人乳头瘤病毒18型L1-E6、L1-E7嵌合基因表达载体的构建及表达

目的 构建HPV 18L1 E6、L1 E7嵌合基因的表达载体 ,并在CHO细胞中表达。方法 克隆HPV 18L1 E6和L1 E7基因 ,插入中介载体 pGEMT Easy中并测序鉴定。采用PCR定点突变法 ,突变L1 E6、L1 E7基因序列中与转化作用相关的位点 ,分别与L1基因连接后插入真核表达载体 pVAX1,构建真核表达质粒 pVAX1 L1E6Mxx、 L1E7Mxx。用磷酸钙沉淀法 ,转染CHO细胞 ,以抗HPV 18L1、抗E6和抗E7特异性单克隆抗体 (mAb)做ELISA和免疫细胞化学法检测。结果 ELISA检测显示 ,转染各种pVAX1 L1E6Mxx、 L1E7Mxx融合蛋白表达质粒的细胞提取物的P N值均 >2 .1;免疫细胞化学检测 ,在胞浆、胞核可见棕黄色颗粒。结论 所构建的 pVAX1 L1E6Mxx E7Mxx融合蛋白表达质粒 ,可在转染细胞内表达相应的L1 E6Mxx和L1 E7Mxx蛋白 ,为今后进行DNA疫苗的研究奠定了基础。

HPV_(16)L1-E7重组腺病毒载体疫苗免疫BALB/c小鼠的研究

目的:探讨人乳头瘤病毒16型L1-E7重组腺病毒载体疫苗的免疫效应。方法:①将rAd5HPV16L1-E7载体疫苗在293细胞中扩增后,以肌肉注射、腹腔注射、滴鼻和灌胃途径免疫小鼠,采用ELISA法测其血清IgG抗体水平;②制备脾细胞悬液,加入到96孔无菌培养板中,并分别加入rAd5HPV16L1-E7特异性蛋白和RPMI1640+10%胎牛血清,加入3H-TdR1μCi/孔,做T-细胞增殖实验;③取经过培养56h的培养液进行IFN-γ的测定。结果:不同途径免疫的BALB/c小鼠血清IgG抗体水平均高于对照组(P<0.05),但以肌注组产生抗体量最多,IFN-γ和T-细胞增殖亦高于对照组(P<0.05)。结论:rAd5HPV16L1-E7重组活病毒疫苗既能刺激T-细胞产生细胞介导的免疫应答,又能刺激B-细胞产生抗体介导的免疫应答,说明其具有很好的免疫原性。

人乳头瘤病毒16型L1-E7c嵌合基因的构建表达及免疫学效应的研究

目的构建人乳头瘤病毒16型(HPV16) L1-E7c嵌合基因并表达融合蛋白,以期获得防治HPV16感染及相关肿瘤的疫苗。方法以HPV16型的中国人野毒株为模板,利用PCR克隆技术制备HPV16 L1-E7c嵌合基因,并转入原核表达载体pET28a(+),获得pET28a(+)-L1-E7c表达质粒。以Western blot方法鉴定融合蛋白与HPV16L1和E7抗体的特异性结合。应用蛋白纯化仪纯化HPV16 L1-E7c融合蛋白,经过复性后,电镜观察病毒样颗粒(cVLP)的形态结构。纯化的蛋白免疫动物,测定疫苗抗肿瘤的细胞免疫及抗体产生情况。结果经过序列分析和酶切鉴定表明成功构建了HPV16 L1-E7c嵌合基因,并在大肠杆菌中可高效表达L1-E7c融合蛋白。此融合蛋白具有HPV16 L1和E7的抗原性,纯化的蛋白复性后可形成嵌合病毒样颗粒(cVLP),纯化的蛋白免疫动物后,产生特异性细胞和体液免疫反应,具有抗肿瘤活性。结论构建的嵌合基因HPV16 L1-E7c可有效表达HPV16 L1-E7c重组蛋白并形成cVLP。此蛋白在动物实验中具有疫苗的免疫保护作用,为HPV16疫苗的研究奠定了实验基础。

rBCG-HPV16 E6-E7、rBCG-HPV16 L1-E7疫苗治疗宫颈癌的动物实验观察

研究Balb/c鼠皮下接种CaSki细胞构建宫颈癌模型,皮下分别注射rBCG-HPV16 E6-E7和rBCG-HPV16L1-E7疫苗,观察肿瘤生长情况,及体内CD8+、MHC-I、B7-1分子的表达。结果注射疫苗后肿瘤体积显著缩小,小鼠存活期明显延长,瘤体内CD8+细胞增加;肿瘤细胞表达H-2Db和B7-1分子明显增加。rBCG-HPV16 E6-E7疫苗效果强于rBCG-HPV16L1-E7疫苗。认为rBCG-HPV16 E6-E7疫苗和rBCG-HPV16L1-E7疫苗对鼠宫颈癌有一定的治疗作用。

人乳头瘤病毒HPV16L1-E7C重组质粒的构建及其细胞的免疫性

目的:构建HPV16L1-E7C重组质粒并研究其细胞免疫性。方法:利用基因克隆技术将HPV16L1-E7CDNA片段定向插入pcDNA3.1载体,构建重组质粒pcDNA16L1-E7C,然后将其免疫C57BL/6小鼠,利用T淋巴细胞增殖试验检测免疫小鼠的脾淋巴细胞增殖能力,同时利用ELISA试验检测免疫小鼠的脾淋巴细胞分泌γ-干扰素(IFN-γ)的水平。结果:特异性T细胞增殖试验中实验组3H-TdR掺入率为18339±1972,对照组为6737±1243,实验组小鼠T细胞增殖水平明显高于对照组(P<0.05)。DNA免疫后实验组小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ水平为0.89±0.56,对照组为4.81±1.33,两者相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:重组质粒能增强小鼠的细胞免疫功能。

人乳头瘤病毒HPV16L1-E7C重组腺病毒载体的构建

采用ＰＣＲ方法，从ＨＰＶ１６型野毒株质粒中分离出ＨＰＶ１６Ｌ１（５５５９７１５１ｂｐ）、ＨＰＶ１６Ｅ７Ｃ（６８２８５５ｂｐ）基因片段，采用ＰＣＲ产物的ＴＡ克隆法，将Ｌ１、Ｅ７Ｃ分别插入ｐＧＥＭＴＥａｓｙ载体，构建克隆载体ｐＴＡＬ１、ｐＴＡＥ７Ｃ。ＢａｍＨⅠ、ＨｉｎｄⅢ酶切ｐＴＡＥ７Ｃ，Ｂｇ１Ⅱ、ＣｌａⅠ酶切ｐＴＡＬ１，回收Ｌ１、Ｅ７Ｃ片段，利用ＢａｍＨⅠ、Ｂｇ１Ⅱ酶切产生相同粘末端的特点，产生Ｌ１Ｅ７Ｃ重组基因片段，将其克隆入质粒ｐＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔｓｋ，构建了ｐＢＳＬ１Ｅ７Ｃ重组克隆质粒，ＨｉｎｄⅢ、ＸｈｏⅠ酶切ｐＢＳＬ１Ｅ７Ｃ，释放Ｌ１Ｅ７Ｃ基因片段，定向重组入ｐＣＡ１４腺病毒载体，成功构建真核表达载体ＨＰＶ１６Ｌ１Ｅ７Ｃ重组腺病毒载体：ｐＣＡ１４Ｌ１Ｅ７Ｃ。

rBCG-HPV16L1-E7疫苗的构建和免疫原性研究

[目的]构建以BCG为载体的rBCG-HPV16L1-E7疫苗,研究rBCG-HPV16L1-E7重组表达体嵌合乳头状瘤病毒样颗粒(VLPs)对小鼠免疫功能的影响,初步评价此疫苗对HPV相关肿瘤(宫颈癌)的预防作用。[方法]电穿孔法将pIJ702-HPV16L1-E7分泌型穿梭表达质粒导入BCG中表达,构成rBCG-HPV16L1-E7疫苗。Western blot检测E7蛋白的表达。采用rBCG-HPV16L1-E7疫苗皮下注射于C57BL/6小鼠,51Cr释放法体外分析免疫鼠的细胞毒性T淋巴细胞活性(cytotoxic T lymphocyte,CTL),ELISA法检测免疫鼠血清中E7特异性抗体和细胞因子的表达水平。[结果]Western blot法分析证实,该重组疫苗能特异地表达HPV16 E7蛋白。以rBCG-HPV16L1-E7免疫小鼠后,检测到的细胞因子IL-2、IFNγ及E7抗体的含量明显升高,诱导机体产生特异的抗体反应以及CTL反应。[结论]rBCG-HPV16L1-E7能增强小鼠的细胞和体液免疫反应,可作为HPV16预防性疫苗。

HPV16L1-E7重组腺病毒在SCID-Hu IC小鼠和HPV16阳性肿瘤联合嵌合小鼠中防治作用的研究

目的 建立SCID HuIC小鼠动物模型和HPV16阳性肿瘤联合嵌合模型 ,研究HPV16L1 E7重组腺病毒在SCID HuIC小鼠和肿瘤联合嵌合模型中的防治作用。方法 ①实验组SCID小鼠移植人胎儿多组织 ,对照组注射RPMI 16 4 0培养液 ,8周末检测人IgG抗体 ,人CD4 5、CD3、CD19;②T1和C1组先注射HPV16L1 E7重组腺病毒 ,2周末强化 ,4周末接种CaSki细胞 ;T2和C2组先接种CaSki细胞 ,4周末注射HPV16L1 E7重组腺病毒 ,6周末强化。 8周末检测病毒特异性IgG抗体、人IFN γ及T淋巴细胞增殖 ,测定肿瘤的物理指标以及免疫组化实验。结果 ①实验组人IgG抗体阳性率 90 .0 % (18/ 2 0 ) ,CD4 5为 (49.79± 39.18) % ;CD3为 (42 .2 7± 36 .37) % ;CD19为 (9.2 8±7.4 6 ) % ,对照组人IgG抗体、人CD4 5、CD3及CD19均为阴性 ;②T1和T2组病毒特异性IgG抗体均为阳性、人IFN γ的含量和T淋巴细胞增殖实验 ,病毒特异性蛋白刺激组均高于非刺激组 (P <0 .0 5 ) ,C1和C2组病毒特异性IgG抗体为阴性、人IFN γ的含量及T淋巴细胞增殖均为阴性 ;肿瘤形成率 :T1和T2组分别为 0和 70 .0 % (7/ 10 ) ,而C1和C2组均为 10 0 % ;肿瘤大小 :T2组在 4周末时为 (4.35 5±0 .387)mm3 ,8周末为 (10 2 8± 90 .96 )mm3 ,C2组在 4周末时为 (32 .75± 6 .717)

表达HPV6b L1-E7嵌合蛋白的减毒沙门菌诱导小鼠免疫应答

目的 探讨表达人乳头状瘤病毒 6b型 (HPV6b)L1 E7嵌合蛋白的减毒沙门菌诱导小鼠粘膜及系统免疫反应的可行性。方法 对重组减毒沙门菌S .BRD5 0 9 pTETnir15 6bL1E7体外厌氧诱导其表达 ,Westernblot方法鉴定表达的L1 E7蛋白。此重组沙门菌经滴鼻和口服联合粘膜免疫BALB c小鼠 ,采用ELISA方法及足垫肿胀试验分别检测免疫小鼠血清及阴道冲洗液中特异性抗体和DTH反应。结果 Westernblot分析显示 ,重组沙门菌在预计相对分子质量 (Mr) 5 6× 10 3 处有特异染色带 ,提示此重组沙门菌能表达特异的HPV6bL1 E7蛋白。ELISA检测结果表明实验组小鼠阴道冲洗液中HPV6bL1特异性sIgA显著升高 ,和对照组比较两者差异有显著性 (P <0 .0 1) ,但小鼠血清中HPV6bL1IgG抗体无明显变化 ,实验组和对照组两者差异无显著性。DTH结果显示 :与对照组比较 ,实验组小鼠接受HPV6bL1 E7抗原刺激后产生明显阳性反应 ,提示重组沙门菌免疫小鼠产生了针对HPV6bL1 E7抗原的特异性细胞免疫反应。结论 构建的重组减毒沙门菌S .BRD5 0 9 pTETnir15 6bL1E7可激发有效的粘膜免疫及细胞免疫反应 ,为进一步研制新型HPV粘膜疫苗奠定了实验基础。

HPV-16 L1甲基化和HPV E6/E7 mRNA检测宫颈病变的临床价值

目的:探讨HPV-16 L1甲基化程度、HPV E6/E7 mRNA表达水平在检测宫颈病变中的临床价值。方法:选择50例HPV-16感染患者的宫颈脱落细胞学标本,其中CIN1 11例、CIN2 11例、CIN3 21例、宫颈鳞癌(SCC)7例,另取11例病理检测HPV-16阴性或慢性炎症者为对照。采用甲基化敏感性高分辨溶解曲线法检测HPV-16 L1甲基化水平,采用b DNA技术检测HPV E6/E7 mRNA的表达情况。结果:对照组、CIN1组、CIN2组、CIN3组和SCC组HPV-16 L1甲基化阳性率分别为9.1%、72.7%、81.8%、90.5%、100.0%,HPV E6/E7 mRNA阳性率分别为45.5%、72.7%、90.9%、100.0%、100.0%;CIN2以上病变中HPV-16 L1甲基化阳性率均高于对照组,而CIN3以上病变中HPV E6/E7 mRNA阳性率均高于对照组(P均<0.005)。HPV-16 L1甲基化程度和HPV E6/E7 mRNA水平均随宫颈病变严重程度的增加而升高(rS=0.638和0.525,P均<0.001);HPV-16 L1甲基化程度与HPV E6/E7mRNA表达水平呈正相关(rS=0.420,P=0.001)。结论:HPV-16 L1甲基化与HPV E6/E7 mRNA检测在分流HPV感染或细胞学阳性患者方面具有良好的临床应用前景。

HPV E6/E7 mRNA结合HPV L1衣壳蛋白检测诊断子宫颈癌前病变的临床意义

目的:探究人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA+HPV L1衣壳蛋白诊断子宫颈癌前病变临床价值。方法:选泰安市妇幼保健院2019年1月-2020年12月宫颈液基薄层细胞学检查(TCT)HPV DNA阳性94例患者为研究对象,根据组织细胞学检查结果将其设为观察组(宫颈上皮内瘤变,n=84)、对照组(正常宫颈,n=10);两组均接受HPV E6/E7 mRNA、HPV L1衣壳蛋白检测,以组织细胞学检查结果为金标准,比较两种诊断方式单独、联合诊断价值。结果:观察组HPV E6/E7 mRNA总阳性检出率为67.86%,较对照组的20.00%高,差异有统计学意义(P<0.05);CIN1、CIN2、CIN3阳性检出率呈现逐渐上升趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组HPV L1衣壳蛋白阳性检出率为35.71%,较对照组的10.00%高,差异有统计学意义(P<0.05);CIN1、CIN2、CIN3阳性检出率呈现逐渐下降趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。HPV E6/E7 mRNA+HPV L1衣壳蛋白联合诊断的准确度、灵敏度分别为82.98%、82.14%,较HPV E6/E7 mRNA(69.15%、67.86%)、HPV L1衣壳蛋白(41.49%、35.71%)单独检验高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在对子宫颈癌前病变诊断中,HPV E6/E7 mRNA、HPV L1衣壳蛋白阳性表达均较高,两者联合诊断后可提升诊断灵敏度。

HPV E6/E7基因和HPV L1基因DNA检测的比较及意义

目的:比较宫颈组织人乳头瘤病毒16亚型中HPV早期基因(E6/E7)和晚期基因(L1)的检出情况,并分析其作为宫颈癌及癌前病变评价的意义。方法:选择高危型(HR)-HPV16亚型的E6/E7区基因和HR-HPV的L1区基因设计特异性引物,优化条件,建立高危型HPV16分型检测方法。分别收集宫颈组织慢性宫颈炎22例,宫颈上皮内瘤变、宫颈鳞癌54例共76例组织标本,根据病理学诊断结果分为两组,对照组(慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(CINⅠ级)和高级别宫颈病变组(CINⅡ级、CINⅢ级、宫颈鳞癌),抽提DNA,采用新建立的方法对HPV早、晚期基因进行PCR检测,同时与临床的杂交捕获二代法(HCⅡ)检测的HPV L1基因进行比较。结果:成功建立了敏感、特异的基于E6/E7和L1基因的PCR检测方法,E6/E7基因HPV16分型检测阳性率为55.3%(42/76),HPV L1和HCⅡ-HPV L1检测阳性率均为25.0%(19/76),E6/E7基因阳性率明显高于HPV L1和HCⅡ-HPV L1,差异有统计学意义(P<0.01);而HPV L1和HCⅡ-HPV L1基因阳性率的差异无统计学意义(P>0.05)。对照组的HPV E6/E7、HPV L1和HCⅡ-HPV L1阳性率分别为29.0%、9.7%和12.9%,显著低于高级别宫颈病变组的73.3%、35.6%和33.3%(P<0.05)。HPV早期基因(E6/E7)与晚期基因(L1)检测结果关联性分析,对照组HPV E6/E7与HPV L1的检测结果有关联(P<0.05);高级别宫颈病变组HPV E6/E7与HPV L1的检测结果有关联(P<0.01);其余检测结果均没有关联(P>0.05)。结论:HPV E6/E7基因比L1基因检测更具灵敏、高效、实用的特点,将E6/E7基因HPV16亚型阳性检测结果与CINⅡ以上病理诊断结果相结合,可作为预测评价临床早期宫颈病变及宫颈癌的有效方法之一。

HPV E6/E7 mRNA及HPV L1蛋白表达与宫颈病变的关系及其诊断价值

目的探讨宫颈不同级别病变与人乳头瘤状病毒(HPV)E6/E7mRNA及HPV L1蛋白的表达关系及其在宫颈病变中的诊断价值。方法收集2016年2月至2017年6月在临海市第二人民医院行宫颈液基薄层细胞学检查(TCT)的标本,其中经第二代杂交捕获法检测HPV DNA阳性127例。103例经组织细胞学诊断为宫颈上皮内瘤变(CIN)及鳞状细胞癌(SCC),设为研究组;24例经组织细胞学诊断为慢性炎症和正常,设为对照组。各组分别进行HPV E6/E7mRNA检测和HPV L1蛋白表达检测,计算并比较阳性表达率。统计HPV E6/E7mRNA和HPV L1两种检测方法的符合率。以组织细胞学诊断结果为金标准,比较两种检测方法在宫颈病变中的诊断价值(准确度、敏感度、阳性预测值、阴性预测值)。结果研究组HPV E6/E7mRNA表达阳性率明显高于对照组,差异有统计学意义(χ~2=23.269,P<0.05),研究组间不同级别病变HPV E6/E7mRNA表达阳性率均明显高于对照组,差异有统计学意义(χ~2值分别为3.296、13.125,均P<0.05)。研究组CIN1 HPV L1蛋白表达阳性率与对照组比较无显著性差异(χ~2=1.142,P>0.05)。相关性分析结果显示,组织细胞学诊断级别与HPV E6/E7mRNA表达阳性率呈显著正相关关系(r=0.954,P<0.05);与HPV L1蛋白表达阳性率呈显著负相关关系(r=-0.976,P<0.05)。各种检测方法敏感度、特异度比较有显著性差异(χ~2值分别为5.801、5.001,均P<0.05),其中联合检测敏感度最低,特异度最高。各种检测方法准确度、阳性预测值和阴性预测值比较无显著性差异(χ~2值分别为4.288、2.331、1.427,均P>0.05)。结论随着宫颈病变严重程度的增加,HPV E6/E7mRNA表达有增高趋势,HPV L1蛋白的表达有下降趋势。联合HPV E6/E7mRNA及HPV L1蛋白两种方法检测对临床HPV阳性的诊断有一定的诊断价值。

人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA与L1蛋白联合检测在宫颈癌前病变诊断中的临床价值

目的探讨人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）E6/E7 mRNA和L1蛋白的联合检测在宫颈癌前病变诊断中的临床价值。方法选择353例HPV感染患者为研究对象,分别采用b-DNA技术检测患者TCT标本中E6/E7 mRNA的阳性表达率,免疫组织化学法检测患者宫颈石蜡包埋组织标本中L1蛋白阳性表达率。结果 E6/E7 mRNA阳性表达率与宫颈病变严重程度呈正相关（r=0.485,P〈0.001）,L1蛋白阳性表达率与宫颈病变严重程度呈负相关（r=-0.471,P〈0.001）;在诊断CIN2及以上病变（CIN2＋）时,E6/E7 mRNA、HPV L1蛋白单独检测与两者联合检测比较,E6/E7 mRNA检测方法的敏感性和阴性预测值（NPV）均高于其他两种检测方法（均P〈0.05）,而联合检测方法特异性均高于E6/E7 mRNA和L1蛋白检测方法（均P〈0.05）,联合检测方法阳性预测值（PPV）高于L1蛋白检测方法（P〈0.05）。结论 E6/E7 mRNA与L1蛋白方法联合检测在分流HPV感染患者,帮助医生选择合适的治疗方案及疗效评估方面,应具有非常好的临床应用前景。

HPV L1壳蛋白联合TCT、HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈癌筛查中的应用价值

目的 探讨人乳头瘤病毒(HPV)L1壳蛋白联合宫颈液基薄层细胞学检查(TCT)、HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈癌筛查中的应用价值。方法 对600例宫颈病变患者的临床资料进行回顾性分析,全部患者均经HPV L1壳蛋白、TCT以及HPV E6/E7 mRNA检测。以阴道镜检结合组织病理学检查为“金标准”,评估3种检测方式及三者联合对宫颈病变的诊断效能。结果 共检出HPV L1壳蛋白阳性患者147例(24.50%),经组织病理学诊断的炎症、低度病变、高度病变及宫颈癌患者中,HPV L1壳蛋白阳性率依次为11.90%、49.70%、21.29%、0.00%,组间差异有统计学意义(χ~2=88.302,P=0.000)。TCT检测结果提示NILM、ASC-US、LSIL、ASC-H、HSIL、SCC者依次为148例(24.67%)、205例(34.17%)、152例(25.33%)、15例(2.50%)、60例(10.00%)、20例(3.33%)。检出HPV E6/E7 mRNA阳性患者337例(56.17%),经组织病理学诊断的炎症、低度病变、高度病变及宫颈癌患者中,HPV E6/E7 mRNA检测阳性率依次为33.33%、62.13%、81.29、90.67%,组间差异具有统计学意义(χ~2=107.830,P=0.000)。HPV L1壳蛋白、TCT、HPV E6/E7 mRNA检测诊断高度病变及宫颈癌(原CINⅡ及以上病变)的灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值分别为97.77%、88.36%、78.13%、98.94%,均分别高于其中单独任意一种检测方法。结论 HPV L1壳蛋白阳性率随宫颈病变严重程度的增加而降低,将其阴性表达与TCT、HPV E6/E7 mRNA检测相结合,有利于提高对高度病变及宫颈癌的诊断效能。

HPV抗原表位及其在疫苗中的应用综述

人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)引起的宫颈癌在全球女性易患癌症中位列第4名,其相应疫苗的研发制备也成为研究的热点。HPV主要致病蛋白有L1、L2两个衣壳蛋白和E6、E7两个致癌蛋白。L1作为主要抗原,其表位分为线性表位、构象表位和B/T细胞表位。其中线性表位的一部分(HPV16-L1蛋白的RHGEEYDLQFIFQLCKITLTA、HPV 18-L1蛋白的PVPGQYDATK等表位)、构象表位的一部分(H16U4、H16V5等)和HPV16-L1部分片段(H2、H3、H4、H9、H11、H12)中的B细胞、T细胞表位都有潜力成为研制以L1为主要抗原疫苗的靶标。近些年来,由于L2蛋白对不同类型HPV的交叉中和保护作用,许多研究的重点开始向L2蛋白转变,尤其是针对L2 N末端处表位加以不同的载体和佐剂赋予L2疫苗不同的特性,L2疫苗比L1疫苗的保护范围更加广泛。E6、E7特异性表位肽和CpG疫苗也是研究HPV治疗性疫苗的新方向。本文将对HPV疫苗及其相关表位的最新进展进行综述。

人乳头瘤病毒HPV6b重组减毒沙门菌粘膜免疫的效果测定

为观察人乳头瘤病毒 6b型 (HPV6b )的重组减毒沙门菌载体疫苗粘膜免疫小鼠的免疫效果及探讨研制治疗尖锐湿疣的治疗性粘膜疫苗的机制 ,我们用构建的HPV6b重组减毒沙门菌粘膜免疫BALB/c小鼠 ,检测了阴道冲洗液中特异的SIgA、血清中IgG、T淋巴细胞增殖以及载体疫苗在机体内的稳定性。结果表明 ,粘膜免疫后 ,实验组与对照组相比较 ,阴道冲洗液中抗HPV6bL1的SIgA差异显著 ,实验组血清中抗HPV6bL1IgG水平低 ,T淋巴细胞增殖明显 ,疫苗在小鼠体内持续存在4 0d以上。研究结果提示我们所构建的重组减毒沙门菌粘膜免疫小鼠后 ,阴道粘膜局部能分泌特异的抗人乳头瘤病毒HPV6bSIgA ,也能激发细胞免疫 ,且此疫苗在小鼠体内能稳定存在。