活性氧促使L6成肌细胞的分化

目的探讨氧化应激对L6成肌细胞生长分化的影响。方法MTT法检测H2O2对L6细胞活力的影响;观察H2O2引起的细胞形态学变化,RT-PCR检测myogenin基因表达水平。结果在较短的处理时间内(1h),低浓度的活性氧(50μmol/LH2O2)有利于细胞的生长(P<0.05);H2O2处理12h后,50和150μmol/L的H2O2能够诱导成肌细胞分化的标记分子-myogenin基因的表达,形态学研究结果表明H2O2能够诱导肌管的形成,促使成肌细胞的分化。结论活性氧可能是细胞内诱导细胞生长与分化的信号分子。

羊胎盘肽对L6成肌细胞增殖能力和ATP浓度的影响

[目的]将羊胎盘肽粗品按照不同的分子量段进行划分,计算出不同分段的分子量分布,研究不同分子量段的羊胎盘肽对大鼠L6骨骼肌成肌细胞增殖能力和三磷酸腺苷(ATP(浓度的影响。[方法]采用凝胶过滤色谱法,将羊胎盘肽粗品进行分离,划分为不同的分子量段,以噻坐蓝(MTT)比色法检测不同分段羊胎盘肽对大鼠L6骨骼肌成肌细胞增殖的影响,并且采用增强型ATP检测试剂盒检测其对L6成肌细胞的ATP含量的影响。[结果]凝胶过滤色谱法分离羊胎盘肽划分为六段,其中F5、F6已不属于多肽或者氨基酸,故去除。MTT结果显示SPP(羊胎盘肽粗品)、F1、F2、F3均对大鼠L6骨骼肌成肌细胞增殖出现促进作用,其中羊胎盘中的组分F3促增殖作用最为显著;F4则出现轻微抑制的作用。最终确定除F3选用5μg/mL以外,其他各组均选用20μg/mL的加药浓度进行ATP浓度的检测。经过ATP实验,SPP和F3显著性促进骨骼肌成肌细胞的ATP浓度的升高(P<0.01),并且F3比SPP效果更好。而F1、F2和F4则促进ATP产生的作用并不显著。[结论] SPP以及其中的的F1、F2、F3、F4对于L6骨骼肌成肌细胞增殖能力的影响和ATP浓度的影响较为一致。其中,F3很可能是羊胎盘肽中的活性最好的部分,即分子量在260～89Da的部分。

基于网络药理学研究6-姜辣素改善L6成肌细胞糖脂代谢紊乱的作用机制

运用网络药理学研究6-姜辣素改善糖脂代谢紊乱的作用机制,并通过高果糖高油酸培养的L6大鼠成肌细胞模型进行验证。借助TCMSP数据库、SwissTargetPrediction数据库、GeneCards数据库,对6-姜辣素作用糖脂代谢紊乱的靶点进行预测,运用软件Cytoscape 3.7.1构建化合物靶点-疾病网络关系,采用STRING数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)分析,利用R包进行GO功能富集和KEGG通路富集分析;运用KEGG Mapper对富集基因进行基因映射。结合GO富集分析、KEGG通路分析和基因映射结果,该研究选择PI3K-AKT信号通路、mTOR、NF-κB-p65、ERK分子进一步进行体外实验验证。通过高果糖高油酸构建L6大鼠成肌细胞糖脂代谢紊乱模型,对细胞进行甘油三酯(TG)测定和油红染色,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测炎症相关蛋白IL-1β、TNF-α的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(real time polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白免疫印迹法检测6-姜辣素对PI3K-AKT信号通路、mTOR、NF-κB-p65、ERK分子的基因、蛋白表达的影响。网络药理学分析共得到6-姜辣素治疗糖脂代谢紊乱靶点113个,GO富集分析发现与蛋白质激酶活性关系密切,KEGG富集共筛选出20条相关信号通路,包括PI3K-AKT信号通路、乙型肝炎、丙型肝炎、人类巨细胞病毒感染、自噬等。体外实验表明6-姜辣素能减少高果糖高油酸诱导的L6细胞脂质积累,减少炎症相关蛋白IL-1β、TNF-α的表达,上调AKT的基因和蛋白磷酸化水平,下调mTOR、NF-κB-p65、ERK的磷酸化水平。这些结果提示6-姜辣素能够改善高果糖高油酸诱导的L6大鼠成肌细胞糖脂代谢紊乱,其机制可能与激活PI3K-AKT-mTOR轴改善胰岛素敏感性和抑制NF-κB-p65、ERK的磷酸化降低炎症反应有关,这为后续的基础研究提供理论基础。

miRNA-133a过表达对体外L6成肌细胞增殖分化作用机制的研究

目的 构建微小RNA-133a重组慢病毒载体,观察其转染后对L6成肌细胞增殖、分化及转录因子MEF2A的影响.方法 构建表达含微小RNA-133a基因的重组慢病毒载体,转染L6成肌细胞,以实时定量PCR（Taqman探针法）对微小RNA-133a基因表达水平进行检测;细胞计数试剂盒（CCK-8）试验评价微小RNA-133a过表达后对L6成肌细胞增殖的影响;倒置荧光显微镜观察L6成肌细胞增殖、分化的影响;Western blot法检测转录因子MEF2A表达水平的变化.结果 构建的微小RNA-133a重组慢病毒载体经质粒酶切和测序鉴定正确;与对照组比较,转染L6成肌细胞24h后,微小RNA-133a基因的相对表达量明显增加（P＜0.01）;L6细胞增殖数量明显增加（P＜0.01）,对L6成肌细胞的分化有明显抑制作用（P＜0.01）;MEF2A的表达量逐渐下降（P＜0.01）.结论 成功构建微小RNA-133a重组慢病毒载体并转染16成肌细胞后可高效表达微小RNA-133a,促进体外成肌细胞的增殖并抑制分化.

氧化苦参碱对H_2O_2诱导的L_6成肌细胞凋亡的影响

研究氧化苦参碱对L6大鼠成肌细胞H2O2凋亡的影响.采用过氧化氢损伤L6大鼠成肌细胞的方法,建立L6大鼠成肌细胞H2O2凋亡模型.使用剂量为0.3,0.15,0.75 g/L的氧化苦参碱处理细胞.应用MTT法统计存活率和流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,用DAPI荧光染色、HE染色以及Bax和Bcl-2抗体鉴定损伤程度,Western blot检测蛋白质差异.结果表明,H2O2损伤的成肌细胞存活率降低,凋亡率增加.各种剂量氧化苦参碱能提高成肌细胞的存活率,促使Bcl-2增高,Bax降低.对成肌细胞的保护程度随氧化苦参碱剂量增加而增强,在剂量为0.3 g/L时,效果显著,其次是0.15、0.75 g/L的氧化苦参碱.其生理生化机制是氧化苦参碱保护H2O2通过NFκB信号通路造成的大鼠成肌细胞凋亡模型.结果显示,氧化苦参碱具有作为新的抗氧化药物的潜力.

17β-雌二醇调控大鼠成肌细胞L6GNR4细胞迁移能力的机制研究

目的研究17β-雌二醇对大鼠成肌细胞L6GNR4细胞迁移能力的调控作用及机制。方法L6GNR4细胞培养在含有10%胎牛血清的DM EM高糖增殖培养基中,培养基中添加10 nM雌激素17β雌二醇和/或50 nM雌激素竞争性拮抗剂Tamoxifen。应用细胞划痕试验在药物处理后0、12、24 h观察17β雌二醇对成肌细胞迁移能力的影响。在药物处理24 h后,应用荧光定量PCR技术检测各组细胞中雌激素受体α和β的表达。同时还检测了成肌细胞迁移相关关键基因(Pax3、Fhl1以及Fhl1相互作用蛋白Actg1、Myh10)在各组细胞中的表达情况。结果与对照组比较,17β-雌二醇在划痕24 h时可以明显抑制L6GNR4的细胞迁移。17β-雌二醇能够明显抑制ERβ的表达,而雌激素竞争性拮抗剂Tamoxifen能够部分逆转17β-雌二醇对ERβ的抑制作用。17β-雌二醇能够明显抑制成肌细胞迁移相关的关键因子Pax3、Fhl1以及Fhl1相互作用蛋白Myh10的表达,而雌激素竞争性拮抗剂Tamoxifen能够逆转或部分逆转17β-雌二醇对Pax3、Fhl1和Myh10的转录抑制作用。相同浓度的雌激素对L6GNR4细胞中Actg1的表达改变不明显。结论雌激素17β-雌二醇通过ERβ转录抑制Pax3、Fhl1以及Fhl1的相互作用蛋白Myh10的表达,发挥其抑制大鼠成肌细胞迁移的作用。

钙离子处理对成肌细胞μ-calpain mRNA和蛋白表达的影响

本试验利用实时定量RT-PCR、酪蛋白底物酶原分析和SDS-PAGE等方法研究不同浓度钙离子对分化的大鼠L6成肌细胞中μ-calpain mRNA蛋白水平表达以及对L6细胞内蛋白的降解程度的影响。研究表明:钙离子处理可以诱导L6进一步分化为肌管,高浓度钙离子(>1000μM)还导致L6死亡率增大;钙离子诱导μ-calpain mRNA和蛋白水平表达增加。钙离子浓度为1000μM时,μ-capain mRNA的表达量为对照组的3倍多,但是当钙离子浓度升至1500μM时表达量却降低。50-100μM钙离子可以使μ-calpain酶活增加两倍,而500-1500μM钙离子增加酶活5-7倍;高浓度钙离子由于提高了μ-capaln的活性,细胞内蛋白的降解代谢增强,在SDS-PAGE凝胶电泳中发现细胞上清液中有明显的蛋白条带出现。

Bcl-2和PCNA表达在大鼠成肌细胞氧化应激损伤中的作用

目的:探讨Bcl-2、PCNA等蛋白表达在成肌细胞氧化应激损伤中的意义。方法:将对数生长期成肌细胞进行分组,结合碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)预处理2 h及过氧化氢处理,分为正常对照(control)组、单纯bFGF组、氧化应激组(H_2O_2组)和干预组(bFGF+H_2O_2组)。免疫组化检测Bcl-2和Bax阳性沉积颗粒;免疫荧光观察成肌细胞形态及Bcl-2和Bax荧光表达;Western blot检测Bcl-2、PCNA等蛋白表达情况。结果:免疫荧光及免疫组化结果显示,与氧化应激组比较,干预组Bcl-2表达增加,Bax表达减少;Western blot显示,干预组Bcl-2和PCNA水平增加,Bax水平降低。结论:氧化应激诱导的大鼠成肌细胞损伤参与肌细胞病理进程。Bcl-2和PCNA表达上调可减轻成肌细胞损伤程度。

ATP对大鼠成肌细胞抗H_2O_2凋亡模型分析

为了探讨解决L6大鼠成肌细胞被H2O2损伤的问题,分别用1.210 48、2.420 96、4.841 92 g/L ATP溶液对成肌细胞处理后,利用MTT法、流式细胞仪和荧光凋亡抗体检测了细胞损伤程度.结果表明,经H2O2损伤后L6成肌细胞存活率明显降低,凋亡率增加.各种剂量ATP溶液均能提高L6成肌细胞的存活率,促使抗凋亡因子bcl-2表达增加,促凋亡因子bax表达降低,减少凋亡的发生.其保护程度随ATP溶液剂量的减少而增强,在1.210 48 g/L剂量时效果最为显著.ATP溶液对H2O2诱导损伤的L6大鼠成肌细胞具有明显保护作用,其机制是通过mTOR/STAT3信号通路增强凋亡抑制因子bcl-2表达、抑制凋亡促进因子bax表达,从而与抑制细胞凋亡有关.

槐属二氢黄酮G促进L6细胞内GLUT4的表达和转运

利用细胞葡萄糖摄取检测试剂盒检测苦参中槐属二氢黄酮G(Sophoraflavanone G,SFG)对L6细胞葡萄糖摄取的影响,发现SFG能够增加大鼠成肌细胞(L6)的葡萄糖摄取;之后,使用Western blot检测发现SFG对L6细胞内GLUT4的表达有显著的促进作用;同时.在可稳定表达IRAP-mOrange荧光蛋目的L6细胞内,使用激光共聚焦显微镜监测SFG作用下葡萄糖转位蛋白4(glucose transporter 4.GLUT4)的转位,发现SFG对GLUT4的转位有显著的促进作用,而且SFG对GLUT4转位的促进呈浓度依赖性;另外,免疫荧光实验结果也显示SFG增强L6细胞中GLUT4与细胞膜的融合.这些结果显示利用SFG处理L6细胞后丄6细胞内GLUT4的表达、转运及与细胞膜的融合继而促进葡萄糖的摄取显著增强,说明SFG可能具备开发成一种新的降血糖药物的潜力.

天麻素对大鼠骨骼肌细胞化学损伤的保护

背景:现代药理学研究表明,天麻的主要成分天麻素可以恢复大脑皮质兴奋与抑制过程间的平衡失调,产生镇静、安眠和镇痛等中枢抑制作用。目的:观察天麻素对L6大鼠成肌细胞化学损伤的保护作用。方法:用H2O2建立L6大鼠成肌细胞的化学损伤模型。DMEM培养液制备不同浓度的天麻素(1.562500,0.781250,0.390625g/L)预处理保护组的L6大鼠成肌细胞24h,然后用0.1mmol/LH2O2孵育80min,同时设置增殖组(用不同浓度的天麻素预处理,但不经H2O2处理),模型组(仅用H2O2处理),阳性对照组(仅有L6细胞悬液),阴性对照组(只有DMEM培养液),对照组既不用天麻素预处理,也不用H2O2孵育。结果与结论:MTT检测显示,增殖组和保护组L6大鼠成肌细胞存活率明显高于模型组;DAPI荧光标记细胞核为蓝色,模型组细胞荧光度较弱,且数目显著少于保护组;苏木精-伊红染色显示保护组的细胞核形状较规则,细胞轮廓较清晰,而模型组破损细胞较多;Bax和Bcl-2免疫荧光细胞化学结果表明,模型组促凋亡基因bax表达明显高于保护组,而抑制凋亡基因bcl-2的表达量完全相反;流式细胞仪检测显示保护组的凋亡率显著低于模型组(P<0.05)。提示天麻素对保护大鼠骨骼肌细胞化学损伤有显著效果。

表皮生长因子对缺氧缺糖模型大鼠骨骼肌细胞氧化损伤的保护作用

目的:构建体外骨骼肌L6细胞缺氧缺糖(OGD)模型,在体外水平上探讨表皮生长因子(EGF)对压疮深部组织损伤(DTI)的保护机制。方法:将对数生长期大鼠骨骼肌L6成肌细胞分为5组,即正常对照组、OGD组、5μg·L-1 EGF+OGD组、10μg·L-1 EGF+OGD组和20μg·L-1 EGF+OGD组。MTT法检测各组细胞生存率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,DCFH-DA法检测各组L6成肌骨骼肌细胞中活性氧(ROS)水平,Rhodamine 123检测线粒体膜电势,Western blotting法检测各组骨骼肌细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:与正常对照组比较,OGD组OGD 24h时骨骼肌细胞生存率明显降低(P<0.01),细胞凋亡率明显升高(P<0.01),ROS水平升高(P<0.01),线粒体膜电势下降(P<0.01),Bcl-2/Bax比值明显下降(P<0.01)。与OGD组比较,不同浓度EGF组细胞存活率明显升高,细胞凋亡率降低,其中10和20μg·L-1 EGF组差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);不同浓度EGF组骨骼肌细胞中ROS水平呈浓度依赖性降低,线粒体膜电势明显增加,10和20μg·L-1 EGF组差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);Bcl-2/Bax比值明显下降,并具有浓度依赖性,其中10和20μg·L-1 EGF组差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:EGF通过降低细胞内ROS水平保护线粒体功能,改善OGD诱导的大鼠骨骼肌细胞损伤,并具有浓度依赖性。

Sox9基因转染诱导L6大鼠成肌细胞向软骨细胞表型分化的研究

利用脂质体转染法,将真核表达质粒pcDNA3.1-Sox9导入L6细胞中.通过细胞增殖检测、细胞形态学观察、标志基因表达分析和甲苯胺蓝染色等方法分析Sox9基因转染对L6细胞增殖和向成软骨方向分化的诱导作用.结果表明,Sox9基因转染对L6细胞的增殖能力没有影响,但能明显抑制L6细胞相互融合形成肌管.和对照相比,Sox9基因转染后,细胞成肌分化标志基因Myf5的表达受到明显抑制,而成软骨分化标志基因Ⅱ型胶原(typeⅡcollagen,Col2a1)和蛋白聚糖(Aggrecan,Agg)的表达显著提高.转染后14 d,Sox9基因转染的细胞可见甲苯胺蓝染色阳性的软骨细胞样结节,而对照组则鲜见类似结构.上述结果表明,Sox9基因转染可以抑制L6细胞向成熟肌细胞分化,并促进其向软骨表型分化.

甘草主要成分改善L6大鼠成肌细胞胰岛素抵抗的机制

目的:确定甘草主要化学成分是否通过调节L6大鼠成肌细胞内糖原合成、糖酵解途径和脂肪酸合成改善胰岛素抵抗。方法:利用0.05 mmol·L^-1棕榈酸(PA)孵育9 h诱导L6大鼠成肌细胞建立胰岛素抵抗(IR)细胞模型;实验设正常组,模型组,甘草酸(GA,25μmol·L^-1)组,18β-甘草次酸(18β-GA,25μmol·L^-1)组,异甘草素(ILG,25μmol·L^-1)组和异甘草苷(ILQ,25μmol·L^-1)组;葡萄糖试剂盒检测细胞培养液上清葡萄糖含量;糖原检测试剂盒测定肌糖原含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c),脂肪酸合成酶(FAS)和糖原合成酶激酶3β(GSK3β)的蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测糖酵解关键酶的mRNA水平。结果:与正常组比较,模型组IR-L6大鼠成肌细胞中葡萄糖消耗率显著下调(P<0.01),细胞中的糖原含量减少(P<0.05),SREBP-1c和FAS蛋白表达减少(P<0.05,P<0.01),磷酸果糖激酶1(PFK1),丙酮酸激酶(PK)和己糖激酶(HK)mRNA水平下调(P<0.05),GSK3β蛋白表达增加(P<0.05);与模型组比较,各给药组GA,18β-GA和ILG可以明显增加IR-L6大鼠成肌细胞中糖原含量(P<0.05,P<0.01),GA,18β-GA和ILQ则明显增加SREBP-1c蛋白表达(P<0.05,P<0.01),而GA,18β-GA,ILG和ILQ可明显增加FAS的蛋白表达(P<0.05,P<0.01)以及PFK1,PK和HK mRNA表达(P<0.05,P<0.01),但下调GSK3β蛋白表达(P<0.05)。结论:甘草主要成分通过促进糖酵解和糖原合成发挥降糖作用,并且可通过调节脂肪酸合成改善胰岛素抵抗。

黄芪注射液对L_6成肌细胞抗H_2O_2致凋亡模型的保护

目的:探讨黄芪注射液对H2O2损伤L6大鼠成肌细胞的修复。方法:取1、0.5、0.1、0.05mmol/L H2O2损伤成肌细胞建立模型,再取2 000、1 000、500、250、125、62.5mg/mL黄芪注射液实施保护。应用MTT法、流式细胞仪及荧光抗体Bax和Bcl-2检测,使用SPSS 15.0统计软件处理数据。结果:经0.1mmol/L H2O2损伤成肌细胞存活率由94.4±5.7%降至32.6±3.8%,凋亡率由0增至32.45±2.9%。黄芪注射液处理实验组细胞存活率64.5±4.8～82.2±9.6%较模型组32.6±3.8%增加,凋亡率也从32.45±2.9%减至2.96±0.5～9.29±2.7%,荧光抗体检测Bcl-2细胞数57.7±4.3～74.2±6.9,Bax细胞数42.3±4.0～60.2±5.1。结论:黄芪注射液对大鼠成肌细胞H2O2损伤经由p38MAPK信号通路实施保护。

补元汤对香烟烟雾提取物诱导的L6大鼠成肌细胞凋亡、增殖及自噬的干预效应与机制研究

目的:探讨补元汤对体外香烟烟雾提取物(CSE)诱导的L6大鼠成肌细胞(L6细胞)凋亡、增殖及自噬的干预效应及机制。方法:构建CSE诱导L6细胞损伤的体外模型,实验分为对照组、模型组、补元汤组。对照组常规培养,模型组加入20%CSE诱导,补元汤组加入20%CSE及1/500补元汤。流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期分布;CCK8法检测细胞活力;Western blot检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)、BCL2/腺病毒E1B 19kDa结合蛋白1(Bnip-1)、自噬相关基因7(Atg7)、p62、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)蛋白表达水平;透射电镜观察自噬体形成情况。结果:与对照组比较,模型组细胞凋亡率、细胞周期中S期细胞比例升高,进入G_(2)/M期细胞比例降低,细胞活力降低,LC3-Ⅱ/Ⅰ、Atg7、Bnip-1、p-PI3K蛋白表达水平升高,p62蛋白表达水平降低,差异均具有统计学意义(P<0.01),电镜观察到自噬体数量增多;与模型组比较,补元汤组细胞凋亡率、细胞周期中S期细胞比例降低,进入G_(2)/M期细胞比例升高,细胞活力升高,LC3-Ⅱ/Ⅰ、Atg7、Bnip-1、p-PI3K蛋白表达水平降低,p62蛋白表达水平升高,差异均具有统计学意义(P<0.01),电镜观察到自噬体数量减少。结论:补元汤可以抑制CSE诱导的L6细胞过度自噬作用,减少细胞凋亡、促进细胞增殖,对CSE诱导的L6细胞损伤具有保护作用,其机制可能与调节Ⅲ型PI3K信号通路有关。

茶多酚对L6大鼠成肌细胞缺氧-复氧损伤的保护作用

目的观察茶多酚对L6大鼠成肌细胞缺氧-复氧损伤的保护作用。方法2018年11月至2019年5月,将L6大鼠成肌细胞分为对照组、缺氧-复氧组和茶多酚组,对照组予以常规孵箱培养,缺氧-复氧组利用缺氧孵箱和常规孵箱交替培养,茶多酚组在缺氧孵箱培养后在常规孵箱培养前应用4 mg/ml的茶多酚。利用CCK-8法检测培养48 h后各组细胞活性,利用试剂盒检测培养48 h后各组细胞内超氧化物歧化酶(SOD).黄嘌呤氧化酶(XOD)、丙二醛(MDA)、细胞内钙离子浓度和上清液中乳酸脱氢酶(LDH)含量。所有数据以均数+标准差(MeantSD)表示,组间比较采用单因素方差分析q检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果与缺氧-复氧组相比,茶多酚组细胞活性增强[两组分别为(51.21+9.75)%.(77.46+8.58)%].细胞内SOD活性增.强[两组分别为(85.23+16.15)U/mg.(115.36+9.38)U/mg],细胞内XOD含量减少[分别为(197.24+35.52)U/mg、(125.12+38.42)U/mg],细胞内MDA含量减少[分别为(167.27+25.54)U/mg.(96.25+15.41)U/mg],上清液中LDH含量碱少[分别为(215.45+25.14)U/mg.(154.74+8.71)U/mg],细胞内钙离子浓度降低碱少,差异均有统计学意义(P<0.05),但各指标均未恢复至对照组水平。结论茶多酚能够减弱缺氧或复氧损伤造成大鼠L6成肌细胞的氧化应激反应和钙超载。

大鼠成肌细胞缺血再灌注损伤模型的建立与验证

目的建立和验证L6大鼠成肌细胞缺血再灌注损伤(IRI)的细胞模型.方法2018年6月至2019年1月,诱导分化培养L6大鼠成肌细胞,以镜下观察肌管出现和考马斯亮蓝染色观察肌性结构出现来确定L6大鼠成肌细胞株分化完成;将诱导后的L6大鼠成肌细胞利用随机数字表法分为对照组、缺氧孵箱培养组和连二亚硫酸钠培养组.分别利用缺氧孵箱和含有连二亚硫酸钠培养基建立骨骼肌缺血再灌注损伤模型;CCK-8法测定细胞活性,利用相关试剂盒测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、细胞内Ca2+浓度和上清液中乳酸脱氢酶(LDH)含量,对模型进行验证和统计学分析.P<0.05为差异有统计学意义.结果诱导分化后的L6大鼠成肌细胞出现肌管结构,考马斯亮蓝染色下肌性结构明显;与对照组相比,缺氧孵箱培养组和连二亚硫酸钠培养组细胞上清液中LDH含量增加,3组分别为(30.00±2.96)U/mg、(230.51±36.23)U/mg和(207.39±42.84)U/mg,差异有统计学意义(P<0.05);细胞内XOD含量增加,3组分别为(60.24±5.18)U/mg、(235.89±21.32)U/mg和(219.53±30.41)U/mg,差异有统计学意义(P<0.05);细胞内Ca2+浓度增加,分别是对照组的(1.83±0.53)倍和(2.05±0.73)倍(P<0.05);SOD降低,3组分别为(194.86±10.25)U/mg、(51.13±8.42)U/mg和(47.16±9.57)U/mg(P<0.05);与连二亚硫酸钠培养组细胞活性[(53.41±9.65)%]相比,缺氧孵箱培养组[(72.54±5.86)%]细胞活性更高(P<0.05).结论利用缺氧孵箱培养诱导分化的L6大鼠成肌细胞可能是一种较真实的骨骼肌IRI细胞模型.