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HPV L2肽段宫颈癌疫苗的研究进展 被引量:3
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作者 徐海燕 辛晓燕 蔡国青 《中国妇幼健康研究》 2008年第5期489-491,共3页
在全世界范围内,宫颈癌是女性的高发肿瘤,死亡率极高,人乳头瘤病毒是其主要的致病因子。关于宫颈癌的人乳头瘤病毒疫苗研究为宫颈癌的防治带来了曙光。目前已上市的人乳头瘤病毒疫苗虽已取得一定的临床疗效,但仍然存在着许多不足,其中,... 在全世界范围内,宫颈癌是女性的高发肿瘤,死亡率极高,人乳头瘤病毒是其主要的致病因子。关于宫颈癌的人乳头瘤病毒疫苗研究为宫颈癌的防治带来了曙光。目前已上市的人乳头瘤病毒疫苗虽已取得一定的临床疗效,但仍然存在着许多不足,其中,仅能抑制少数高危型人乳头瘤病毒感染是最主要的缺陷之一。人乳头瘤病毒次要衣壳蛋白L2与宫颈癌的关系密切,同时L2肽段在所有人乳头瘤病毒型别均有表达,虽然免疫原性较弱,但具有很强的序列保守性,可交叉免疫多种型别的人乳头瘤病毒感染。由其构建的以人乳头瘤病毒L2肽段为基础的集预防与治疗为一体的疫苗有着极大的优越性和潜力,但也存在着不足之处,目前该方面的相关研究已在国内外逐渐展开起来,并取得了一定的进展。该文就人乳头瘤病毒次要衣壳蛋白L2与宫颈癌的关系及其构建人乳头瘤病毒疫苗的研究进展作以系统的回顾。 展开更多
关键词 宫颈癌 人乳头瘤病毒 次要衣壳蛋白l2 疫苗
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人PD-L2(B7-DC)基因的克隆及其IgV+C段的原核表达 被引量:1
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作者 施勤 陈永井 +1 位作者 周斌 张学光 《苏州大学学报(医学版)》 CAS 2004年第4期472-474,486,共4页
目的 克隆hPD L2 (B7 DC)基因并表达其IgV +C段。 方法 从人外周血细胞中分离出外周单个核细胞 ,诱导树突细胞 (DC)后通过RT PCR扩增出全长的PD L2基因片段 ;经DNA序列测定证实 ;用聚合酶链反应(PCR)技术克隆其胞外段hPD L2 (IgV +C) ... 目的 克隆hPD L2 (B7 DC)基因并表达其IgV +C段。 方法 从人外周血细胞中分离出外周单个核细胞 ,诱导树突细胞 (DC)后通过RT PCR扩增出全长的PD L2基因片段 ;经DNA序列测定证实 ;用聚合酶链反应(PCR)技术克隆其胞外段hPD L2 (IgV +C) ,构建原核表达载体PGEX 4T 3/hPD L2 (IgV +C) ,并在大肠杆菌BL2 1 RIL中表达。结果 构建了其PD L2 (IgV +C)片段的原核表达载体 ;将转化菌BL2 1 RIL诱导表达后经SDS PAGE电泳分析显示在 5 0kd处有hPD L2 (IgV +C) /GST (GlutathioneS transferase)融合蛋白的高效表达。结论 PD L2 (B7 DC)基因的克隆及其胞外段PD L2 (IgV +C)的克隆和表达为PD L PD 展开更多
关键词 PD—l2 基因表达 融合蛋白
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人PD-L2基因克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量:1
3
作者 何贤辉 徐丽慧 +2 位作者 刘毅 蔡小嫦 曾耀英 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期346-349,共4页
目的 克隆人PD L2基因并构建PD L2胞外区的原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。方法 以RT PCR方法从活化的人外周血单个核细胞总RNA中克隆PD L2基因的cDNA ,构建PD L2胞外区的原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(ED3)中进行表达并鉴定... 目的 克隆人PD L2基因并构建PD L2胞外区的原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。方法 以RT PCR方法从活化的人外周血单个核细胞总RNA中克隆PD L2基因的cDNA ,构建PD L2胞外区的原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(ED3)中进行表达并鉴定。结果 克隆到PD L2基因cDNA编码区全长序列 ,经DNA测序证明其与已报道的序列一致。进而构建了PD L2胞外区的原核表达载体 ,并在大肠杆菌表达 ,免疫印迹分析表明在IPTG诱导后表达PD L2胞外区蛋白 ,相对分子质量Mr 为 2 2 0 0 0 ,与理论值大小相符。结论 成功克隆PD L2基因 ,其胞外区蛋白在大肠杆菌中获得表达 ,为进一步研究PD L2功能提供了条件。 展开更多
关键词 PD-l2 基因克隆 大肠杆菌 重组蛋白
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Changes of the expression of CCNL2 gene during the differentiation of P19 cells to cardiac myocytes
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作者 Zhiwen Jiang Lili Zhuo Jie Gong Rong Yang Yanhui Sheng Xiangqing Kong Kejiang Cao 《Journal of Nanjing Medical University》 2009年第4期275-278,共4页
Objective: To investigate the changes of cyclin L2(CCNL2) gene mRNA and protein during the differentiation of P19 cells to cardiac myocytes, and to explore the relationship between CCNL2 gene and the differentiatio... Objective: To investigate the changes of cyclin L2(CCNL2) gene mRNA and protein during the differentiation of P19 cells to cardiac myocytes, and to explore the relationship between CCNL2 gene and the differentiation of cardiac myocytes. Methods: P19 cells were cultured with 0.9% DMSO for 18 days. Western blots of cardiac troponin I (cTnI) were used to identify cell differentiation. Total RNA was extracted from P19 cells during the process of differentiation at various time points:pre-differentiation(Day 0), and Day 1 to Day 18. The expression levels of CCNL2 gene mRNA and protein were evaluated by RT-PCR and Western blot, respectively. Results: After being induced to differentiate by DMSO for 4 days in suspension, spontaneously and rhythmically beating ceils were seen at 8 day, which were cTnI-positive. In P19 cells, both the expression level of CCNL2 gene mRNA and protein were gradually down-regulated. Conclusion: Both the expression of CCNL2 gene and protein were down-regulated during the process of the differentiation of P19 cells into cardiac myocytes, suggesting a possible role for this cyclin in their differentiation. 展开更多
关键词 cyclin l2 protein gene P19 cells cell differentiation
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HPV16 L2肽段疫苗的构建及免疫学功能研究
5
作者 徐海燕 李英辉 +3 位作者 蔡国青 龚照 鲁瑶 辛晓燕 《中国妇幼健康研究》 2009年第3期256-258,共3页
目的探讨基于人乳头瘤病毒16次要衣壳蛋白L2抗原优势表位多倍复制重组多肽疫苗的构建与诱导免疫应答之间的关系。方法采用芴甲氧羰基(Fmoc)固相合成法合成多肽,用高效液相色谱分析多肽的纯度,对所合成的多肽采用质谱进行定性鉴定。... 目的探讨基于人乳头瘤病毒16次要衣壳蛋白L2抗原优势表位多倍复制重组多肽疫苗的构建与诱导免疫应答之间的关系。方法采用芴甲氧羰基(Fmoc)固相合成法合成多肽,用高效液相色谱分析多肽的纯度,对所合成的多肽采用质谱进行定性鉴定。通过淋巴细胞增殖试验、细胞毒性杀伤试验及酶联免疫吸附试验方法研究该疫苗激发的细胞免疫及反应强度。结果合成的多肽经纯化后纯度均达到95%以上,经质谱分析,各肽的分子量测定值与理论值相符。所设计的多肽疫苗免疫小鼠后,小鼠淋巴细胞体外培养增殖明显,并可特异性地在体外杀伤小鼠肺上皮细胞,小鼠血清体外可诱导较高的干扰素-γ。结论在多肽疫苗的设计中,多倍复制重组人乳头瘤病毒次要衣壳蛋白L2肽段优势表位可增强疫苗的免疫原性,为进一步研制开发宫颈癌疫苗打下了基础。 展开更多
关键词 子宫颈癌 人乳头瘤病毒16 次要衣壳蛋白l2 优势表位 多肽疫苗
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人乳头瘤病毒6/11型L2片段的高效表达及免疫效果评价
6
作者 任皎 张忠献 +4 位作者 赵莉 郝明强 田厚文 谭文杰 阮力 《生物技术通讯》 CAS 2016年第1期12-16,共5页
目的:原核表达人乳头瘤病毒(HPV)6型和11型L2 N端融合蛋白,并初步评价其免疫效果。方法:用重叠PCR将HPV6和HPV11次要衣壳蛋白L2基因5'端片段融合,并在大肠杆菌中表达融合蛋白,纯化后与Al(OH)3佐剂配伍肌肉注射免疫BALB/c小鼠,用E... 目的:原核表达人乳头瘤病毒(HPV)6型和11型L2 N端融合蛋白,并初步评价其免疫效果。方法:用重叠PCR将HPV6和HPV11次要衣壳蛋白L2基因5'端片段融合,并在大肠杆菌中表达融合蛋白,纯化后与Al(OH)3佐剂配伍肌肉注射免疫BALB/c小鼠,用ELISA检测血清抗体,以基于假病毒的体外中和试验评价中和抗体水平。结果:ELISA结果显示,3种融合蛋白均能产生针对同型别L2蛋白的高滴度特异性Ig G抗体,滴度为1∶10 000~1∶200 000;体外中和试验显示,3种融合蛋白均能诱发中和抗体和交叉中和抗体,针对同型别的滴度最高可达1∶3200,对于高危型能产生一定水平的交叉中和抗体,滴度为1∶50~1∶800。结论:HPV6/11 L2融合蛋白能够诱发较强的体液免疫反应,产生较高的中和抗体及交叉中和抗体,为HPV L2新型预防性疫苗的研究提供了初步的实验基础。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 融合蛋白 预防性疫苗 中和抗体 次要衣壳蛋白l2
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HPV16L2开放读码框编码表位的基因克隆和表达
7
作者 赵蔚明 于修平 +1 位作者 赵立新 董杰德 《山东医科大学学报》 1991年第3期190-194,共5页
利用质粒p16L2Ex6-3和pATH10,制备了含有HPV16L2ORF编码表位的基因克隆p16L2REx6-3。将此重组质粒转化大肠杆菌HB101,并诱导其有效表达,产生一分子量约为40KD的含有E.coli trpE的融合蛋白。Western blot分析结果表明,此蛋白可与感染HPV1... 利用质粒p16L2Ex6-3和pATH10,制备了含有HPV16L2ORF编码表位的基因克隆p16L2REx6-3。将此重组质粒转化大肠杆菌HB101,并诱导其有效表达,产生一分子量约为40KD的含有E.coli trpE的融合蛋白。Western blot分析结果表明,此蛋白可与感染HPV16的患者血清呈阳性免疫反应,提示该克隆的表达蛋白具有HPV16,的型抗原特异性。 展开更多
关键词 乳头瘤病毒 基因克隆 质粒
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人源程序性死亡配体PD-L2蛋白的原核表达与抗血清制备
8
作者 杨娟娟 刘照 +3 位作者 夏菁潞 罗岭 俞博彤 孟春 《福州大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2018年第3期438-444,共7页
利用原核表达系统获得包涵体表达形式的重组蛋白h PD-L220~123(Ig V结构域)和h PD-L220~208(Ig V结构域和Ig C结构域);将重组蛋白利用Ni-NTA柱亲和层析纯化与复性后,作为免疫原免疫Balb/c雌性小鼠制备鼠抗人的多抗血清,经ELISA法检测其... 利用原核表达系统获得包涵体表达形式的重组蛋白h PD-L220~123(Ig V结构域)和h PD-L220~208(Ig V结构域和Ig C结构域);将重组蛋白利用Ni-NTA柱亲和层析纯化与复性后,作为免疫原免疫Balb/c雌性小鼠制备鼠抗人的多抗血清,经ELISA法检测其效价均达到1∶106;Western-blot实验结果表明,制备的多抗血清均能特异性识别h PD-L2蛋白.以制备的多抗血清进行IHC实验评估与鉴定,结果显示:以h PD-L220~123重组蛋白为免疫原制备的多抗血清阳性较弱且定位模糊,以h PD-L220~208重组蛋白为免疫原制备的多抗血清具有很强的膜定位且背景清晰. 展开更多
关键词 人源PD-l2蛋白 主要抗原表位区 原核表达 抗血清
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实时定量PCR在先天性小睑裂综合征患者FOXL2基因检测中的应用
9
作者 陈丽娟 王中英 +1 位作者 李思佳 胡姗姗 《中国当代医药》 2019年第23期79-82,共4页
目的应用实时定量PCR技术鉴定先天性小睑裂综合征(BPES)患者中FOXL2基因的突变和(或)缺失。方法于2017年8月收集黑龙江省1个BPES患病家系,采集外周血提取基因组DNA,用PCR直接测序法和实时定量PCR法筛查FOXL2基因的全部外显子。结果在此... 目的应用实时定量PCR技术鉴定先天性小睑裂综合征(BPES)患者中FOXL2基因的突变和(或)缺失。方法于2017年8月收集黑龙江省1个BPES患病家系,采集外周血提取基因组DNA,用PCR直接测序法和实时定量PCR法筛查FOXL2基因的全部外显子。结果在此例患病家系中,用PCR直接测序法排除了基因内突变,用实时定量PCR方法确定了FOXL2基因全缺失。这些变异在未患病亲属和50名正常人中并未被检测到。结论本研究是应用实时定量PCR技术检测中国BPES患者FOXL2基因缺失的报道,这项技术丰富了BPES患者的分子遗传学诊断方法。 展开更多
关键词 小睑裂综合征 叉头蛋白l2 实时定量PCR 缺失 突变
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人T淋巴母细胞(Jurkat)移动性的研究 被引量:3
10
作者 司徒锐 Jame.,V 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1994年第2期119-122,127,共5页
利用人T淋巴母细胞(Jurkat)细胞系作为研究对象。企图探探索细胞外基质成份及肌醇磷脂细胞信息传递系统与细胞移动的关系。研究结果表明:当细胞被伏波醇酯(PMA)处理过后,其粘连性与移动件对纤维连结蛋白(FN)底物的... 利用人T淋巴母细胞(Jurkat)细胞系作为研究对象。企图探探索细胞外基质成份及肌醇磷脂细胞信息传递系统与细胞移动的关系。研究结果表明:当细胞被伏波醇酯(PMA)处理过后,其粘连性与移动件对纤维连结蛋白(FN)底物的反应在已是高水平的基础上有更进一步提高的作用。与FN刊相反的是,未经PMA处理处的Jurkat细胞对层粘连蛋白(Lm)底物却无明显的粘连性及移动性增加的反应,尽管在PMA处理过4小时内亦无任何的增强。但是,当PMA作用于细胞24一48小时后则明显池增加其Lm底物的粘连性及移动性反应,表明了其明显的协同作用。分别用抗FN、抗Lm及蛋白激酶C抑制剂Staurosprine(SP)时均起到特异性的抑制作用。可见,协同作用的产生是通过蛋白激酶C激活后的-段时间内,使细胞表面Lm受体密度增加而对底物Lm反应增强所致。 展开更多
关键词 细胞移动性 T淋巴母细胞 肿瘤转移
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HPV抗原表位及其在疫苗中的应用综述 被引量:1
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作者 张文祺 郑博升 +4 位作者 王昱俨 马晓玲 王琳 邱其其 刘伟 《解放军医学院学报》 CAS 2020年第1期92-96,共5页
人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)引起的宫颈癌在全球女性易患癌症中位列第4名,其相应疫苗的研发制备也成为研究的热点。HPV主要致病蛋白有L1、L2两个衣壳蛋白和E6、E7两个致癌蛋白。L1作为主要抗原,其表位分为线性表位、构象... 人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)引起的宫颈癌在全球女性易患癌症中位列第4名,其相应疫苗的研发制备也成为研究的热点。HPV主要致病蛋白有L1、L2两个衣壳蛋白和E6、E7两个致癌蛋白。L1作为主要抗原,其表位分为线性表位、构象表位和B/T细胞表位。其中线性表位的一部分(HPV16-L1蛋白的RHGEEYDLQFIFQLCKITLTA、HPV 18-L1蛋白的PVPGQYDATK等表位)、构象表位的一部分(H16U4、H16V5等)和HPV16-L1部分片段(H2、H3、H4、H9、H11、H12)中的B细胞、T细胞表位都有潜力成为研制以L1为主要抗原疫苗的靶标。近些年来,由于L2蛋白对不同类型HPV的交叉中和保护作用,许多研究的重点开始向L2蛋白转变,尤其是针对L2 N末端处表位加以不同的载体和佐剂赋予L2疫苗不同的特性,L2疫苗比L1疫苗的保护范围更加广泛。E6、E7特异性表位肽和CpG疫苗也是研究HPV治疗性疫苗的新方向。本文将对HPV疫苗及其相关表位的最新进展进行综述。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒疫苗 L1蛋白 l2蛋白 E6蛋白 E7蛋白 表位
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FOXL 2基因检测对卵巢成年型粒层细胞瘤诊断与鉴别诊断的价值 被引量:4
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作者 姜忠彩 任卫红 +4 位作者 王琼 窦福贤 宋欣 倪艳颖 刘爱军 《精准医学杂志》 2020年第1期11-14,20,共5页
目的探讨FOXL 2基因突变在卵巢成年型粒层细胞瘤(AGCT)病理诊断及鉴别诊断中的意义。方法收集2012年1月—2018年12月于中国人民解放军总医院第一医学中心及航空总医院病理科同期诊断为卵巢AGCT及卵泡膜-纤维瘤患者的标本各26例,对标本... 目的探讨FOXL 2基因突变在卵巢成年型粒层细胞瘤(AGCT)病理诊断及鉴别诊断中的意义。方法收集2012年1月—2018年12月于中国人民解放军总医院第一医学中心及航空总医院病理科同期诊断为卵巢AGCT及卵泡膜-纤维瘤患者的标本各26例,对标本进行形态学观察及免疫组织化学检测,并行Sanger测序检测FOXL 2基因突变情况。结果26例AGCT镜下瘤细胞呈弥漫型、条索状、缎带状和岛状结构排列,可见微滤泡结构(Call-Exner小体);肿瘤细胞界限不清,胞浆稀少,细胞核圆形、卵圆形,可见核沟。卵泡膜-纤维瘤镜下肿瘤细胞呈编织状、旋涡状排列;细胞以肥胖的短梭形细胞为主,核卵圆形,胞浆呈空泡状,富含脂质。免疫组织化学检测结果显示,波形蛋白(Vimentin)、抑制素a(Inhibin-a)、钙网膜蛋白(Calretinin)、CD56、CD99在AGCT中阳性表达率分别为100%、88.0%、92.8%、62.5%、40.0%;在卵泡膜-纤维瘤中阳性表达率分别为100%、76.9%、73.1%、0、0,其中两组间性索间质标记物Inhibin-a、Calretinin的表达比较无显著性差异(P>0.05)。Sanger测序检测显示,73.1%(19/26)的卵巢AGCT患者的标本中检测到FOXL 2402c.C→G突变,而卵泡膜-纤维瘤患者的标本中未检测到该突变,两者比较差异有显著意义(χ^2=8.089,P<0.05)。结论FOXL 2基因突变可用于AGCT诊断,组织学不典型病例进行基因突变和相应的免疫组化标志物检测,可以提高AGCT鉴别诊断的准确性。 展开更多
关键词 粒层细胞瘤 卵泡膜细胞瘤 叉头框蛋白l2 病理学 基因检测 免疫组织化学 诊断 诊断 鉴别
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人乳头瘤病毒衣壳蛋白与宫颈病变
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作者 黄成琳 张淑兰 《国际妇产科学杂志》 CAS 2014年第2期132-136,共5页
宫颈癌严重危害妇女健康,人乳头瘤病毒(HPV)感染是其首要病因。临床医师一直致力于寻找一种能有效判断宫颈病变级别及预测预后的诊断方法。HPV衣壳蛋白包括主要衣壳蛋白(L1壳蛋白)和次要衣壳蛋白(L2壳蛋白),这两种蛋白在组装成病毒颗粒... 宫颈癌严重危害妇女健康,人乳头瘤病毒(HPV)感染是其首要病因。临床医师一直致力于寻找一种能有效判断宫颈病变级别及预测预后的诊断方法。HPV衣壳蛋白包括主要衣壳蛋白(L1壳蛋白)和次要衣壳蛋白(L2壳蛋白),这两种蛋白在组装成病毒颗粒、协助病毒入胞及引起机体免疫反应等多个方面发挥重要作用。近年研究表明,L1壳蛋白可用于预测宫颈病变的进展与消退。以L1及L2壳蛋白为基础研发的HPV预防性疫苗在临床试验中得到了很好的预防效果。综述HPV生物学特点及近年来有关HPV衣壳蛋白在宫颈病变的研究进展。 展开更多
关键词 乳头状瘤病毒科 子宫颈 宫颈上皮内瘤样病变 活组织检查 L1壳蛋白 l2壳蛋白 免疫组织化学
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58型人乳头瘤病毒L2蛋白的原核表达、纯化及单克隆抗体的制备 被引量:2
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作者 林洁 吕琦 +2 位作者 童亮 刘芳 马岚 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第4期398-403,共6页
目的原核表达并纯化我国高发的致宫颈癌58型人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)次要衣壳蛋白L2,并制备其单克隆抗体。方法从含有HPV-58基因组的质粒pHPV58中扩增L2基因,插入改构的原核表达载体pGEX-KGV中,转化大肠杆菌BL21(DE3),... 目的原核表达并纯化我国高发的致宫颈癌58型人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)次要衣壳蛋白L2,并制备其单克隆抗体。方法从含有HPV-58基因组的质粒pHPV58中扩增L2基因,插入改构的原核表达载体pGEX-KGV中,转化大肠杆菌BL21(DE3),乳糖诱导表达,透析复性并亲和层析纯化重组蛋白,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,并对其进行鉴定。结果重组表达质粒pGEX-KGV-HPV58 L2经双酶切和测序证明构建正确;表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在,表达量可占菌体总蛋白的15.5%;纯化的重组蛋白纯度可达95%;共获得10株抗HPV-58 L2的高效价单克隆抗体。结论已成功原核表达、纯化了HPV-58 L2重组蛋白,并制备了单克隆抗体,为下一步HPV-58 L2蛋白抗原表位的研究以及相关预防性抗体药物和广谱重组疫苗的开发奠定了基础。 展开更多
关键词 58型人乳头瘤病毒 l2蛋白 原核细胞 基因表达 蛋白质复性 抗体 单克隆
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PD-L2剪切异构体与EGFP融合蛋白的表达及其亚细胞定位研究 被引量:1
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作者 何贤辉 徐丽慧 +2 位作者 曾耀英 刘毅 蔡小嫦 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期878-882,共5页
目的 探讨PD L2的剪切异构体在哺乳动物细胞的表达和亚细胞定位。方法 以RT PCR方法克隆人PD L2基因的常规剪切体和新型剪切异构体的cDNA ,构建其与EGFP融合的表达载体 ,分别转染K5 6 2细胞进行表达 ,经抗PD L2抗体染色后以流式细胞... 目的 探讨PD L2的剪切异构体在哺乳动物细胞的表达和亚细胞定位。方法 以RT PCR方法克隆人PD L2基因的常规剪切体和新型剪切异构体的cDNA ,构建其与EGFP融合的表达载体 ,分别转染K5 6 2细胞进行表达 ,经抗PD L2抗体染色后以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果 从活化的人白细胞中克隆到常规剪切体PD L2Ⅰ和新型剪切异构体PD L2Ⅱ的cDNA ,后者删除了编码胞外区Ig C结构域的外显子 3。进而构建了PD L2Ⅰ EGFP和PD L2Ⅱ EGFP融合蛋白表达载体 ,分别转染K5 6 2细胞。流式细胞仪分析显示 ,转染前者的细胞中既可检测到EGFP的表达又可在细胞膜上检测到PD L2表达 ;而转染后者的细胞中只能检测到EGFP的表达 ,在其细胞膜上不能检测到PD L2表达。共聚焦显微镜观察显示 ,PD L2Ⅰ EGFP主要分布于细胞膜表面 ,PD L2Ⅱ EGFP则主要分布于细胞内。结论 常规剪切体PD L2Ⅰ能正确定位于细胞膜表面 ,而新型剪切异构体PD L2Ⅱ则位于细胞内 ,不能运输至细胞膜 ,提示不同PD 展开更多
关键词 PD 表达载体 EGFP 转染 剪切体 细胞膜 融合蛋白 亚细胞定位 结构域 哺乳动物细胞
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HPV 16型L2全长原核融合蛋白的交叉反应特性研究
16
作者 李玲玲 刘建晓 +3 位作者 朱珊丽 薛向阳 陈俊 张丽芳 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期435-440,共6页
目的 研究HPV 16型L2全长蛋白在HPV6、11、16和18型别间的交叉反应特性.方法 收集108例尖锐湿疣患者、156例宫颈癌患者和100名健康对照者的血清标本,采用PCR法从宫颈癌患者组织DNA中扩增HPV16 L2全长基因,将其克隆至原核表达载体PGEX-4... 目的 研究HPV 16型L2全长蛋白在HPV6、11、16和18型别间的交叉反应特性.方法 收集108例尖锐湿疣患者、156例宫颈癌患者和100名健康对照者的血清标本,采用PCR法从宫颈癌患者组织DNA中扩增HPV16 L2全长基因,将其克隆至原核表达载体PGEX-4T-1中,构建重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2,将鉴定正确的重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和WB鉴定;进一步通过WB检测HPV16 L2全长融合蛋白与HPV6、11、16和18型DNA检测阳性的患者血清的特异性结合能力.以镍螯合亲和层析柱(Nj-NTA Agarose)纯化HPV16 L2融合蛋白作为包被抗原,采用间接ELISA法检测3组标本中的HPV血清特异性IgG抗体.结果 成功构建了重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2,含有HPV16 L2的融合蛋白在原核表达体系中呈较高效表达,表达量为27.2%;SDS-PAGE和WB检测结果显示在约相对分子质量82 000处可见特异性阳性信号条带;以HPV6、11、16和18 DNA阳性患者血清为一抗的WB结果显示,HPV16 L2全长融合蛋白在相对分子质量82 000处均出现特异性阳性信号条带.ELISA结果显示,尖锐湿疣组、宫颈癌组和健康对照组血清抗体A值分别为0.825±0.409、0.808±0.376、0.128±0.15,阳性率分别为92.6%、92.3%和6.0%.3组间血清抗体A值及阳性率差异均具有统计学意义(H=207.292,x2=251.846,P均<0.01),而尖锐湿疣组与宫颈癌组之间的血清抗体均值(0.825和0.808)差异无统计学意义(H=0,P>0.05).结论 HPV16 L2全长原核融合蛋白具有较强的抗原性,与HPV6、11、16和18型别间具有交叉反应,可进一步用于HPV感染及其相关肿瘤ELISA血清学检测试剂的通用型靶抗原研究. 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 次要衣壳蛋白 交叉反应
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HPV16 L2肽段偶联AP205 VLP的原核表达及免疫原性分析 被引量:1
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作者 姜博 毕研伟 +4 位作者 张营营 蔡路奎 姬秋彦 李智华 徐维明 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1-6,共6页
目的:将编码HPV16衣壳蛋白L2的65~71、112~120免疫优势表位连接到RNA噬菌体衣壳蛋白AP205氮端,组装形成病毒样颗粒,通过在大肠杆菌中实现表达及纯化,对其免疫原性进行研究。方法:合成编码AP205衣壳蛋白基因和HPV16 L2的65~71、112~... 目的:将编码HPV16衣壳蛋白L2的65~71、112~120免疫优势表位连接到RNA噬菌体衣壳蛋白AP205氮端,组装形成病毒样颗粒,通过在大肠杆菌中实现表达及纯化,对其免疫原性进行研究。方法:合成编码AP205衣壳蛋白基因和HPV16 L2的65~71、112~120位氨基酸表位的基因序列,PCR连接并克隆至pET30a(+)原核表达载体,构建重组表达质粒pET30-AP205-HPV16ΔL2,转化大肠杆菌BL21(DH3)感受态细胞,IPTG诱导表达。表达蛋白经凝胶层析纯化及SDS-PAGE、Western blot等理化性质检测,免疫接种ICR小鼠,通过间接ELISA法检测其免疫原性。结果:成功构建重组表达质粒,重组蛋白在大肠杆菌中以可溶性表达,透射电镜观察可见典型病毒样颗粒,该VLP在动物实验中表现出较好的免疫原性。结论:成功将HPV16 L2表位偶联AP205以形成VLP,在大肠杆菌中实现可溶性表达。 展开更多
关键词 人乳头瘤状病毒 l2蛋白 AP205
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基于人乳头瘤病毒次要衣壳蛋白L2的广谱疫苗研究进展 被引量:1
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作者 池鑫 宋硕 +3 位作者 黄诗雯 陈婷婷 夏宁邵 李少伟 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期300-306,共7页
人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)次要衣壳蛋白L2具有广谱中和表位,被认为具有成为新一代广谱预防性疫苗的潜力。目前上市的HPV疫苗均是基于主要衣壳蛋白L1,但都被证明只对疫苗保护型别有效,仍无法覆盖所有高危型别的HPV,且成本... 人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)次要衣壳蛋白L2具有广谱中和表位,被认为具有成为新一代广谱预防性疫苗的潜力。目前上市的HPV疫苗均是基于主要衣壳蛋白L1,但都被证明只对疫苗保护型别有效,仍无法覆盖所有高危型别的HPV,且成本较高不利于在发展中国家推广,因此急需开发低成本高覆盖的预防性疫苗。本文综述了基于L2疫苗的相关研究策略,对HPV广谱预防性疫苗的研究具有参考意义。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒(HPV) 次要衣壳蛋白l2 广谱疫苗 RG‐1表位
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PD-L2/CTLA-4融合蛋白的表达,纯化及初步功能鉴定
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作者 王丽莎 朱乃硕 《复旦学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期507-513,共7页
细胞毒性T细胞相关抗原(Cytotoxic T Lymphocyte Associated Antigen 4,CTLA-4)是体内重要的免疫负调控因子,它可与CD28竞争跟B7分子的结合,抑制T细胞的活化.程序性死亡蛋白配体2(Programmed Death Ligand-2,PD-L2)可以和其受体程序性... 细胞毒性T细胞相关抗原(Cytotoxic T Lymphocyte Associated Antigen 4,CTLA-4)是体内重要的免疫负调控因子,它可与CD28竞争跟B7分子的结合,抑制T细胞的活化.程序性死亡蛋白配体2(Programmed Death Ligand-2,PD-L2)可以和其受体程序性死亡因子1(Programmed Death 1,PD-1)结合,产生的信号可以抑制TCR(T Cell Receptor)介导的T细胞增殖和细胞因子产生.为了得到一种新型的高效免疫负调控蛋白,从人基因组中克隆了CTLA-4和PD-L2胞外区,并在大肠杆菌中实现了其融合表达和纯化.ConA转化实验表明,PD-L2/CTLA-4融合蛋白能显著抑制小鼠淋巴细胞增殖,抑制率达69%.相比于CTLA-4和PD-L2分子单独使用,抑制率分别提高了23%和10%,混合淋巴实验抑制率达71%,提示其具有免疫负调控功能. 展开更多
关键词 CTLA-4 PD-l2 重组蛋白 免疫抑制 原核表达
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人乳头瘤病毒16型次要结构蛋白家兔免疫血清的制备及其特性研究 被引量:3
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作者 李玲玲 周珠哈 +2 位作者 朱珊丽 薛向阳 张丽芳 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2010年第6期418-420,共3页
目的制备高效价人乳头瘤病毒(HPV)16型次要结构蛋白(L2)特异性兔血清抗体,并对其效价及其与HPV16 L2蛋白结合的特异性进行鉴定。方法将重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2转化至E.coliBL21(DE3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表... 目的制备高效价人乳头瘤病毒(HPV)16型次要结构蛋白(L2)特异性兔血清抗体,并对其效价及其与HPV16 L2蛋白结合的特异性进行鉴定。方法将重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2转化至E.coliBL21(DE3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定融合蛋白的抗原性;经镍螯合亲和层析柱(Ni-NTA Agarose)纯化HPV16 L2全长融合蛋白,纯化蛋白用佐剂乳化后经日本大耳白家兔背部皮下多点免疫注射,间隔2周后加强免疫,共2次,并分别于免疫前和每次免疫后1周取血,采用Western blot检测血清抗体的特异性,采用ELISA法检测血清抗体水平及变化趋势。结果家兔用HPV16 L2融合蛋白全程免疫后均产生了抗HPV16 L2抗体,ELISA法检测最高滴度达1∶256 000;Western blot检测显示,该抗体能识别HPV16 L2蛋白。结论用原核HPV16 L2全长蛋白免疫家兔,可获得高效价的血清抗体,该抗体具有与HPV L2蛋白结合的特异性。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16型 次要结构蛋白 抗体 特性
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