糖氧剥夺/再灌注促进L2.3神经干细胞内源性Huwe1蛋白表达

目的建立L2.3神经干细胞糖氧剥夺/再灌注损伤模型,探讨糖氧剥夺/再灌注是否可以促进L2.3神经干细胞内源性Huwe1蛋白表达。方法将L2.3神经干细胞糖氧剥夺6h,根据不同组别再灌注培养8h、16、24h,建立L2.3神经干细胞/再灌注损伤模型。将体外培养的L2.3神经干细胞分成5组:正常对照组(control组)、糖氧剥夺组(OGD)、糖氧剥夺/再灌注8h组(OGD6h+R8h组)、糖氧剥夺/再灌注16h组(OGD6h+R16h组)、糖氧剥夺/再灌注24h组(OGD6h+R24h组)。Control组:该组L2.3神经干细胞不进行糖氧剥夺处理。OGD组:该组L2.3神经干细胞仅仅进行糖氧剥夺6h。OGD6h+R8h组:该组L2.3神经干细胞经历OGD6h后再灌注培养8h。OGD6h+R16h组:该组L2.3神经干细胞经历OGD6h后再灌注培养16h。OGD6h+R24h组:该组L2.3神经干细胞经历OGD6h后再灌注培养24h。结果与Control组比,OGD组L2.3神经干细胞糖氧剥夺6h后,活细胞比例明显减少[(94.15±3.59)vs(56.05±5.01),P<0.01];与OGD前比,OGD6再灌注8h Huwe1蛋白表达开始增加,OGD6h再灌注16h和OGD6h再灌注24h Huwe1蛋白表达量显著增加,Huwe1蛋白表达的条带明显变粗变浓,OGD6h再灌注16h最明显。结论糖氧剥夺可引起L2.3神经干细胞损伤;糖氧剥夺/再灌注可以促进L2.3神经干细胞内源性Huwe1蛋白表达。

Huwe1-shRNA靶向沉默L2.3神经干细胞的Huwe1表达

目的探讨Huwe1-shRNA通过慢病毒载体转染L2.3神经干细胞,是否可以靶向沉默L2.3神经干细胞的Huwe1基因。方法将体外培养的L2.3神经干细胞分成3组:huwe1-shRNA未转染组(control组)、阴性序列转染组(control shRNA组)、huwe1-shRNA转染组(Huwe1shRNA组)。Control组:仅常规体外培养L2.3神经干细胞。不将阴性序列和Huwe1-shRNA通过慢病毒载体转染L2.3神经干细胞。Control shRNA组:阴性序列通过慢病毒转染体外培养的L2.3神经干细胞。Huwe1shRNA组:Huwe1-shRNA通过慢病毒载体成功感染体外培养L2.3神经干细胞。分别收集三组体外培养的L2.3神经干细胞,应用western blot方法分别检测三组L2.3神经干细胞Huwe1蛋白的表达。结果与control组、control shRNA组比,Huwe1shRNA组体外培养的L2.3神经干细胞huwe1蛋白表达条带显著减弱、变细(P<0.05)。与control组Huwe1蛋白的相对表达量比,Huwe1shRNA组Huwe1蛋白的相对表达量是control组的25%(P<0.05)。与control组比,control shRNA组和Huwe1shRNA组在慢病毒载体转染L2.3神经干细胞,L2.3神经干细胞存活率无明显下降(P>0.05)结论 Huwe1shRNA通过慢病毒载体转染L2.3神经干细胞,可以靶向沉默L2.3神经干细胞Huwe1基因,却不影响L2.3神经干细胞的存活率。

糖氧剥夺/再灌注抑制L2.3神经干细胞N-Myc-DLL3-Notch信号系统

目的建立L2.3神经干细胞糖氧剥夺/再灌注损伤模型,探讨糖氧剥夺/再灌注是否可以抑制L2.3神经干细胞N-Myc-DLL3-Notch信号系统。方法体外培养的L2.3神经干细胞经历糖氧剥夺(OGD)6h,再灌注(R)16h,建立OGD/R模型。分别在OGD前、OGD6h、OGD6h再灌注16h,用western blot方法检测Notch1、NICD、DLL3和N-Myc蛋白表达情况。结果与糖氧剥夺/再灌注前比,糖氧剥夺6h,再灌注16h可下调Notch1、NICD、DLL3和N-Myc蛋白表达。结论糖氧剥夺/再灌注损伤可抑制L2.