桔小实蝇flightin基因RNAi载体构建

以云南省林业和草原科学院森保所室内饲养的桔小实蝇为材料,采用RT-PCR技术,克隆桔小实蝇(Bactrocera dorsalis Hendel.)flightin的基因片段,并以此为靶标,设计有效的干扰片段,以线虫RNAi干扰载体L4440为载体,构建桔小实蝇flightin基因RNAi载体。通过PCR、酶切检测及测序,证明表达载体构建正确。本研究为通过RNAi研究桔小实蝇flightin的基因功能奠定了基础。

利用细菌表达dsRNA介导黄粉虫抗冻蛋白基因的RNA干扰

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是研究基因功能的一种重要工具。为了利用RNAi技术对黄粉虫抗冻蛋白(Antifreeze protein,AFP)基因的非抗冻功能进行验证,将黄粉虫抗冻蛋白基因Tmafp433的相应干扰片段构建至L4440干扰载体并转化大肠杆菌HT115(DE3)菌株,利用IPTG诱导表达特异的afp基因相应dsRNA,纯化后注射黄粉虫幼虫,通过实时荧光定量PCR检测afp基因在mRNA水平的变化。结果显示含有L4440-Tmafp重组质粒的HT115菌株可以表达干扰afp基因的dsRNA,命名为Tmafp-dsRNA。用Tmafp-dsRNA注射黄粉虫24 h后,Tmafps的表达受到显著抑制,相比对照下降了60.8%。本研究表明通过注射dsRNA可有效抑制黄粉虫afp基因的表达。