乙酰二脱水卫矛醇对L1210细胞Caspase-3活性的影响

目的:探讨半胱氨酶-3(Caspase-3)在二乙酰二脱水卫矛醇(d iacetyld ianhydrogalactitol,DADAG)诱导小鼠白血病L1210凋亡过程中的作用。方法:MTT法观察DADAG对L1210细胞的生长抑制作用;透射电镜检测细胞凋亡;Caspase-3试剂盒测定细胞内Caspase-3的酶活性。结果:DADAG对L1210细胞有较强的体外增殖抑制作用,其IC50值为24.6 mg/L;DADAG可诱导L1210细胞发生凋亡及时间依赖性地升高Caspase-3酶活性。结论:Caspase-3在DADAG诱导的细胞凋亡中可能起重要作用。

L1210/DDP细胞交叉耐药性及耐药机制的初步研究

目的观察小鼠淋巴细胞白血病顺铂耐药细胞亚系(L1210/DDP)与其它抗癌药物的交叉耐药性及对耐药机制进行初步研究。方法用拒染法测定细胞对不同抗癌药物的敏感性,用无火焰原子吸收光谱仪、谷胱甘肽还原酶循环法和微孔滤膜碱洗脱技术分别测定细胞内铂离子浓度、总谷胱甘肽含量、谷胱甘肽s-转移酶活性以及细胞DNA链间交联效应。结果L1210/DDP对卡铂有明显的交叉耐药性,对丝裂霉素、噻替派具有部分交叉耐药性,对阿霉素和5-氟尿嘧啶等无交叉耐药性。L1210/DDP细胞内的铂离子浓度和DNA链间交联指数明显低于L1210细胞,总谷胱甘肽含量、谷胱甘肽s-转移酶活性明显高于L1210细胞。结论L1210/DDP细胞亚系对DDP的结构类似物卡铂具有明显的交叉耐药性,其耐药机制与降低细胞内铂离子浓度、升高总谷胱甘肽含量和谷胱甘肽s-转移酶活性、降低DNA链间交联效应有关。

绞股蓝总皂苷对小鼠白血病L1210细胞抑制作用初探

目的:探讨绞股蓝总皂苷(Gypenosides,Gyp)对小鼠白血病L1210细胞生长抑制的作用机制。方法:采用MTT法检测Gyp对体外培养的小鼠L1210细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪检测Gyp对L1210细胞线粒体膜电位的影响;DAPI染色检测Gyp对L1210白血病细胞核的变化;单细胞凝胶电泳法检测Gyp对白血病L1210细胞DNA损伤的影响。结果:浓度为100～500μg/mL的Gyp对L1210细胞增殖生长有抑制作用,350μg/mL的Gyp作用于L1210细胞0、12、24 h,线粒体膜电位显著下降;Gyp(350μg/mL)作用4 h时,细胞的活性氧产量最高。Gyp(350μg/mL)作用4、12、24 h后,单细胞凝胶电泳观测到DNA损伤;DAPI染色发现细胞核发生变化,并有时间依赖性。结论:Gyp能抑制L1210细胞增殖,这种抑制作用与活性氧的产生、线粒体膜电位下降和DNA损伤有关。

二乙酰二脱水卫矛醇对白血病L1210细胞增殖的抑制作用

目的探讨二乙酰二脱水卫矛醇(diacetyldianhydrogalactitol,Dadag)对小鼠白血病细胞株L1210细胞的增殖抑制作用及其机制。方法采用MTT比色法、平板集落形成实验和Hoechst 33258荧光染色法,分析Dadag对L1210细胞的生长抑制和凋亡影响。结果Dadag对L1210细胞有浓度依赖性的细胞毒性作用,抑制肿瘤细胞集落形成,并可诱导L1210细胞发生凋亡。结论Dadag对白血病L1210细胞的增殖抑制作用与其诱导肿瘤细胞发生凋亡密切相关。

顺铂耐药性L1210细胞亚系的建立及特征

目的 建立肿瘤耐药机制研究及筛选抗肿瘤药物的体外实验模型。方法 应用药物连续作用并逐步提高药物浓度的剂量递增法及软琼脂细胞克隆技术 ,用拒染法测定药物的细胞毒作用 ,建立了一株对顺铂 (DDP)具有 40倍耐药性的L12 10细胞亚系 (L12 10 /DDP40 )。结果 DDP耐药细胞亚系在倍增时间、集落形成率、细胞周期、DNA指数和细胞形态等方面基本保持了亲代细胞 (L12 10 )的生物学特性。耐药细胞亚系在加药状态下冻存半年后复苏其耐药性仍然存在 ,解除药物作用后 5mon其耐药性仍维持原有水平。耐药细胞亚系对卡铂、丝裂霉素、噻替派、甲氨蝶呤、长春新碱和氮芥具有不同程度的交叉耐药性 ,对三尖杉酯碱和阿霉素无交叉耐药性 ,对阿糖胞苷和氟尿嘧啶仍较敏感。结论 DDP耐药性L12 10细胞亚系的建立 ,为深入研究肿瘤细胞耐药机制、寻找逆转耐药的措施提供了较好的体外实验模型。

二乙酰二脱水卫矛醇对白血病L1210细胞生长的抑制作用

目的观察二乙酰二脱水卫矛醇(diacetyldianhydrogalactitol,DADAG)对小鼠白血病细胞株L1210细胞的作用,并初步探讨其杀伤肿瘤细胞的机制。方法采用MTT法和平板集落形成法检测细胞的生长情况;[3H]-TdR掺入法检测DADAG对L1210细胞DNA合成的影响。结果L1210细胞经不同浓度的DADAG(12.0、17.2、24.5、35.05、0.0 mg.L-1)处理72 h后,其存活率与对照组相比,分别降至72%6、3%、46%3、5%和20%。平板集落形成实验显示DADAG半数集落形成抑制浓度为18.5 mg.L-1。DADAG 12.0、17.2、24.5、35.0、50.0 mg.L-1作用L1210细胞8 h后的[3H]-TdR掺入率分别为93.6%、83.9%、42.6%、10.1%和5.7%。结论DADAG对L1210细胞的抑制作用与抑制该细胞DNA合成有关。

抗白血病药物三尖杉酯碱对L1210细胞着丝粒蛋白含量及CenpB基因表达的影响(英文)

以小鼠白血病细胞系L12 10为对象 ,探讨了抗白血病药物三尖杉酯碱 (Harringtonine,HT或Har)对细胞内着丝粒蛋白含量及着丝粒蛋白CenpB基因表达的影响。间接免疫荧光 (IIF)检测结果显示 ,随HT作用时间延长 ,L12 10细胞着丝粒荧光斑点减弱 ;免疫印迹 (Westernblot)检测结果显示 ,所用的抗着丝粒抗血清 (ACA血清 )能够识别 8种不同分子量的着丝粒蛋白 :14 0、80、70、5 6、37、34、32和 17kD。受HT作用 ,细胞中这些着丝粒蛋白的含量不同程度地降低。在L12 10细胞中识别 17、80and 14 0kD蛋白质的ACA抗体也分别与分子量相当的已知为CenpA、CenpB和CenpC的 3种蛋白发生交叉反应。Northern和Dotblot显示 ,HT的抑制作用使细胞中CenpBmRNA表达水平较之对照细胞下降。结果表明 ,HT可 (通过抑制基因mRNA的表达 )降低细胞中某些着丝粒蛋白的含量 ;

狗舌草提取物诱导L1210细胞的凋亡

以环磷酰胺、槲皮素和单猪屎豆碱为参照,观察狗舌草60%乙醇提取物体外对L1210细胞的凋亡形态变化的影响;利用流式细胞术AnnexinⅤ-FITC/PI双参数法,研究狗舌草60%乙醇提取物对L1210细胞早期凋亡的影响,探讨狗舌草60%乙醇提取物致L1210细胞凋亡的机理。结果发现,狗舌草60%乙醇提取物能使L1210细胞发生典型的细胞凋亡,形成凋亡小体;狗舌草60%乙醇提取物引起的AnnexinⅤ-FITC+/PI-细胞百分比为86.8%,能诱导L1210细胞发生早期凋亡。

狗舌草提取物对L1210细胞的体外作用研究

利用淋巴性白血病L1 2 1 0细胞 ,以单猪屎豆碱、槲皮素和环磷酰胺为参照 ,检查狗舌草60 %乙醇提取物 (EX)对L1 2 1 0细胞生长情况的影响 ;通过L1 2 1 0细胞台盼蓝拒染率的测定 ,研究EX对L1 2 1 0细胞活力的影响。结果发现 ,一定剂量的EX、单猪屎豆碱、槲皮素和环磷酰胺具有明显的体外抑制淋巴性白血病L1 2 1 0细胞的作用 ,且这种作用具有明显的剂量依赖性。其中EX和槲皮素在体外对L1 2 1 0细胞的细胞毒性较小 ,而单猪屎豆碱在体外对L1 2 1 0细胞的细胞毒性较大。

海南粗榧新碱衍生物HH07A对体外L1210细胞的杀伤作用

体外培养的小鼠Ｌ１２１０细胞被ＨＨ０７Ａ２μｇ·ｍｌ－１作用２４ｈ后，与对照组细胞相比，其细胞数不再增长，有丝分裂数及集落形成率下降，细胞形态及细胞周期动力学均发生一定的变化。且ＨＨ０７Ａ大剂量短期作用抑制Ｌｌ２１０细胞集落形成的效率高于低剂量持续作用。

L1210克隆细胞肿瘤动物模型生物学特性研究

目的 对L12 10细胞及其 4株克隆细胞建立的肿瘤动物模型的某些生物学特性进行比较研究 ,从中筛选出基本符合L12 10细胞生物学特性且一致性更好的克隆细胞。方法 北京肿瘤所L12 10细胞和 4株克隆细胞腹腔接种DBA 2小鼠 ,观察产生腹水的性质、腹水瘤细胞浓度和致小鼠死亡时间 ;皮下接种DBA 2小鼠 ,观察瘤块的生长情况 ;腹腔注射化疗药物环磷酰胺 (CY) ,比较对CY治疗的敏感性。结果 腹腔接种DBA 2小鼠均能生长腹水 ,其中克隆细胞L2H8、L3B12产生血性腹水 ,L3F9的腹水微血性 ,L3E11与肿瘤所L12 10细胞为无血性腹水 ;腹水瘤细胞的浓度及小鼠生存时间亦有差别。肿瘤所L12 10细胞及克隆细胞L3F9、L2H8、L3E11、L3B12第 10天瘤重依次为 1 9± 0 4 6、1 5± 0 3 8、0 75± 0 5 2、2 6± 0 3 0、2 0± 0 3 3g ;用CY治疗的抑瘤率分别是 4 8 7% ,81 3 % ,86 0 % ,78 7%及 67 1%。结论 4株克隆细胞的生物学特性基本符合L12 10细胞 ,对化疗药物CY的敏感性均高于L12

狗舌草提取物诱导淋巴细胞性白血病L1210细胞分化的研究

以单猪屎豆碱(MO)、槲皮素(QU)和环磷酰胺(CY)为参照,观察了狗舌草600 mL/L乙醇提取物(EX)对淋巴细胞性白血病L1210细胞体外试验的形态变化;利用流式细胞术,从DNA分子水平上检查了EX对L1210细胞各周期相的影响,探讨EX对L1210细胞的分化机理。结果发现,EX能够使L1210细胞向淋巴细胞方向发展;经EX作用24 h后,L1210细胞G0+G1期的百分比较对照组明显升高。提示EX对L1210细胞增殖的抑制作用可能是由于G1期的阻滞所致。

二乙酰二脱水卫矛醇抑制白血病L1210细胞增殖并诱导其凋亡

目的探讨二乙酰二脱水卫矛醇(DADAG)诱导小鼠白血病L1210细胞凋亡。方法MTT法观察DADAG对L1210细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪和透射电镜检测细胞凋亡。结果DADAG抑制L1210细胞的增殖且呈剂量依赖性;透射电镜发现DADAG50.0 mg.L-1作用24 h后,靶细胞出现固缩、染色质边集;给药12.0、17.2、24.5、35.0和50.0 mg.L-124 h后,流式细胞术周期分析结果显示,各处理组均出现凋亡峰。结论DADAG抑制白血病L1210细胞增殖并诱导其凋亡。

软骨多糖通过线粒体途径诱导L1210细胞凋亡

研究了软骨多糖诱导L1210细胞发生凋亡的具体机制。采用TUNEL检测细胞凋亡,化学发光法及免疫印迹法检测Caspase-8、Caspase-9及Caspase-3/7酶活性变化,细胞免疫荧光检测Bax/Bcl-2蛋白变化。结果表明软骨多糖可促进L1210细胞发生凋亡,提高Bax/Bcl-2的比率,活化了Caspase-9和Caspase-3蛋白酶,而Caspase-8蛋白酶活性无变化。这些结果表明软骨多糖诱导L1210细胞通过线粒体途径发生了凋亡。

传统抗癌中成药对急性白血病(L1210)的实验研究

本文从白血病小白鼠的血象、骨髓、腹水细胞的动态观察、研究证明:六神丸、紫金锭、犀黄丸具有明显的抑制和杀伤实验白血病小鼠L 1210白血病细胞的作用,具有明显的抗腹腔炎症,缓解、减轻白血病细胞对脾脏浸润的作用,从而具有显著延长白血病小鼠生存期的作用,和诸复方配伍,具有明显的协同作用。

小鼠L1210白血病微小残留病模型化疗药物造模剂量的选择

【目的】探讨构建小鼠L1210白血病微小残留病模型所需注射的化疗药物的剂量。【方法】将不同数量L1210白血病细胞接种清洁级近交系DBA/2小鼠(n=10),观察接种的白血病细胞数量与小鼠存活时间之间的关系;将一定数量的L1210白血病细胞接种DBA/2小鼠(n=10),接种后第3天静脉注射不同剂量的环磷酰胺(CTX),观察药物注射剂量与小鼠存活时间之间的关系;将接种L1210白血病细胞数量与DBA小鼠存活时间关系图和CTX注射剂量与白血病小鼠存活时间关系图相结合,确定构建小鼠L1210白血病微小残留病模型所需注射的化疗药物的剂量。【结果】小鼠存活时间随接种细胞数量增加而缩短,接种500个白血病细胞小鼠的存活时间约为28 d;白血病小鼠存活时间随药物剂量增加而延长,存活时间约28 d时,需要静脉注射CTX 125 mg/kg。【结论】构建小鼠L1210白血病微小残留病模型,可于DBA/2小鼠接种L1210白血病细胞1×106个/只后第3天,给予CTX 125 mg/kg静脉注射。

DADAG对L1210细胞内Bc1-2及Bc1-X_L蛋白表达的影响

目的：探讨二乙酰二脱水卫矛醇(diacetyldianhydrogalactitol,DADAG)对小鼠白血病L1210细胞凋亡相关蛋白表达的影响。方法：MTT法测定DADAG对L1210细胞的杀伤作用；流式细胞技术和透射电镜检测细胞凋亡；Western blot法分析细胞内Bcl-2和Bcl-X_L蛋白水平的变化。结果：与对照组相比,DADAG可降低L1210细胞的存活率,且具有浓度依赖性。给药12.0、17.2、24.5、35.0和50.0mg/L 24h后,流式细胞术周期分析结果显示,各处理组均出现凋亡峰。DADAG 50.0mg/L作用L1210细胞24h后,靶细胞出现固缩、染色质边集；DADAG可下调Bcl-2和Bcl-X_L蛋白水平,且具有时间依赖性。结论：DADAG可能通过抑制Bcl-2及Bcl-X_L蛋白的表达而诱导L1210细胞发生凋亡。

Amaxa Nucleofector^(TM)核转染仪转染白血病细胞株L1210

慢性淋巴细胞白血病细胞株L1210是广泛运用于白血病发病机制以及化疗药物研究的细胞模型,但该细胞株与其它悬浮细胞株一样,存在着转染效率低的难题。本研究旨在探讨如何提高L1210细胞株的转染效率。应用报告基因pEGFP并通过Amaxa NucleofectorTM核转染仪的几种转染预设模式转染悬浮L1210细胞,与脂质体Lipofectamine 2000转染进行对比,在荧光倒置显微镜下观察、使用流式细胞术检测转染效率,用台盼蓝排斥实验比较存活率。结果表明:使用核转染仪进行转染在L1210细胞中获得了很高的转染效率,且在一样细胞密度(2×106/ml)和质粒量(10μg)条件下,在24小时后进行比较,核转染仪预设模式A-20转染效率达(61.6%),明显高于其它模式(S-18、T-20),存活率可达50.5%;脂质体转染24小时细胞存活率为88%,但转染效率极低(<1%)。结论:核转染仪转染L1210的效率明显高于脂质体转染方案,其转染效率最高可达61.6%,存活率可达50.5%,此结果可满足科研工作需求。

L1210克隆细胞mRNA的表达及蛋白电泳图谱分析

目的 研究 L12 10及其克隆细胞 m RNA表达的差异 ,从基因水平探讨质控瘤株的方法。方法 用SDS- PAGE电泳观察瘤细胞株的蛋白质电泳图谱 ;6株生物素标记的探针与瘤细胞进行玻片原位杂交测定瘤细胞m RNA的表达。结果 北京肿瘤所 L12 10蛋白质条带数为 32条带 ,克隆细胞 L3F9和 L3E11均为 31条带 ;细胞原位杂交证明 ,北京肿瘤所 L12 10与 6株探针均杂交阳性 ,但杂交阳性染色强度不同 ;克隆细胞 L3E11与 p16、c- jun及 p5 3探针杂交阳性 ;克隆细胞 L3F9与 p16 ,c- fos,c- myc及 c- jun探针杂交阳性。结论 从北京肿瘤所保存的L12 10细胞中获得的 2株克隆细胞 L3E11和 L3F9的蛋白质电泳图谱的条带数一致 ,但其 m RNA的表达不同 ;c-fos,c- myc以及 p5 3基因的表达与否可以把这 2株克隆细胞区别开来 ,c

DADAG诱导白血病L1210细胞凋亡

目的以小鼠白血病细胞系L1210为对象,探讨半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspases)家族成员在二乙酰二脱水卫矛醇(diacetyldianhydrogalactitol,DADAG)诱导肿瘤细胞凋亡过程中的作用。方法MTT法测定DADAG对L1210细胞的杀伤作用;透射电镜和流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot和Caspase-3试剂盒测定Caspase-3活性。结果与对照组相比,L1210细胞经不同浓度的DADAG(12.0、17.2、24.5、35.0或50.0 mg/L)处理72 h后,其存活率,分别降至72%、63%、46%、35%和20%。DADAG 50.0 mg/L处理组的凋亡率、Caspase-3活性和PARP裂解片段较对照组明显升高。Caspase-3抑制剂可部分阻断此过程,而Caspases抑制剂可完全阻断此过程。结论Caspases家族成员在DADAG诱导L1210细胞凋亡中发挥重要的作用。