HSIL)为11.90%(5/42),差异有统计学意义(P<0.05)。在高危型HPV阳性妇女中,HPV L1蛋白及TCT预测组织学诊断HSIL病变敏感度分别为88.10%、50.00%,二者的阴性预测值分别为75.00%、55.32%,HPV L1蛋白的数值均高于TCT(P<0.05),但二者的特异度44.12%、76.47%,HPV L1低于TCT(P<0.01)。结论HPV L1蛋白可能成为高危型HPV阳性患者的一种合适的分流方法,在提高宫颈上皮内瘤样病变的筛查率中具有一定的临床价值。 展开更多
关键词 人乳头状瘤病毒 l1蛋白 宫颈上皮内瘤变
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宫颈癌组织中HPV16L1蛋白质的表达及意义 被引量:1
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作者 潘贞贞 潘欢 +8 位作者 朱君玲 郑威楠 李洪涛 何鸿昌 任显显 武丹 王红英 杨昕 潘泽民 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2017年第4期458-461,共4页
为探讨人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)16 L1蛋白表达与宫颈癌发生与发展的关系,为防治宫颈癌奠定基础。采用收集宫颈癌患者48例、宫颈上皮内瘤样病变(cervcal intraepithelial neoplasia,CIN)患者41例和慢性宫颈炎患者30例石... 为探讨人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)16 L1蛋白表达与宫颈癌发生与发展的关系,为防治宫颈癌奠定基础。采用收集宫颈癌患者48例、宫颈上皮内瘤样病变(cervcal intraepithelial neoplasia,CIN)患者41例和慢性宫颈炎患者30例石蜡组织标本用于免疫组织化学实验的方法。检测HPV16 L1蛋白在宫颈癌组织、CIN组织和慢性宫颈炎组织中的蛋白质表达状况。HPV16 L1蛋白质免疫组织化学实验的结果显示,慢性宫颈炎组织中阳性率为100%,而在宫颈癌组织中阳性率仅为27.1%,差异有统计学意义(P<0.01)。慢性宫颈炎组织的阳性率明显高于宫颈癌组织。由此可知,HPV16 L1蛋白质在宫颈原位癌开始表达减少,宫颈浸润癌表达减少更明显,可能可以用于诊断CINⅡ和CINⅢ或CINⅡ和宫颈癌。 展开更多
关键词 宫颈癌 HPV16l1蛋白 蛋白表达
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HPV16型L1蛋白优势表位原核表达及其血清学验证 被引量:1
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作者 侯江厚 张灵霞 +3 位作者 孙雯娜 刘艳华 杨秉芬 孙卫国 《检验医学》 CAS 2020年第9期928-932,共5页
目的利用原核系统对人乳头瘤病毒(HPV)16型L1蛋白优势抗原表位进行重组表达与纯化,并检测血清学反应。方法对HPV16型L1蛋白优势抗原表位进行全基因合成,将核酸片段克隆至pET-DsbC原核表达载体,重组质粒转化大肠埃希菌Rosetta(DE3),经异... 目的利用原核系统对人乳头瘤病毒(HPV)16型L1蛋白优势抗原表位进行重组表达与纯化,并检测血清学反应。方法对HPV16型L1蛋白优势抗原表位进行全基因合成,将核酸片段克隆至pET-DsbC原核表达载体,重组质粒转化大肠埃希菌Rosetta(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,采用亲和层析对表达产物进行纯化,采用免疫印迹法、酶联免疫吸附试验(ELISA)验证重组蛋白的免疫学活性。结果成功构建了pET-DsbC-HPV16 L1表达载体,并在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中实现了稳定的可溶性表达。重组DsbC-HPV16 L1蛋白经亲和层析进行纯化,相对分子质量为45000,纯度为95%,重组蛋白纯化得率为22%。免疫印迹法结果显示,重组DsbC-HPV16 L1蛋白可与HPV16型阳性血清产生特异的抗原-抗体反应,与重组DsbC蛋白或健康人血清无交叉反应,具有良好的特异性。ELISA结果显示,重组DsbC-HPV16 L1蛋白与HPV16型阳性血清有较强的免疫反应性,A450 nm均值为0.56,高于健康人血清和磷酸盐缓冲液(PBS)阴性对照(A450 nm均值分别为0.24和0.21)。结论采用原核表达系统实现了HPV16型L1蛋白优势抗原表位的可溶性高表达,获得的重组蛋白具有良好的免疫原性和免疫学活性。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16型l1蛋白 原核表达 免疫原性 血清学反应
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