lncRNA FER1L4调控Wnt/β-catenin信号通路对甲状腺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨lncRNA FER1L4调控Wnt/β-catenin信号通路对甲状腺癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:检测人甲状腺滤泡上皮正常细胞和甲状腺癌细胞中FER1L4的表达水平。将SW579细胞分为control组、si-NC组、si-FER1L4组、LiCl+si-FER1L4组;检测各转染组细胞FER1L4的表达水平,细胞增殖,细胞凋亡率,细胞迁移和侵袭;检测细胞Cleaved caspase3、β-catenin、c-Myc和Cyclin D1蛋白表达水平。结果:SW579细胞中FER1L4表达水平最显著;干扰FER1L4后,其细胞活力、增殖率、迁移和侵袭个数、β-catenin、c-Myc和Cyclin D1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率和Cleaved caspase3表达显著升高(P<0.05);与si-FER1L4组相比,LiCl+si-FER1L4组细胞活力、增殖率、迁移和侵袭个数、β-catenin、c-Myc和Cyclin D1蛋白表达显著升高,细胞凋亡率和Cleaved caspase3表达显著降低(P<0.05)。结论:干扰FER1L4的表达可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来抑制甲状腺癌恶性发展。

磁共振成像多模态参数联合miR-21、lncRNA FER1L4鉴别HCC与FNH的价值

目的探讨磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)多模态参数联合微RNA-21(microRNA-21,miR-21)和长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)FER1L4在鉴别肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)与局灶性结节增生(focal nodular hyperplasia,FNH)中的有效性和精度。方法选取2014年1月至2022年12月榆林市第一医院收治的78例患者为研究对象,其中HCC 50例,男29例,女21例,年龄(59.03±13.12)岁,病程(2.12±1.43)年;FNH 28例,男16例,女12例,年龄(31.48±9.29)岁,病程(2.27±1.39)年。比较两组MRI多模态参数[持续性强化、快进快出、信号强度(signal intensity,SI)增强率、标准化表观扩散系数(standardized apparent diffusion coefficient,SIADC)、瘤周低信号环、对比剂充盈缺损、线状低信号分隔和中央星状瘢痕]以及病变组织中miR-21和lncRNA FER1L4水平。采用受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)评估MRI、miR-21和lncRNA FER1L4的诊断效能。采用t检验、χ^(2)检验。结果两组强化方式、SI增强率差异均无统计学意义(χ^(2)=3.640,t=0.207,均P>0.05),但是FNH组SIADC高于HCC组(t=7.906,P<0.05);两组肝胆期形态学特征(瘤周低信号环、对比剂充盈缺损、线状低信号分隔和中央星状瘢痕)比较,差异均有统计学意义(χ^(2)=17.160、17.814、21.840、13.868,均P<0.05)。HCC组织中miR-21表达水平高于FNH组织,而FER1L4表达水平低于FNH组织(均P<0.05)。当MRI、miR-21和lncRNA FER1L4三者联合时,诊断出HCC 49例,FHN 27例,曲线下面积0.972,灵敏度和特异度分别为98.0%和96.4%,约登指数0.944。结论MRI多模态参数联合病变组织中miR-21和lncRNA FER1L4水平可有效区分HCC和FNH。

长链非编码RNA FER1L4在肝细胞癌中调节miR-106a-5p发挥抑癌因子作用的研究

目的:探讨长链非编码RNA FER1L4(lncRNA FER1L4)调节miR-106a-5p的表达影响肝癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的可能机制及其临床意义。方法:收集2017~2019年阜阳市第五人民医院及大连大学附属中山医院36例肝细胞癌患者手术标本,采用荧光定量PCR技术(RT-qPCR)分析肝癌细胞和癌旁正常肝细胞中lncRNA FER1L4和miR-106a-5p的表达情况。同时采用RT-qPCR分析肝癌细胞系Huh-7、HepG2和正常肝细胞系L-02中lncRNA FER1L4和miR-106a-5p的表达情况。采用CCK-8法、细胞划痕及集落形成实验等方法测定细胞的增殖、转移和成瘤能力。结果:与正常组织相比,lncRNA FER1L4在肝癌组织中表达较低(P<0.05),而miR-106a-5p表达较高(P<0.05),且两者呈负相关(P<0.0001,R2=0.376);与对照组相比,下调FER1L4肝癌细胞的增殖能力增加(P<0.05),敲除FER1L4肝癌细胞的迁移和侵袭能力增加(P<0.05);与对照组相比,转染FER1L4 siRNA的肿瘤细胞中miR-106a-5p的表达增高(P<0.05),敲除miR-106a-5p的肿瘤细胞中FER1L4的表达增高(P<0.05),两者之间存在相互抑制的关系。结论:lncRNA FER1L4通过抑制miR-106a-5p的表达对肝细胞癌产生抑制作用,单独或联合检测lncRNA FER1L4和miR-106a-5p可能预测肝癌的临床预后。

lncRNA FER1L4与恶性肿瘤患者生存不佳的Meta分析与生物信息学分析

目的通过Meta分析和生物信息学分析验证长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)fer1样家族成员4(fer-1 like family member 4,FER1L4)与多种恶性肿瘤患者总生存率(overall survival,OS)的关系。方法检索Pubmed、Web of Science、Cochrane Library、Elsevier、ScienceDirect、中国国家知识基础设施、万方、维普期刊以及超星期刊等中英文文献数据库自建库至2022年5月发表的关于FER1L4与恶性肿瘤患者生存不佳的相关研究。按照纳入标准和排除标准进行文献筛选,采用纽卡斯尔-渥太华量表(the Newcastle-Ottawa scale,NOS)对所纳入研究进行质量评价,使用Reviewer Manager 5软件进行Meta分析。通过基因表达谱交互分析数据库(gene expression profiling interactive analysis,GEPIA)检索FER1L4在其他多种肿瘤患者的表达以及与患者生存率之间的关系。结果共检索出519篇研究,最终纳入4项研究,包括437例骨肉瘤(osteosarcoma,OSA)、肾透明细胞癌(kidney clear cell carcinoma,KIRC)、子宫内膜癌(uterine corpus endometrial cancer,UCEC)、结肠癌(colon adenocarcinoma,COAD)患者。FER1L4异常表达可导致OSA、KIRC、UCEC、COAD患者OS降低[HR=1.5495%CI(1.06,2.23),P=0.02]。FER1L4在膀胱尿路上皮癌(bladder urothelial carcinoma,BLCA)、胆管癌(cholangiocarcinoma,CHOL)、COAD、KIRC、肾乳头状细胞癌(kidney renal papillary cell carcinoma,KIRP)、肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)、肺鳞癌(lung squamous cell carcinoma,LUSC)、直肠腺癌(rectum adenocarcinoma,READ)、UCEC等9种肿瘤中表达量升高。FER1L4高表达的KIRC、间皮瘤(mesothelioma,MESO)、多形成性胶质细胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)、肾上腺皮质癌(adrenocortical carcinoma,ACC)、KIRP、脑低级别胶质瘤(brain lower grade glioma,LGG)患者的生存率较低。结论FER1L4不同表达含量对不同肿瘤患者生存率具有不同影响,需要对具体肿瘤类型进行具体分析。

L4级自动驾驶汽车发展综述

为了减小交通事故概率、降低运营成本、提高运营效率,实现安全、环保的出行,自动驾驶技术的发展已成为大势所趋,而搭配有L4级自动驾驶系统的车辆是将车辆驾驶全部交给系统。据此,介绍了自动驾驶汽车的主流技术解决方案;分析了国内外L4级自动驾驶汽车的已发布车型、所应用的技术以及相关法规等;研究国内L4级自动驾驶系统发展所遇到的机遇与挑战。

L4虚拟内存子系统的形式化验证

第二代微内核L4在灵活度和性能方面极大地弥补了第一代微内核的不足,这引起学术界和工业界的关注.内核是实现操作系统的基础组件,一旦出现错误,可能导致整个系统瘫痪,进一步对用户造成损失.因此,提高内核的正确性和可靠性至关重要.虚拟内存子系统是实现L4内核的关键机制,聚焦于对该机制进行形式建模和验证.构建了L4虚拟内存子系统的形式模型,该模型涉及映射机制所有操作、地址空间所有管理操作以及带TLB的MMU行为等;形式化了功能正确性、功能安全和信息安全三方面的属性;通过部分正确性、不变式以及展开条件的推理,在定理证明器Isabelle/HOL中证明了提出的形式模型满足这些属性.在建模和验证过程中,发现源代码在功能正确性和信息安全方面共存在3点问题,给出了相应的解决方案或建议.

长链非编码RNA EPB41L4A-AS1通过AKT调控子宫颈癌细胞的自噬水平

目的探讨长链非编码RNA EPB41L4A-AS1通过AKT调控子宫颈癌细胞自噬的作用和机制。方法运用小干扰RNA(siRNA)敲低子宫颈癌细胞HeLa中的EPB41L4A-AS1后,应用Western blot技术检测p62、LC3和AKT的蛋白表达水平,qRT-PCR检测AKT1和AKT2的mRNA表达水平。在GFP-LC3稳定过表达的HeLa细胞中转染siEPB41L4A-AS1,利用共聚焦扫描显微镜检测外源性LC3形成的自噬小体的变化。在HeLa细胞中转染siEPB41L4A-AS1,利用免疫荧光技术和荧光显微镜检测内源性LC3形成的自噬小体的变化。基因集富集(gene set enrichment analysis,GSEA)分析AKT和自噬通路在EPB41L4A-AS1高表达组和低表达组子宫颈癌患者中的富集情况。结果与对照组相比,敲低EPB41L4A-AS148 h后HeLa细胞中p62表达水平显著下降(10%血清组:1.00±0 vs 0.39±0.17,无血清组:1.00±0 vs 0.55±0.14,P<0.05);LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ比值显著上升(10%血清组:1.00±0 vs 1.92±0.19,无血清组:1.00±0 vs 14.35±3.89,P<0.05);AKT1的mRNA(P<0.01)和蛋白(1.00±0 vs 1.82±0.14,P<0.01)水平均显著上调。GFP-LC3稳定过表达的HeLa细胞和未经处理的HeLa细胞在敲低EPB41L4A-AS1后,细胞内自噬小体的数量显著增多(P<0.05),且体积增大(P<0.05)。GSEA分析发现AKT和自噬通路在EPB41L4A-AS1低表达组子宫颈癌患者中显著富集。结论EPB41L4A-AS1可能通过AKT抑制子宫颈癌细胞的自噬水平。

L4/5单节段融合对不同腰椎Roussouly分型腰椎骨盆矢状位参数和临床疗效的影响

目的：探讨腰椎单节段（L4/5）融合对不同腰椎Roussouly分型腰椎骨盆矢状位参数和临床疗效的影响.方法：回顾我院2008年3月～2012年3月行L4/5节段融合的患者317例,共纳入具有健康相邻节段、随访≥3年、资料齐全者51例.男25例,女26例,平均年龄43.45岁.依据腰椎前凸顶点位置将腰椎矢状位曲线分为四型（Roussouly分型）：Ⅰ型,顶点位于L5椎体或者L4/5椎间隙;Ⅱ型,顶点位于L4底部或者中部;Ⅲ型,顶点位于L4上部或者L3/4椎间隙;Ⅳ型,顶点位于L3椎体及其以上.术前、术后和末次随访时行视觉模拟评分（VAS）、Oswestry功能障碍指数（ODI）、JOA评分,测量腰椎前凸角（LL）、上半圆（UP arc）、L4/5椎间前凸角（I-VA4-5）、骨盆入射角（PI）、骨盆倾斜角（PT）、骶骨倾斜角（SS）、C7垂线骶骨距离/股骨头骶骨距离比值（C7PL/SFD ratio）,术前相邻节段评估应用MRI Modified Pfirrmann Scale（Modic）量表分析,随访应用UCLA量表结合脊柱退变稳定性标准评估影像学相邻节段退变（rASD）情况.结果：本组腰椎Roussouly分型的分布如下：Ⅰ型10例（19.61％）,Ⅱ型15例（29.42％）,Ⅲ型20例（39.22％）,Ⅳ型6例（11.76％）.平均随访42.58个月（36～67个月）.Ⅰ型：术后和末次随访时的LL、UP arc、和SS较术前显著提高,PT减小,具有统计学差异（P＜0.01）.Ⅱ和Ⅲ型：LL末次随访时较术前显著提高（P＜0.05）,而SS、PT、PI无显著性变化,Ⅱ型末次随访时UParc较术前和术后显著提高.Ⅳ型：LL、UP arc、SS、PT和PI手术前和术后对比无显著性差异.各型术后及随访时的IVA4-5较术前提高,而C7PL/SFD比值减小,各型术后及末次随访时的VAS、ODI和JOA评分与术前相比显著改善.本组病例中rASD发病率为17.64％,rASD相关危险因素分析发现：年龄、随访时间、IVA4-5、PI是显著危险因素.结论：单节段融合可显著增加节段前凸角,但在不同腰椎Roussouly分型中对脊柱-骨盆参数的影响有所不同.节段椎间角度是ASD的显著危险因素,年龄越大,随访时间越长,PI值较高时较容易发生rASD.

基于CT图像腰椎L4～L5节段有限元模型建立与分析

基于CT图像结合图像处理及有限元分析软件采用六面体网格建立完整的人体腰椎L4～L5活动节段三维有限元模型,并对模型有效性进行验证与分析.用块状化分割方法对腰椎模型进行几何处理,然后对二维四边形单元使用扫略和拉伸等方法生成六面体实体单元从而建立三维腰椎有限元模型,并另外建立单元数量和单元类型不同的腰椎有限元模型用以对比.观察腰椎在轴向力和6个方向的扭矩作用下的变形和位移以及椎间盘的应力分布情况.建立的原始模型共有110 762个单元,111 644个节点,模型在500、1000、1 500、2000 N轴向压缩力作用下的位移分别为0.34、0.65、0.91、1.21 mm,在前屈、后伸、侧弯和扭转工况下关节活动度分别为5.69°、2.28°、3.41°和1.29°,终板最大应力分布规律与前人研究结果一致.用六面体单元划分网格的精细有限元模型可兼顾模型的计算效率及精度,所建模型符合腰椎一般生物力学特点,可用于模拟生物力学实验及对脊柱生物力学的进一步研究.

椎板间隙成形技术在经椎板间入路完全内窥镜下手术治疗L4/5椎间盘突出症中的应用

目的 :评价椎板间隙成形技术在完全内窥镜(full-endoscopic,FE)下经椎板间入路手术治疗L4/5椎间盘突出症中的应用价值及临床疗效。方法:2013年2月~2013年8月,我院应用FE下经椎板间入路手术治疗腰椎间盘突出症患者90例,男60例,女30例;年龄22~68岁,平均41.4±13.3岁。其中L4/5椎间盘突出症患者38例(A组),L5/S1椎间盘突出症患者52例(B组)。记录两组患者术前影像学参数、围手术期指标及疼痛视觉模拟评分(visual analogue scale,VAS)、腰椎Oswestry功能障碍指数(oswestry disability index,ODI),参照改良Mac Nab标准评价临床疗效,并进行统计学分析。结果 :所有患者随访2年以上,平均34.8±4.0个月(25~42个月)。A组患者FE术中均需进行椎板间隙成形技术预处理骨性椎板窗,而B组患者未行椎板间隙成形技术。两组患者术前椎间盘突出类型方面存在显著差异(P<0.05),A组患者以肩上型椎间盘突出为主(29/38,76.3%),而B组患者以腋下型椎间盘突出最常见(34/52,65.4%)。除A组在手术时间明显大于B组外(分别为73.1±9.7min和55.2±7.5min,P<0.05),两组在住院天数、重返工作时间及并发症发生率方面均无显著差异(P>0.05)。两组患者术后VAS评分、ODI评分均较术前明显改善,末次随访时改良Macnab标准评价优良率分别为84.2%和86.5%,两组间无统计学差异(P>0.05)。结论:尽管FE下经椎板间入路手术治疗L4/5椎间盘突出症需术中采用椎板间隙成形技术预处理骨性椎板窗而延长手术时间,但仍可以获得与L5/S1节段一致的良好临床疗效,而且并未增加术后神经损伤和腰椎不稳的发生。

C5-6、T12-L1、L4-5椎间盘与相邻椎体的压缩力学特性

对比分析C5-6、T12-L1、L4-5椎间盘与相邻椎体的压缩力学性质,确定不同部位的椎间盘与相邻椎体是否具有不同的压缩力学性质。人死后1 h内解剖取出死者C1-S1脊柱标本,以线锯切取C5-6、T12-L1、L4-5椎间盘与相邻椎体标本各13个。在日本岛津电子万能实验机上进行实验。实验速度为5mm/min,以统计分析和t检验的方法处理实验数据。L4-5组椎间盘与相邻椎体最大载荷大于T12-L1和C5-6组,差异显著(P<0.01);C5-6组最大位移大于L4-5组和T12-L1组,差异显著(P<0.01);L4-5组椎间盘与相邻椎体最大应力大于C5-6和T12-L1组,差异显著(P<0.01);C5-6组椎间盘与相邻椎体最大应变大于L4-5和T12-L1组,差异显著(P<0.01)。C5-6、T12-L1、L4-5椎间盘与相邻椎体标本的压缩力学性质有一定区别。

模拟后路间盘摘除植骨与置融合器术L4-S1腰椎稳定性与粘弹性实验研究

设计研制了一种钛合金腰椎融合器 ,并进行生物力学测试。方法是取 18具新鲜成年男性L4 S1腰椎标本 ,处理成所需试样 ,分别进行前屈、后伸、左、右侧弯、左、右侧扭转、和轴向压缩实验 ,经统计学分析后自编程序拟合出载荷 位移曲线和扭矩 扭转角曲线。进行了粘弹性实验 ,方法是取 18具新鲜成年男性L4 S1腰椎标本 ,测定完整L4 S1(正常组 )、模拟后路间盘摘除植骨组 (对照 1组 )和模拟后路间盘摘除置入融合器组 (对照 2组 )L4 S1段腰椎的应力松弛和蠕变效应。得出了在恒应力、应变条件下应力、应变 时间曲线及数据。用回归分析的方法处理实验数据 ,得出了归一化应力松弛、蠕变函数及曲线 ,对后路间盘摘除植骨与置入纯钛融合器对脊柱稳定性的影响进行分析讨论。

8L4S176T观测系统在渤海CF区块海底电缆地震采集中的应用

为在渤海CF区块复杂过渡带获得高品质的地震采集资料,采用了8L4S176T观测系统,并在采集设备、震源选型、电缆铺设、二次定位等方面进行了详细论证;分析了采集作业过程中存在的施工效率低、潮流影响大、过往船只多等作业难点,提出了沿测线放炮、提前多铺设2根电缆、分时放炮、增加电缆配重、"圈地法"护缆等相应的技术措施,实施后取得了更丰富的波场信息,有效提高了地震资料分辨率,改善了该区块中深层复杂构造的成像精度。

人脊柱C5-6、T6-7、L4-5椎间盘归一化蠕变函数

对 9例 1 9～ 35岁新鲜的C5 6椎间盘、9例新鲜的T6 7椎间盘和 1 0例L4 5椎间盘进行了蠕变实验研究。模拟人体体温 36.5± 0 .5℃ ,对试样施加 30 0N的载荷 ,测得了椎间盘蠕变效应 ,得出其应变 时间曲线 ,经数学处理得出椎间盘蠕变函数和归一化蠕变函数及其曲线。

黄单胞菌L4毒素对反枝苋线粒体及细胞壁和表皮气孔的影响

目的:通过观察黄单胞菌L4毒素对反枝苋线粒体、细胞壁和表皮气孔叶片细胞的影响来探讨毒素的作用机理。方法:采用M itach i-800透射电镜和Ph ilips-XL30-ESEM扫描电镜方法观察。结果:黄单胞菌L4毒素使反枝苋叶片的线粒体膨大,破坏线粒体内膜结构,引起细胞壁质分离,叶面气孔关闭。结论:黄单胞菌L4毒素破坏线粒体内膜结构,从而使ATP代谢不能正常进行,叶面气孔关闭,而且蒸腾作用的热量无法散发,使叶片坏死萎蔫。

血清CXCL4L1、PSA联合超声参数在前列腺癌术后Gleason分级预测中的价值研究

目的:探讨血清CXC趋化因子配体4L1(CXCL4L1)、前列腺特异抗原(PSA)联合超声参数对前列腺癌术后格里森(Gleason)分级的预测价值。方法:选取2021年6月至2022年12月江西省新余市人民医院行经尿道前列腺电切术治疗的100例前列腺癌患者为研究对象,根据术后Gleason分级分为低中危组(Gleason评分≤7分,70例)、高危组(Gleason评分≥8分,30例);比较两组血清CXCL4L1、总前列腺特异抗原(tPSA)、游离前列腺特异抗原(fPSA)水平及超声参数〔前列腺特异抗原密度(PSAD)、前列腺内腺特异抗原密度(IGPSAD)、前列腺外腺特异抗原密度(EGPSAD)、超声评分〕;评价血清CXCL4L1、fPSA、tPSA、超声参数对术后Gleason分级的预测价值。结果:高危组血清CXCL4L1、fPSA、tPSA水平高于低中危组,PSAD、IGPSAD、EGPSAD、超声评分高于低中危组(P<0.05);血清CXCL4L1、fPSA、tPSA、超声参数联合预测术后Gleason分级的AUC大于各指标单独预测(P<0.05)。结论:血清CXCL4L1、PSA、超声参数与前列腺癌术后Gleason分级、临床病理特征密切相关,联合检测其水平对术后Gleason分级具有一定预测价值。

胃癌组织中lncRNA-AK054978、lncRNA-FER1L4的表达观察

目的观察长链非编码RNA(lncRNA)-AK054978、lncRNA-FER1L4在胃癌组织中的表达变化,并探讨其临床意义。方法胃癌患者96例,手术治疗时留取癌组织及癌旁组织,采用qRT-PCR法对癌组织及癌旁组织中的lncRNA-AK054978、lncRNA-FER1L4进行检测。分析癌组织中lncRNA-AK054978、lncRNA-FER1L4表达水平与胃癌患者临床病理参数的关系,采用Kaplan-Meier生存曲线法分析癌组织中lncRNA-AK054978、lncRNA-FER1L4表达与胃癌患者预后的关系。结果胃癌组织、癌旁组织中lncRNA-AK054978的相对表达量分别为7.32±2.12、1.04±0.12,两者相比,P<0.05;胃癌组织、癌旁组织中lncRNA-FER1L4的相对表达量分别为0.21±0.15、1.09±0.22,两者相比,P<0.05。胃癌组织中lncRNA-AK054978、lncRNA-FER1L4的相对表达量与肿瘤直径、分化程度、浸润深度、有无淋巴结转移、有无远处转移、TNM分期有关(P均<0.05)。癌组织中lncRNA-AK054978高表达的胃癌患者5年生存率为70.83%、生存时间为(51.94±2.29)个月,癌组织中lncRNA-AK054978低表达的胃癌患者5年生存率为83.33%、生存时间为(55.06±1.81)个月,两者相比,P均<0.05;癌组织中lncRNA-FER1L4低表达胃癌患者的5年生存率为72.92%、生存时间为(52.23±2.24)个月,癌组织中lncRNA-FER1L4高表达胃癌患者的5年生存率为87.50%、生存时间为(56.38±1.64)个月,两者相比,P均<0.01。结论胃癌组织中lncRNAAK054978高表达,lncRNA-FER1L4低表达;lncRNA-AK054978高表达和lncRNA-FER1L4低表达促进胃癌的恶性进展;lncRNA-AK054978、lncRNA-FER1L4可作为胃癌预后预测指标和治疗的潜在靶点。

转录因子Runx1对RPL4启动子的调节作用

目的:儿童白血病细胞全基因组芯片数据聚类分析发现,核糖体蛋白L4(ribosomal protein L4,RPL4)启动子区域具有转录因子Runx1的结合位点TTCATTCT,由此推测Runx1可能与该基因启动子之间存在调控作用。本研究通过观察Runx1蛋白与RPL4启动子之间的相互作用,了解Runx1对RPL4启动子转录活性的影响,探讨其在儿童白血病发生机制中的意义。方法:构建含RPL4启动子及其突变体的荧光素酶报告质粒,与Runx1的表达质粒共转染293T细胞,进行荧光素酶活性分析。结果:Runx1蛋白可使RPL4启动子的转录活性降低(P<0.01);随着Runx1剂量的增加,RPL4启动子的转录水平呈剂量依赖性降低(P<0.01);Runx1蛋白对RPL4启动子的突变体转录活性无调控作用(P>0.05)。结论:Runx1蛋白对RPL4启动子具有转录抑制作用,且具有明显的剂量依赖性;Runx1蛋白通过结合RPL4启动子区域的TTCATTCT位点发挥调控作用。

通路克隆入门载体pEN-L4＊-PrbcS-＊T-gfp-L3＊的构建及其应用

为了利用通路克隆(Gateway)技术构建一个含有两个目的基因表达盒的植物表达载体,并把目的基因编码的蛋白质定位到转基因植物的叶绿体中,通过定点突变技术,在含有attL4和attL3重组位点的Gateway入门载体pEN-L4-2-L3中产生HindⅢ和XhoⅠ的酶切位点,然后在这两个酶切位点之间插入一个含有1,5-二磷酸核酮糖羧化酶小亚基的光诱导型启动子(PrbcS)及其叶绿体基质定位序列(*T)和绿色荧光蛋白(GFP)报告基因(gfp)的DNA片段,获得pEN-L4*-PrbcS-*T-gfp-L3*入门载体.用该载体和另一个含有attL1和attL2重组位点的入门载体(pENTR*-PrbcS-*T-gus)与Gateway的目的载体pK7 m34GW2-8 m21GW3进行LR重组反应可以构建一个能串联gfp和gus两个报告基因表达盒的植物表达载体pKm-35S-PrbcS-*T-gfp-PROLD-PrbcS-*T-gus,所构建的植物表达载体转化烟草后,gfp和gus基因能插入到转基因烟草的基因组中并正常表达,所表达的GFP蛋白可正确定位到转基因植物的叶绿体中,而GUS蛋白也可以在叶片中表达.利用此表达载体通过一次转化事件不仅可以完成两个目的基因的转化操作,而且还可以利用叶绿体基质定位序列(*T)把PrbcS控制表达的目的蛋白直接定位到转基因植物的叶绿体中.因此pEN-L4*-PrbcS-*T-gfp-L3*入门载体的应用进一步扩大了Gateway技术及植物表达载体的应用范围,为叶绿体基因工程操作提供了一个更方便的技术平台.

CT引导下经旁路联合注射胶原酶治疗L4-5椎间盘突出症的临床研究

目的探讨L45椎间盘突出经旁路联合注射胶原酶到突出物内和表面的技术与疗效。方法通过L45解剖学和影像学的研究分析,确定经椎间孔,通过硬膜外达突出物的穿刺入路。在临床应用中结合硬膜外CT空气造影解决该入路的准确性和安全性问题。对66例经CT检查证实、临床诊断为L45椎间盘突出症的患者在CT引导下经旁路直接注射胶原酶到突出物内和表面。结果穿刺成功率100%;术后3个月至3年的随访,62例疗效优良,优良率93%,23例3个月后CT复查22例突出物变小或消失,溶解率95%。结论CT引导下注射胶原酶治疗L45椎间盘脱出是一种简单、安全、准确、有效的技术方法。