5株在L20B细胞复制的非脊髓灰质炎肠道病毒的鉴定及基因特征分析

目的鉴定L20B细胞[转人脊髓灰质炎(脊灰)病毒受体基因的小鼠肺细胞系]支持生长的非脊灰肠道病毒(Non-polio Enteroviruses,NPEV)的血清型,并分析病毒基因特征,探讨其对脊灰病毒(Poliovirus,PV)分离率的影响。方法收集宁夏回族自治区从健康人群和广西壮族自治区从急性弛缓性麻痹病例粪便标本中分离的5株L20B细胞支持生长的NPEVs,对病毒分离物采用逆转录-聚合酶链反应进行VP4编码区基因扩增和核苷酸序列测定和分析,根据序列比对结果确定血清型,再进行全长VP1编码区序列测定和分析,并和基因数据库下载的相应血清型NPEVs的VP1编码区核苷酸序列进行比对和分析,构建基因亲缘性关系树。结果 5株NPEVs均鉴定为柯萨奇A组病毒(Coxsackie Virus GroupA,CVA),其中1株为CVA4,另1株为CVA8,其余3株均为CVA10,均属A组人肠道病毒(Human Enteroviruses,HEV);通过比较全长VP1编码区核苷酸同源性和构建亲缘关系树发现,3个血清型的中国分离株都分别独立成簇,与其他国家分离的相应血清型的NPEVs及原型株病毒差异都较大,是本土流行病毒株。结论所研究的L20B细胞支持生长的5株NPEVs均属A组HEV,包括CVA4、CVA8、CVA10三个血清型。由于L20B细胞对PV的最初接种具有很高的敏感性,因此L20B细胞即使支持某些CVA生长,也不会影响PV分离率。但在近年来中国发生较大规模手足口病(Hand,Foot and Mouth Disease,HFMD)的背景下,由于这些A组HEV同时是HFMD的病原体,对这些病毒的鉴定对PV的鉴别诊断和HFMD的预防控制都有实际意义。

三种细胞在脊髓灰质炎病毒检测中的应用比较

为了比较在常规应用条件下L2 0B细胞与RD、Hep 2细胞对脊髓灰质炎 (脊灰 )病毒 (PV)的敏感性和选择性 ,同时用 3种细胞检测急性弛缓性麻痹 (AFP)病例 412份粪便标本 ,进行PV分离鉴定及效价测定。结果表明 ,L2 0B细胞对PV更敏感 ,对PV有完全的选择性和良好的特异性 ,对同时混有非脊灰肠道病毒 (NPEV)和PV的粪便标本 ,L2 0B细胞能更快地检测出PV ,而RD、Hep 2细胞被NPEV的生长所掩盖。L2 0B细胞的PV检出率 (5 34 % )高于RD(4 6 1% )、Hep 2细胞 (2 6 7% )。L2 0B、RD、Hep 2细胞对PV的敏感性分别为 88%、76 %、44 % ,但 3种细胞对PV都出现了不同程度的漏检。从 2 5株PV效价滴定结果分析 ,3种细胞对PV的滴度均为L2 0B、RD细胞高于Hep 2细胞。表明L2 0B细胞能简化粪便标本PV检测过程。它的应用对PV分离不失为一种便捷、省时、省力、经济和可靠的方法。