大黄酸对小鼠淋巴瘤L5178Y细胞TK基因的致突变作用

目的评价大黄酸对小鼠淋巴瘤L5178Y细胞TK基因的致突变作用。方法小鼠淋巴瘤细胞在代谢活化或非代谢活化条件下暴露于50、200、350、500μg/mL大黄酸3 h,处理后第2天将细胞接种于含有突变选择剂三氟胸苷的96孔板中,计数各剂量组的突变细胞集落数。通过计算第0天的相对存活率(relative survival,RS)、相对悬浮增长率(relative suspension growth,RSG)和相对总增长率(relative total growth,RTG)确定细胞毒性。用MUTANT软件包计算各种细胞毒性参数和突变率,并对突变率数据进行统计分析。结果在非代谢活化条件下,50、200、350、500μg/mL的大黄酸均未见诱导L5178Y细胞的突变率增加,阳性对照组诱导的突变率显著增加;在代谢活化条件下,大黄酸350μg/mL剂量组诱导L5178Y细胞的突变率增加,阳性对照组诱导的突变率显著增加。结论在非代谢活化条件下大黄酸各剂量组对小鼠淋巴瘤L5178Y细胞TK基因无致突变作用;在肝微粒体酶系S9代谢活化条件下,出现了弱致突变性。

茶多酚对^(60)Coγ射线诱导L5178Y细胞凋亡及氧化应激的保护作用

目的探讨茶多酚(tea polyphenols,TP)对60Coγ射线诱导L5178Y细胞凋亡和细胞内活性氧水平(reactive oxygen species,ROS)的作用。方法 L5178Y细胞分为空白对照组、60Coγ射线辐照组、TP组及辐照加TP组共4组,TP组及辐照加TP组培养同时加入茶多酚终浓度分别为25、50、100μg/mL,60Coγ射线辐照组及辐射加TP组细胞给予8 Gy60Coγ射线一次性照射后,采用DCHF-DA探针测定细胞内活性氧(ROS)水平,Annexin V-FITC/PI双染和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果 8 Gy60Coγ射线照射后4 h,细胞活力明显降低,出现典型的细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳显示出现凋亡梯状条带,并伴随细胞内ROS水平明显升高,茶多酚能明显改善这些反应,TP处理组与辐照组相比有统计学差异(P<0.01)。结论茶多酚能显著降低60Coγ射线诱导的L5178Y细胞内活性氧产生,降低细胞凋亡率,对γ射线照射有一定的保护作用。

基于L5178Y细胞体外Pig-a基因突变试验方法的建立与初步探索

利用小鼠淋巴瘤细胞L5178Y tk+/--3.7.2C和阴性化合物Glc、NaCl及阳性化合物EMS、ENU、4-NQO、B(a)P建立并验证基于哺乳动物细胞的体外Pig-a基因突变检测方法。计算细胞相对倍增速率评价细胞毒性,抗体标记突变型细胞确定流式检测模板,L5178Y细胞经EMS处理后第4、8、12、16、20天检测Pig-a基因突变频率,确定最大突变频率发生时间点,免疫荧光技术检测CD90蛋白在细胞中的定位情况,采用PCR方法进行突变位点分析。结果表明(:1)Glc、NaCl、EMS、ENU、B(a)P、4-NQO所设浓度组RPD均大于50%。(2)Pig-a基因突变频率在给药后第8天出现峰值。Glc和NaCl致Pig-a基因突变频率均小于200×10-6,各浓度组与溶剂对照组间不存在显著性差异(P>0.05),EMS、ENU、B(a)P、4-NQO均可引起Pig-a基因突变频率增加,且与溶剂对照组相比存在显著性差异。(3)免疫荧光成像显示突变型细胞表面无CD90蛋白,野生型细胞正常表达CD45,CD90蛋白。(4)基因突变位点检测显示存在G→C、A→C、C→T三种突变类型。基于小鼠淋巴瘤L5178Y细胞分别在有无S9代谢活化条件下成功建立体外Pig-a基因突变的遗传毒性检测方法,旨为化合物体外遗传毒性评价或药物研发早期遗传毒性筛选提供新方法。

雷公藤甲素致L5178Y细胞及小鼠Pig-a基因突变风险评价

目的:评价雷公藤甲素(TPL)的潜在致Pig-a基因突变风险。方法:采用小鼠淋巴瘤L5178Y细胞分别进行非S9(-S9)代谢和S9(+S9)代谢条件下体外实验。-S9代谢条件实验中,L5178Y细胞分为对照组(1%二甲基亚砜)、阳性对照甲基磺酸乙酯(EMS,500μg·mL-1)组和TPL各质量浓度(6.3、12.5、25.0、50.0、100.0 ng·mL^-1)组,受试物处理24 h后细胞计数,更换培养基培养8 d,表达结束后进行流式检测。+S9代谢条件实验中,L5178Y细胞分为对照组(1%二甲基亚砜)、阳性对照苯并芘[B(a)P,5μg·mL^-1]组和TPL各质量浓度(12.5、25.0、50.0、100.0、200.0 ng·mL^-1)组,受试物处理4 h后更换培养基,24 h后计数,培养8 d,表达结束后进行流式检测。体内Pig-a基因突变实验中,KM小鼠按体质量随机分为对照组(0.5%羧甲基纤维素钠)、阳性对照N-乙基-N-亚硝基脲(ENU,100 mg·kg^-1)组和TPL各剂量(50、100、200μg·kg^-1)组。ENU组仅于首次给药日给药1次,TPL各剂量组连续给药28 d,分别于给药前和首次给药后14、28、42、56 d于小鼠眼内眦采血,血样经缓冲液洗脱后,进行anti-CD24-PE和anti-CD61-PE标记,采用免疫磁性分离架进行柱前和柱后样品的收集,利用流式细胞仪对样本进行检测计数,对突变率进行统计分析。结果:体外Pig-a基因突变实验结果表明,在-S和+S 9代谢条件下,与对照组比较,TPL各剂量组Pig-a基因突变率差异无统计学意义,且无剂量依赖性。体内Pig-a基因突变实验结果显示,与对照组比较,TPL组小鼠红细胞(RBC)和网织红细胞(RTC)CD24缺失差异无统计学意义,且无剂量依赖性。结论:TPL质量浓度为200 ng·mL^-1及200μg·kg^-1以下时不会引起L5178Y细胞及KM小鼠发生Pig-a基因突变。

L5178Y和W TK1细胞微核试验在抗诱变测试中的应用

为了研究 Ｌ５１７８ Ｙ 和 Ｗ Ｔ Ｋ１ 细胞应用于抗诱变测试系统的可靠性和有效性，按维生素 Ｃ（ Ｖｃ）和叶绿酸铜钠（ Ｃｈｌ）与丝裂霉素 Ｃ（ Ｍ Ｍ Ｃ）的加入顺序，分为同时处理、预处理和后处理三种处理方式，观察 Ｖｃ 和 Ｃｈｌ对 Ｍ Ｍ Ｃ诱导两种细胞微核的抑制作用。结果表明：① Ｖｃ 和 Ｃｈｌ本身无诱导两种细胞微核的作用；② Ｖｃ 与 Ｍ Ｍ Ｃ同时处理和预处理，能显著降低 Ｍ Ｍ Ｃ诱导的两种细胞微核率；③０．１２ｍ ｇ／ｍ ｌ Ｃｈｌ与 Ｍ Ｍ Ｃ同时处理和预处理，能显著降低 Ｍ Ｍ Ｃ诱导的两种细胞微核率，但０．０６ｍ ｇ／ｍ ｌ同时处理和预处理仅能显著降低 Ｍ Ｍ Ｃ诱导的 Ｗ Ｔ Ｋ１ 细胞微核率。后处理方式对微核反应无抑制作用。该研究结果与 Ｖｃ 和 Ｃｈｌ在其它抗诱变试验中的结果基本一致，表明 Ｌ５１７８ Ｙ 和 Ｗ Ｔ Ｋ１ 细胞微核试验在抗诱变作用检测方面有较好的应用价值。

L5178Y和WTK1细胞微核试验在诱变测试中的应用

系统比较了一组标准诱变剂诱导Ｌ５１７８Ｙ和ＷＴＫ１细胞的微核反应，结果表明，这两种细胞微核试验方法简便灵敏，有推广价值。两种细胞对受试物的反应各有特点，如同时应用于一个短测系统，可提高筛检诱变物的准确性。

基于L5178Y细胞的Pig-a基因突变试验方法学研究

目的:采用不同作用机制化合物研究基于L5178Y细胞体外Pig-a基因突变试验方法。方法:使用不同浓度范围的马兜铃酸I(aristolochic acid I,AAI)、N-亚硝基二乙胺(N-nitrosodiethylamine,NDEA)、甲磺酸甲酯(methyl methanesulfonate,MMS)、环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)、秋水仙素(colchicine,COL)、丝裂霉素C(mitomycin C,MMC)、糖精、乙烯利、苯并芘[benzoa pyrene,B(a)P]和4-硝基喹啉-N-氧化物(4-nitroquinoline N-oxide,4-NQO)共10种化合物,分别与L5178Y细胞作用一段时间后表达8 d,细胞经APC抗CD45与PE抗CD90.2抗体孵育后使用流式细胞术收集100万个细胞并识别表型为CD90-/CD45^(+)突变细胞,并计算突变率。结果:致突变剂AAI、NDEA、MMS、MMC、B(a)P、4-NQO分别在无或有代谢活化条件下导致L5178Y细胞Pig-a基因突变率显著性升高,而需代谢活化的致突变剂CP、整倍体诱变剂COL、非遗传毒性致癌物乙烯利和糖精的试验结果为阴性。结论:基于L5178Y细胞的体外Pig-a基因突变检测方法可在无及有代谢活化条件下有效检出致突变剂,特异性和可靠性较高,在药物基因突变风险评价及机制研究领域具有不可或缺的价值。

纺锤体毒剂诱导小鼠淋巴瘤细胞tk基因突变的研究

目的 研究纺锤体毒剂长春新碱和秋水仙碱对小鼠淋巴瘤L5 178Y3 .2 .7c -tk+ - 细胞tk基因突变的影响。方法 使用长春新碱和秋水仙素对L5 178Y细胞进行梯度染毒 ,再分别进行细胞毒性 ,细胞接种效率 ,相对存活率 ,相对悬浮生长率和突变频率测定。结果 随着长春新碱和秋水仙素剂量的增加 ,L5 178Y细胞的相对存活率和悬浮生长率均明显下降。在长春新碱 0 .5～ 2 .5ng ml,秋水仙素 10～ 5 0ng ml范围内可以诱导细胞tk基因的突变率达到自发突变率的 1～ 3倍。结论 长春新碱和秋水仙素对L5 178Y细胞具有明显的细胞毒性 。

丙烯酰胺诱导小鼠淋巴瘤细胞tk基因突变的研究

背景与目的:研究丙烯酰胺(Acrylamide,AA)对小鼠淋巴瘤L5178Y3.2.7c-tk+/-细胞tk基因突变频率的影响。材料与方法:使用丙烯酰胺对L5178Y细胞进行梯度染毒,分别进行细胞毒性,细胞接种效率,相对悬浮生长率和突变频率的测定。结果:随着AA剂量的增加,L5178Y细胞的相对存活率和悬浮生长率均明显降低。在150～750μg/ml范围内诱导L5178Y细胞tk基因的突变频率高于自发突变频率1～9倍,表明具有较强的致突变性。结论:AA对L5178Y细胞具有明显的细胞毒性,并可以诱导tk基因的突变。

硝酸羟胺诱导小鼠淋巴瘤细胞tk基因突变的研究

背景与目的:研究硝酸羟胺对小鼠淋巴瘤L5178Y-3.7.2c tk+/-细胞tk基因突变的影响。材料与方法:使用硝酸羟胺对L5178Y细胞进行梯度染毒,再分别进行细胞毒性,细胞接种效率,相对存活率,相对悬浮生长率和突变频率测定。结果:随着硝酸羟胺的剂量增加,L5178Y细胞的相对存活率和悬浮生长率均下降。在硝酸羟胺50-500 μg/ml范围内可以诱导细胞琥基因的突变率达到自发突变率几倍至十几倍。结论:硝酸羟胺对L5178Y细胞具有明显的细胞毒性,并可以诱导tk基因突变。

高能微波辐射对小鼠淋巴瘤细胞的影响

目的研究高能微波(HPM)对小鼠淋巴瘤L5178Y3.2.7c-tk+/-细胞的影响,以明确高能微波的致突变性和细胞毒性。方法微波频率为7.9 GHz,功率为10.0 mW/cm2,以不同的时间(0～75 min)辐照L5178Y细胞,分别进行细胞毒性、细胞接种效率、相对悬浮生长率和tk基因突变率的测定。结果随微波照射时间的延长,L5178Y细胞的相对存活率和悬浮生长率明显降低,照射75 min时分别降低51.4%和89.7%。最长照射时间诱导L5178Y细胞tk基因的突变率是阴性对照突变率1.5倍,尚未达到2倍,未见明显致突变性。结论HPM对L5178Y细胞具有明显的细胞毒性,但未见明显诱导tk基因突变。

乙基亚硝基脲诱导小鼠淋巴瘤细胞tk基因杂合性缺失

目的探讨tk基因分子突变的类型,对不同剂量乙基亚硝基脲(ENU)诱导小鼠淋巴瘤L5178Y3.2.7c-tk+/-细胞tk基因突变的杂合性缺失(LOH)进行分析,为环境致突变剂检测和突变机制研究提供依据。方法使用乙基亚硝基脲10μg/mL和100μg/mL剂量对L5178Y细胞进行梯度染毒,分别测定细胞毒性、细胞接种效率、相对存活率、相对悬浮生长率和突变频率等。挑选经ENU诱导的tk基因突变子(tk-/-)和自发突变体,提取基因组DNA,应用等位基因特异性PCR扩增、杂合性缺失分析等技术,分析其杂合性缺失的发生。结果低剂量和高剂量诱导突变体的tk基因LOH发生率分别为73.5%和69.1%。LOH分析结果显示,诱导突变体的LOH在大集落与小集落之间差异具有显著性(P<0.05)。结论功能性等位基因缺失是ENU诱导tk基因分子突变的重要形式之一,不同剂量可能具有不同的突变机制。

小鼠淋巴瘤细胞TK基因突变试验检测染料木素的诱变性

目的:用小鼠淋巴瘤细胞TK基因突变试验检测染料木素的诱变性。方法:不加S9活化的条件下,用染料木素5、10、15、20μg/ml处理L5178Y细胞3h,采用微孔板法进行细胞毒性、平板接种效率和突变频率测定。结果:随染毒剂量的增加,染料木素对L5178Y的细胞毒性增大。染料木素能诱发L5178Y细胞tk位点突变频率显著增高,当剂量达到15μg/ml以上时其诱发突变频率为自发突变的3倍以上。结论:染料木素对L5178Y细胞有明显的细胞毒性,并可诱发tk基因突变。

体外微核试验中吖啶橙荧光染色与Giemsa染色的比较

本文在吖啶橙荧光染色(A.O 染色)和常规 Giemsa 染色条件下比较了一组诱变剂丝裂霉素 C(MMC)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、长春新碱(VINC)、环磷酰胺(CYP)诱导 L5178Y 和 WTK1细胞的微核试验,结果表明,仅5-FU 和 CYP 在个别时间、剂量下 A.O 染色微核率明显高于 Giem-sa 染色(P<0.05),而绝大多数情况下二者微核率无显著性差异。提示在不具备荧光镜检条件或要求长期保留标本时,Giemsa 染色仍不失为微核染色的理想方法。

芦荟大黄素及芦荟提取物的诱变性和抗诱变性

目的:用L5178Y小鼠淋巴瘤细胞体外微核试验评价芦荟大黄素和芦荟提取物的诱变和抗诱变作用,为其安全性评价提供依据。方法:设溶剂对照、阳性对照和抗诱变对照,芦荟大黄素和芦荟提取物诱变和抗诱变试验各设4个剂量组,处理L5178Y细胞12 h后按常规方法进行体外微核试验分析。结果:较高浓度(6.67μg/ml)的芦荟大黄素可致微核细胞率增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);而芦荟提取物未见此效应。在一定剂量范围内,芦荟大黄素(0.22～6μg/ml)和芦荟提取物(20～180μg/ml)对甲磺酸甲酯(MMS)所致微核细胞率均有一定程度的拮抗作用,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:芦荟大黄素具有一定的诱变作用,而在本实验剂量范围内的芦荟提取物未见遗传毒性。两种受试物在一定范围内均能较好地拮抗MMS所致的染色体损伤。

染料木素的抗诱变性检测

目的 评价染料木素的抗诱变性。方法培养L5178Y细胞,根据不同的处理方法进行分组,阳性诱变组[染料木素0.078、0.156、0.312、0.625μg/m L 4种剂量分别联合甲基磺酸甲酯(MMS)5μg/m L或丝裂霉素C(MMC)0.5μg/m L]、阳性诱变对照组(MMS 5μg/m L或MMC 0.5μg/m L)、溶剂对照组(0.5%二甲基亚砜)、阴性对照组(纯水)以及抗诱变阳性对照组(维生素C 100μg/m L+MMS 5μg/m L或MMC 0.5μg/m L)。通过L5178Y小鼠淋巴瘤细胞实验微孔板法,采用前处理(染料木素先处理细胞3 h,然后MMS或MMC处理3 h)、同时处理(染料木素与MMS或MMC同时处理细胞3 h)和后处理(MMS或MMC先处理细胞3 h,然后染料木素处理3 h)3种处理方式,测定染料木素各剂量组tk位点突变频率,评价染料木素对MMS或MMC诱变性的拮抗作用。结果在染料木素抗诱变性检测中,在前处理和后处理条件下,染料木素各剂量组tk位点总突变频率显著低于MMS或MMC阳性诱变对照组,差异有高度统计学意义(P<0.01);在同时处理条件下,染料木素0.312、0.625μg/m L剂量组tk位点总突变频率显著低于MMS或MMC阳性诱变对照组,差异有高度统计学意义(P<0.01)。结论在3种处理方式下,染料木素能有效地抑制MMS和MMC的诱变作用,以前处理方式的抑制作用最强,有良好的开发利用前景。