CD99基因转染对霍奇金淋巴瘤L428细胞株表型、细胞周期与凋亡的影响

目的:观察CD99基因转染对霍奇金淋巴瘤L428细胞株表型、细胞周期与凋亡的影响。方法:L428细胞分为3组:转染CD99基因组、转染空质粒组及空白对照组。采用免疫细胞化学方法检测3组细胞CD15、CD30与CD99的表达,并用流式细胞术分别检测细胞周期和细胞凋亡。结果:与其他2组相比,转染CD99基因组L428细胞CD15、CD30表达消失,但可检测到CD99的表达。3组细胞周期分布存在差异,转染CD99基因组细胞阻滞于G2/M期(F=24.85,P<0.001)。3组细胞凋亡率相比,差异有统计学意义(F=45.30,P<0.001),其中转染CD99基因组细胞凋亡率为(12.7±4.6)%,高于转染空质粒组的(4.0±0.9)%和空白对照组的(3.6±1.6)%(P<0.05)。结论:CD99基因可能在霍奇金淋巴瘤的发生中起重要作用。

mic2/CD99基因克隆及在霍奇金淋巴瘤L428细胞株中表达

目的克隆mic2/CD99基因并表达于L428细胞株。方法通过PCR及双酶切方法,从Jurkat细胞基因组RNA中获得mic2/CD99全长基因编码序列,克隆到pcDNA3.1(+)质粒载体上,构建包含mic2/CD99全长基因载体;用脂质体转染法将mic2/CD99全长基因载体转染至L428细胞系;并从分子水平验证其存在。结果RT-PCR方法扩增出大小为558bp片段,序列测定其编码序列正确,酶切鉴定亚克隆序列正确。结论成功构建了mic2/CD99全长基因载体,并稳定转染于L428细胞株中。

BCL-6在经典型霍奇金淋巴瘤细胞株L428和过表达CD99的L428中的表达差异及其意义

目的:探究BCL-6在经典型霍奇金淋巴瘤(classical Hodgkin's lymphoma,cHL)细胞株LA28和过表达CD99的LA28(L428-CD99^+)中的表达差异及其意义。方法:应用免疫细胞化学和免疫荧光共聚焦检测BCL-6和CD99在cHL细胞株LA28和LA28-CD99^+中的表达;运用实时荧光定量PCR和Western blotting检测细胞株LA28和LA28-CD99^+中BCL-6和CD99的表达水平;MTT实验检测LA28和L428-CD99^+细胞增殖能力的差异;流式细胞术检测L428和LA28-CD99^+细胞的凋亡差异。结果:免疫细胞化学和免疫荧光共聚焦显示CD99在LA28细胞中为阴性表达,在L428-CD99^+细胞中为阳性表达,并定位于细胞膜;BCL-6在LA28细胞为阴性表达,在LA28-CD99^+细胞株中为阳性表达,并定位于细胞核。Western blotting显示CD99和BCL-6在LA28细胞为阴性表达,在LA28-CD99^+细胞为阳性表达。实时荧光定量PCR结果显示,与L428细胞相比,CD99和BCL-6 mRNA在LA28-CD99^+细胞中的表达量增高(P<0.01)。MTT显示LA28细胞增殖能力强于L428-CD99^+细胞(P<0.01);流式细胞术显示L428-CD99^+细胞凋亡较LA28细胞增多(P<0.01)。结论:过表达CD99诱发BCL-6表达增高,可导致L428细胞增殖能力下降及凋亡增加。

硼替佐米促进霍奇金淋巴瘤细胞系L428的凋亡

目的探究硼替佐米对霍奇金淋巴瘤细胞系L428凋亡的影响及可能的机制。方法不同浓度的硼替佐米(0、10、30与50 nmol/L)培养L428细胞后,用倒置显微镜观察L428细胞形态;Hoechst33258染核观察细胞核;MTT法检测细胞活力;TUNEL染色试剂盒和Annexin V-FITC双染细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡;Western blot法检测凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、Bax和Bcl-2的表达。结果与对照组相比,硼替佐米促使L428细胞出现拉丝、稀疏现象;细胞核出现核固缩和凋亡小体;硼替佐米浓度依赖性抑制L428细胞活力(P<0.05),诱导细胞凋亡(P<0.05);浓度依赖性下调Bcl-2蛋白水平(P<0.05);浓度依赖性上调cleaved caspase-3和Bax蛋白水平(P<0.05)。结论硼替佐米可能通过影响凋亡蛋白的表达促进霍奇金淋巴瘤细胞系L428凋亡。

经典型霍奇金淋巴瘤中大细胞与小细胞亚系生物学特性比较

目的:探究经典型霍奇金淋巴瘤细胞系L428中大小细胞亚系生物学特性差异及其意义。方法:应用有限稀释法分离出L428中大小细胞亚系并进行传代培养,分别命名为L428-big和L428-small细胞。免疫细胞化学实验检测L428中大小细胞亚系CD15和CD30表达差异,MTT实验检测L428中大小细胞亚系增殖能力的差异;流式细胞术检测L428中大小细胞亚系的凋亡差异。结果:成功分离出L428细胞株中大小细胞亚系并进行传代培养;免疫组化显示L428-big细胞的CD15及CD30表达明显强于L428-small细胞;MTT实验显示,L428-big细胞和L428-small细胞之间增殖能力差异有统计学意义,F=565.273,P<0.001,L428-small细胞增殖能力高于L428-big细胞,P<0.001;流式细胞术显示,L428-big细胞的凋亡率为(3.3±0.1)%,明显多于L428-small细胞(0.4±0.1)%,P<0.001。结论:L428-small细胞增殖能力强,凋亡少,为经典型霍奇金淋巴瘤细胞起源的进一步研究提供一定的实验基础。