雷公藤甲素致L5178Y细胞及小鼠Pig-a基因突变风险评价

目的:评价雷公藤甲素(TPL)的潜在致Pig-a基因突变风险。方法:采用小鼠淋巴瘤L5178Y细胞分别进行非S9(-S9)代谢和S9(+S9)代谢条件下体外实验。-S9代谢条件实验中,L5178Y细胞分为对照组(1%二甲基亚砜)、阳性对照甲基磺酸乙酯(EMS,500μg·mL-1)组和TPL各质量浓度(6.3、12.5、25.0、50.0、100.0 ng·mL^-1)组,受试物处理24 h后细胞计数,更换培养基培养8 d,表达结束后进行流式检测。+S9代谢条件实验中,L5178Y细胞分为对照组(1%二甲基亚砜)、阳性对照苯并芘[B(a)P,5μg·mL^-1]组和TPL各质量浓度(12.5、25.0、50.0、100.0、200.0 ng·mL^-1)组,受试物处理4 h后更换培养基,24 h后计数,培养8 d,表达结束后进行流式检测。体内Pig-a基因突变实验中,KM小鼠按体质量随机分为对照组(0.5%羧甲基纤维素钠)、阳性对照N-乙基-N-亚硝基脲(ENU,100 mg·kg^-1)组和TPL各剂量(50、100、200μg·kg^-1)组。ENU组仅于首次给药日给药1次,TPL各剂量组连续给药28 d,分别于给药前和首次给药后14、28、42、56 d于小鼠眼内眦采血,血样经缓冲液洗脱后,进行anti-CD24-PE和anti-CD61-PE标记,采用免疫磁性分离架进行柱前和柱后样品的收集,利用流式细胞仪对样本进行检测计数,对突变率进行统计分析。结果:体外Pig-a基因突变实验结果表明,在-S和+S 9代谢条件下,与对照组比较,TPL各剂量组Pig-a基因突变率差异无统计学意义,且无剂量依赖性。体内Pig-a基因突变实验结果显示,与对照组比较,TPL组小鼠红细胞(RBC)和网织红细胞(RTC)CD24缺失差异无统计学意义,且无剂量依赖性。结论:TPL质量浓度为200 ng·mL^-1及200μg·kg^-1以下时不会引起L5178Y细胞及KM小鼠发生Pig-a基因突变。

小鼠淋巴瘤tk基因突变试验检测雄黄的致突变性

目的用小鼠淋巴瘤tk基因突变试验检测雄黄浸出液的致突变性。方法在加或不加S9(萃巴比妥钠+β萘黄酮诱导鼠肝匀浆上清液)条件下,用不同质量浓度雄黄浸出液可溶性砷处理小鼠淋巴瘤L5178Y细胞,采用微孔板法进行细胞毒、平板接种效率和突变频率测定,用统计学方法进行评价。结果非活化条件下用雄黄浸出液处理3 h和24 h后,随着浸出液可溶性砷质量浓度的增加,小鼠淋巴瘤细胞的平板效率(PE0和PE2)、相对存活率(RS0)、相对悬浮生长(RSG)、相对总生长率(RTG)逐渐下降,24 h作用后最高剂量3.0μg/mL的RS0仅为6.72%、RSG仅为3.94%、RTG仅为0.34%,表明雄黄对小鼠淋巴瘤细胞有明显的毒性,且作用时间长细胞毒性更明显。随着浸出液可溶性砷质量浓度的上升,抗性突变频率(MF)呈现上升趋势,表明雄黄具有致突变性。延长处理时间,雄黄的致突变性增强。活化条件下小鼠淋巴瘤细胞的PE0、PE2、RS0、RSG、RTG和MF的变化与非活化条件下结果相似,表明浸出液可溶性砷的毒性和致突变性不依赖于S9的活化。结论雄黄浸出液可溶性砷对小鼠淋巴瘤L5178Y细胞具有致突变性。

血府逐瘀汤对荷瘤小鼠的抑瘤作用

目的:观察血府逐瘀汤对荷瘤小鼠免疫功能的影响,探讨血府逐瘀汤的抗肿瘤效果及其抗肿瘤的免疫学机制。方法:小鼠造模后给予不同药物治疗,10d后观察药物对瘤重和脾细胞功能的影响。结果:血府逐瘀汤能够显著抑制瘤重,活化T淋巴细胞增殖能力,提高荷瘤小鼠脾脏L3 T4+ 细胞数量,升高L3 T4+ /Lyt - 2 + 细胞比值,促进IL - 2的分泌,但对Lyt- 2 + 细胞数量影响不大。结论:血府逐瘀汤能够完全逆转肿瘤抗原和环磷酰胺引起的免疫抑制,其抑瘤作用与增强机体细胞免疫功能有关。

运用胸苷激酶基因突变实验评价动物源性材料的遗传毒性

背景:目前大量动物来源的医疗器械产品,尤其是与人体直接接触的产品,应明确其力学性能、生物降解行为和生物相容性、细胞毒性、遗传毒性、免疫原性等是否符合临床要求。目的:评价动物源性材料的体外遗传毒性,比较非活化和活化、短期和长期胸苷激酶基因突变实验的异同。方法:按照GBT16886-12(1)制备可吸收性硬脑膜补片(马胶原)和人工生物心脏瓣膜(牛心包片)浸提液,以两种浸提液处理L5178Y小鼠淋巴瘤细胞3,24h后,采用微孔板法行胸苷激酶基因突变实验,计算接种效率、相对悬浮生长、相对存活率、相对总生长及突变频率等指标,并比较短期和长期,非活化和活化处理的结果。结果与结论:两种生物材料浸提液处理小鼠淋巴瘤细胞3h或24h,在活化及非活化条件下,胸苷激酶基因突变实验结果均为阴性。表明在体外遗传毒性实验中未发现可吸收性硬脑膜补片和人工生物心脏瓣膜致L5178Y细胞基因突变的作用,无遗传毒性。

用tk基因突变试验评价长春新碱和秋水仙碱的遗传毒性

目的评价有丝分裂抑制剂长春新碱和秋水仙碱的遗传毒性,并比较短期和长期tk基因突变试验的检出灵敏度.方法用长春新碱和秋水仙碱对小鼠淋巴瘤细胞分别进行3h及24h染毒,用微孔板法进行tk基因突变试验,计算相对悬浮生长、接种效率、相对存活率、相对总生长及突变频率等指标,并比较短期和长期处理的结果.结果两种受试物3h处理均未出现明显的阳性反应,而24h连续处理后,两种受试物均能诱导tk基因突变频率增高,诱发突变频率分别为自发突变频率的1.6～4.8倍和2.1～6.2倍,呈阳性结果.结论长春新碱和秋水仙碱在长期处理试验中能诱导tk基因突变,而在短期处理试验中未发现明显诱变性,即长期处理能提高tk基因突变试验的检出灵敏度.

染料木素的抗诱变性检测

目的 评价染料木素的抗诱变性。方法培养L5178Y细胞,根据不同的处理方法进行分组,阳性诱变组[染料木素0.078、0.156、0.312、0.625μg/m L 4种剂量分别联合甲基磺酸甲酯(MMS)5μg/m L或丝裂霉素C(MMC)0.5μg/m L]、阳性诱变对照组(MMS 5μg/m L或MMC 0.5μg/m L)、溶剂对照组(0.5%二甲基亚砜)、阴性对照组(纯水)以及抗诱变阳性对照组(维生素C 100μg/m L+MMS 5μg/m L或MMC 0.5μg/m L)。通过L5178Y小鼠淋巴瘤细胞实验微孔板法,采用前处理(染料木素先处理细胞3 h,然后MMS或MMC处理3 h)、同时处理(染料木素与MMS或MMC同时处理细胞3 h)和后处理(MMS或MMC先处理细胞3 h,然后染料木素处理3 h)3种处理方式,测定染料木素各剂量组tk位点突变频率,评价染料木素对MMS或MMC诱变性的拮抗作用。结果在染料木素抗诱变性检测中,在前处理和后处理条件下,染料木素各剂量组tk位点总突变频率显著低于MMS或MMC阳性诱变对照组,差异有高度统计学意义(P<0.01);在同时处理条件下,染料木素0.312、0.625μg/m L剂量组tk位点总突变频率显著低于MMS或MMC阳性诱变对照组,差异有高度统计学意义(P<0.01)。结论在3种处理方式下,染料木素能有效地抑制MMS和MMC的诱变作用,以前处理方式的抑制作用最强,有良好的开发利用前景。