槲皮素活化mTOR信号通路对L929成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨槲皮素(Quercetin,QU)对L929成纤维细胞增殖的影响及其分子机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测QU对L929细胞增殖的影响,荧光素酶报告基因法检测QU对蛋白质翻译调控的影响、Western blot法检测QU对mTOR介导的蛋白质翻译调控通路关键基因mTOR、P-4E-BP1(翻译起始因子4E的结合蛋白)的磷酸化,细胞周期调控蛋白cyclin D1的表达及mTOR通路阻断实验。结果:MTT法检测结果显示在36 h干预点,浓度为1×10-4、1.5×10-42、×10-4、2.5×10-4 mol/L时,QU可明显促进L929细胞增殖(P<0.01);荧光素酶报告基因检测系统结果显示:在36 h干预点,2.5×10-4 mol/L QU与对照组相比,RLU(相对光单位)值明显增加(P<0.001);Western blot法检测结果显示,mTORc、yclin、D1和P-4E-BP1的表达明显增加。100ng/ml的雷帕霉素作用36 h后,与对照组相比,QU组P-4E-BP1、mTORc、yclin D1蛋白表达明显增加,雷帕霉素组明显减少,雷帕霉素+QU组蛋白表达明显增加,但较QU组有所减少。结论:QU可通过诱导mTOR信号通路活化,进而促进细胞周期调控蛋白cyclin D1的表达,诱导L929细胞的增殖。

不同血清浓度对小鼠成纤维细胞L929生长增殖和胶原蛋白分泌的影响

目的：观察不同血清浓度对小鼠L929成纤维细胞生长增殖和分泌Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和羟脯氨酸的影响,以了解适宜成纤维细胞生长和分泌的最佳血清浓度。方法：L929细胞分成6组：分别以血清浓度为0 mL/L、200 mL/L、400 mL/L、600 mL/L、800 mL/L和1 000 mL/L的培养液培养,培养2 d、4 d、6 d和8 d分别取各组细胞进行HE和吖啶橙荧光染色,了解细胞形态和生长状况变化。在2 d、4 d、6 d和8 d分别取各组上清,酶联免疫法检测Ⅰ型胶原,Ⅲ型胶原,羟脯氨酸水平。磺基罗丹明B（SRB）法检测培养2 d、4 d、6 d和8 d后各组细胞增殖情况。结果：（1）L929在血清浓度很高和很低（0%和100%）时细胞增殖率都明显下降,20%组血清浓度的增殖率最高;40%~100%组,随着血清浓度增高,细胞增殖率反而下降;（2）HE和AO染色发现0%血清浓度组细胞出现凋亡情况,80%组细胞开始出现空泡化,100%血清浓度时细胞空泡化严重。20%~60%血清浓度细胞形态基本正常。（3）0%、80%和100%血清浓度在培养的8 d内I型胶原浓度一直比较低,40%血清浓度I型胶原浓度最高。培养的第2天,各浓度组的Ⅲ胶原均有增加,后有所下降,6~8 d时又再次上升。各组血清浓度组的L929细胞在不同培养时间羟脯氨酸浓度变化不大。结论：20%~40%血清浓度最适合成纤维细胞的生长,增殖和胶原分泌,血清浓度过高或过低都会引起细胞增殖率下降、细胞凋亡、空泡化和胶原的分泌减少,自体血清注射时采用合适的血清浓度可能会取得更好的效果。

磁性附着体中铁素体不锈钢引起小鼠成纤维细胞L929的死亡模式

通过3种不同浓度的不锈钢浸提液处理体外培养的小鼠成纤维细胞L929,采用流式细胞术PI染色法检测L929细胞的凋亡率及细胞周期分布情况,并用电镜观察细胞凋亡的形态．同时应用异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白结合碘化丙啶染色双参数技术对细胞死亡类型进行定量检测．与Tilite含钛医用合金、Co-Cr合金相比较的结果表明,26-1超纯铁素体不锈钢是以时间依赖的方式诱导L929细胞凋亡,凋亡率与浸提液呈浓度依赖关系．26-1超纯铁素体不锈钢符合临床应用材料的生物相容性要求,可以用于对磁性附着体的外包裹并可安全地应用于临床．

4种牙科金属材料对成纤维细胞L929凋亡相关基因及蛋白表达的影响

目的研究4种不同牙科金属材料(金合金、银钯合金、钴铬合金、镍铬合金)浸提液对小鼠成纤维细胞L929凋亡相关基因及蛋白表达的影响。方法以金合金(A组)、银钯合金(B组)、钴铬合金(C组)、镍铬合金(D组)的浸提液体外培养小鼠成纤维细胞L929,并以含10%胎牛血清的RPMI1640培养基作为阴性对照(E组)。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测了4种牙科金属材料浸提液对L929细胞凋亡相关基因caspase-3、8、9 mRNA和蛋白表达的影响。结果 4种牙科金属材料浸提液培养小鼠L929细胞48 h后,除A组与E组间差异无统计学意义外,各组间caspase-3 mRNA及caspase-9 mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05)。各组间caspase-8 mRNA差异无统计学意义。除A组与C组、B组与D组间差异无统计学意义外,caspase-3及caspase-9蛋白表达差异有统计学意义,各组间caspase-8蛋白差异无统计学意义。结论 4种牙科金属材料,除金合金外,均诱导小鼠成纤维细胞L929凋亡相关基因表达增加,金属离子可能通过线粒体通路诱导细胞凋亡。

麦胚凝集素诱导小鼠成纤维细胞L929发生凋亡的研究

目的 :研究麦胚凝集素 (WGA)是否能够诱导小鼠成纤维细胞L92 9发生凋亡及其可能的分子机制。方法 :分别收集以WGA或琥珀酰化WGA(sWGA)处理 2 4h的L92 9细胞 ,经碘化丙啶染色后 ,以流式细胞仪分析细胞凋亡百分率 ,同时以荧光显微镜观察吖啶橙染色细胞的形态。结果 :WGA处理过的细胞 ,其DNA亚二倍体峰 (Sub -G1)即凋亡峰的百分率明显升高 ,且与WGA剂量呈正相关 ;而sWGA处理的细胞则无此现象。同时 ,荧光显微镜观察发现WGA处理的细胞发生核碎裂 ,但sWGA无此作用。结论 :WGA能诱导L92 9细胞发生凋亡 ,而sWGA不能诱导该细胞凋亡 ,提示WGA结合至细胞表面唾液酸残基是其诱导凋亡所必需 ;WGA诱导细胞凋亡的能力可部分解释其细胞毒性。

3种临床常用烤瓷合金对小鼠成纤维细胞L929的毒性评价

目的:评价3种临床常用牙科烤瓷合金材料的细胞毒性。方法:采用一种能快速评定细胞增殖率和细胞毒性的CCK-8比色法,检测镍铬合金(Ni,77.36%)、钴铬合金(Co,61.0%)、金合金(Au,58.0%)等3种烤瓷合金材料对小鼠成纤维细胞L929相对增殖率的影响;应用单细胞凝胶电泳(彗星电泳),检测3种烤瓷合金材料对小鼠成纤维细胞L929 DNA的损伤情况。采用SAS9.0软件包对数据进行统计学分析。结果:镍铬合金组、钴铬合金组和金合金组细胞的相对增殖率分别为(75.9510±7.6244)%、(84.8920±8.2660)%和(88.5420±12.3611)%。镍铬合金组的细胞毒性显著高于钴铬合金组(P<0.05)和金合金组(P<0.05),而钴铬合金组与金合金组之间无显著差异(P>0.05),但3种材料的细胞毒性分级均为1级,表现为轻微毒性;镍铬合金组DNA损伤程度的彗星数目显著高于钴铬合金组(P<0.05)和金合金组(P<0.05),而钴铬合金组与金合金组无显著差异(P>0.05)。结论:钴铬烤瓷合金材料的细胞毒性显著低于镍铬烤瓷合金材料,而与58%金烤瓷合金材料的细胞毒性接近。临床上应尽可能选择钴铬烤瓷合金或58%金烤瓷合金等细胞毒性较低的烤瓷合金材料。

磁性附着体中铁素体不锈钢引起小鼠成纤维细胞L929的死亡模式(英文)

背景:作为自制磁性附着体外包裹材料的26-1超纯铁素体不锈钢在以往的实验中已初步证实其具有良好的生物学特性,但选用凋亡机制对其生物相容性进行深入研究和评价的报道较少。目的:应用L929细胞从分子生物学水平探讨26-1超纯铁素体不锈钢引起细胞的死亡模式,评价26-1超纯铁素体不锈钢是否符合临床应用的生物相容性要求。设计、时间及地点:分子生物学水平,对比观察实验,于2004-06/2005-06在中国医科大学中心实验室完成。材料:26-1超纯铁素体不锈钢(超低碳,名义成分为Fe-26%Cr-1%Mo),Tilite(含钛医用合金,名义成分为70%Ni-16%Cr-(4%～6%)Ti-其他合金元素)、Co-Cr合金(名义成分为Co-30%Cr-5%Mo)。利用蜡型铸造制备实验用材料,并将材料分别切割成直径12mm的圆盘样品。方法:①将3种材料与L929细胞联合培养,阴性对照组为RPMI1640正常培养细胞,孵育18h和24h后应用异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白结合碘化丙啶染色双参数技术对细胞死亡类型进行定量检测。②25%,50%,100%浓度的3种材料浸提液体外培养小鼠成纤维细胞L92924h后,采用流式细胞术碘化丙啶染色法检测L929细胞的凋亡率及细胞周期分布情况。主要观察指标:①不同材料引起L929细胞凋亡和坏死的比例。②L929细胞凋亡率及细胞周期分布情况。结果:各材料组均降低了L929细胞的生存率,其中细胞坏死水平在各材料组与阴性对照组之间差异无显著性意义,说明引起的致细胞病变效应主要是由细胞凋亡引起的,各材料组之间产生的效应差异无显著性意义。并且L929细胞凋亡具有明显的浓度依赖性及时间依赖性。3种实验用金属材料引起的L929细胞凋亡率在各浓度组间差异无显著性意义。结论:26-1超纯铁素体不锈钢引起细胞的死亡方式主要是凋亡,符合临床应用材料的生物相容性要求。

不同骨水泥材料在炎症条件下对小鼠成纤维细胞L929的生物安全性研究

目的评价不同骨水泥材料在炎症条件下对小鼠成纤维细胞L929的生物安全性。方法分别采用CCK-8法、DAPI荧光染色法、FITC/PI凋亡染色法检测3种骨水泥材料对炎症条件下小鼠成纤维细胞L929细胞活性、细胞分裂生长及细胞凋亡的影响,同时利用RT-PCR和Western blot分别检测3种骨水泥材料对炎症条件下小鼠成纤维细胞L929中炎症相关因子IL-1、IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ的mRNA水平和蛋白表达水平。结果聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、纳米羟基磷灰石/聚酰胺66(n-HA/PA66)、磷酸钙骨水泥(CPC)在炎症条件下均能够显著抑制小鼠成纤维细胞L929的活性和增殖,CPC抑制最显著(P<0.05);PMMA、n-HA/PA66、CPC在炎症条件下均能够显著促进小鼠成纤维细胞L929的凋亡(P<0.05),3种骨水泥材料之间差异无统计学意义(P>0.05);3种骨水泥材料在炎症条件下对小鼠成纤维细胞L929不同炎症因子表达的影响不同,但CPC相对于PMMA、n-HA/PA66更能刺激细胞多种炎症因子的表达(P<0.05)。结论不同骨水泥材料在炎症条件下对小鼠成纤维细胞L929的生物安全性不同,其中PMMA、n-HA/PA66差别不大,而CPC在炎症条件下对小鼠成纤维细胞L929的影响最显著。

MTT法检测钛酸钡涂层对小鼠成纤维细胞L929增殖率的影响

目的:探索纯钛烤瓷冠中钛酸钡涂层对小鼠成纤维细胞L929形态及增殖率的影响,并评价其细胞毒性分级。方法:以含钛酸钡涂层的钛瓷试件、常规钛瓷试件的浸提液体外培养小鼠成纤维细胞1、3、5 d,并以含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基为阴性对照组,1%苯酚溶液为阳性对照组,采用MTT法检测试件浸提液对小鼠成纤维细胞L929增殖率的影响。结果:含钛酸钡涂层的钛瓷结合试件浸提液培养的小鼠成纤维细胞L929形态正常,生长旺盛;钛酸钡涂层组吸光度值大于阴性对照组(P<0.05),含钛酸钡涂层的纯钛试件浸提液的细胞毒性分级为0级。结论:含钛酸钡涂层的钛瓷结合试件有良好的细胞相容性。

染氟成纤维细胞内Ca^(2+)水平的变化及其意义

目的研究氟对成纤维细胞Ca2+浓度的影响并探讨其意义。方法应用扫描共聚焦显微技术测定不同染氟条件下(0.0001、1、10mg/LF-)成纤维细胞Ca2+水平的变化。结果染氟1mg/L组成纤维细胞在染氟500s左右时[Ca2+]i水平开始升高,约1500s达到高峰,然后开始下降,3000s左右回到起点位置。结论成纤维细胞染氟1mg/LF-组[Ca2+]i有一过性升高。认为这种[Ca2+]i浓度的变化在影响成纤维细胞中cbfa1和某些生长因子之间的相互关系、促进细胞增殖、分化及成骨表型转换中可能起重要作用。

蚕蛹羧甲基壳聚糖对小鼠成纤维细胞增殖与生长的影响

手术后组织粘连与组织损伤部位纤维的增生有密切关系。研究蚕蛹羧甲基壳聚糖对小鼠成纤维细胞L929增殖与生长的影响,探索其用作预防组织粘连生物医用材料的可行性。体外试验结果表明,培养液中添加0.1 mg/m L蚕蛹羧甲基壳聚糖能够极显著抑制小鼠成纤维细胞的增殖(P<0.01),抑制率达到50.08%±10.12%;荧光定量PCR检测小鼠成纤维细胞中的细胞生长因子TGF-β1和VEGF编码基因的表达极显著下调(P<0.01),并且这种抑制作用呈现明显的剂量效应。据此初步认为,蚕蛹羧甲基壳聚糖可有效控制成纤维细胞中关键的自分泌生长因子编码基因的表达,进而抑制机体的细胞增殖与生长以及炎症反应和血管增生,预防术后组织粘连。

汉坦病毒M和S片段基因的克隆及在成纤维细胞中的瞬时表达

目的构建汉城病毒M片段和汉滩病毒部分S片段的重组基因pEGFP-M-S,并在成纤维细胞L929中进行瞬时表达。方法用PCR方法克隆分别装在两个模板载体中的部分M片段,连接入pcDNA3·1载体,利用简并密码子得到完整的M片段。将汉城病毒M片段开放阅读框全长3·4kb的基因与装有汉滩病毒S片段5’末端0·7kb基因的载体pEGFP-HTNV-S0·7用酶切位点连接,构成4·1kb的重组基因,并转染成纤维细胞,进行48h、72h表达。结果成功得到预期大小的4·1kb的重组基因,并在成纤维细胞中进行了瞬时表达。结论汉城病毒M片段和汉滩病毒部分S片段基因的重组基因在成纤维细胞中瞬时表达,产生了M片段的约70kD和55kD的两个糖蛋白,并在与S片段拼接处经蛋白酶切割产生了约26kD的核蛋白,免疫印迹分析产生的约26kD的蛋白具有抗汉坦病毒的抗原活性。

三种口腔溃疡中药制剂对小鼠成纤维细胞生长增殖和胶原合成的影响

目的探讨3种治疗复发性口腔溃疡中药制剂(西瓜霜、云南白药、甘草泻心汤)在细胞水平上促进溃疡愈合的作用机制。方法建立小鼠口腔成纤维细胞体外培养模型,以华素片为对照,采用MTT、Elisa测定3种中药制剂对成纤维细胞增殖、胶原合成的影响。结果西瓜霜在促进成纤维细胞的增殖及胶原合成,抑制MMP-2,促进TIMP-1方面有较显著的作用。云南白药促进能够HYP的分泌和抑制MMP-2的分泌。甘草泻心汤对成纤维细胞有一定的抑制作用。结论提示临床上治疗复发性口腔溃疡时应联合用药或分期用药。

3种牙科金属材料对L929细胞的毒性及对凋亡相关基因与蛋白表达的影响

目的:研究3种牙科金属材料(金合金、纯钛、镍铬合金)浸提液对小鼠成纤维细胞L929的细胞毒性及凋亡相关基因与蛋白表达的影响,探讨3种牙科金属材料引起细胞凋亡的可能通路。方法:以金合金(A组)、纯钛(B组)、镍铬合金(C组)的浸提液(每组8个样本)培养小鼠成纤维细胞L929,以含10%胎牛血清的RPMI1640培养基作为阴性对照(D组),以铜合金作为阳性对照(E组)。采用MTT法在细胞水平评价3种牙科金属材料的细胞毒性,采用RT-PCR在分子水平上检测3种牙科金属材料浸提液对L929细胞凋亡相关基因caspase-3、-8、-9 mRNA及蛋白表达的影响。采用SPSS11.5软件包对数据进行统计学分析。结果:各实验组细胞毒性均为0级。镍铬合金组caspase-3mRNA与caspase-9mRNA的表达与其他实验组、阴性对照及阳性对照组间差异显著,镍铬合金组caspase-3蛋白与caspase-9蛋白的表达与其他实验组及阴性对照组间差异显著,各组caspase-8mRNA及蛋白的表达无显著差异。结论:金合金与纯钛浸提液对小鼠L929细胞凋亡相关基因及蛋白的表达无显著诱导作用;镍铬合金诱导小鼠L929细胞凋亡相关基因caspase-3mRNA、caspase-9mRNA及蛋白表达增加,可能通过线粒体通路诱导细胞凋亡。

肝癌细胞H22培养上清液对鼠细胞L929细胞周期、CyclinD1、P27蛋白表达的影响

目的:探讨小鼠肝癌细胞H22培养上清液对鼠L929细胞细胞周期、CyclinD1、P27蛋白表达的影响。方法:采用肝癌细胞H22的培养上清液诱导正常成纤维细胞L929,诱导细胞为L929-H22。采用流式细胞术检测L929细胞与L929-H22细胞细胞周期分布,免疫细胞化学方法检测2种细胞中CyclinD1、P27蛋白的表达。结果:与L929相比,L929-H22G0/G1期细胞比例明显减少,S期细胞比例明显增加(P<0.05),增殖指数PI明显升高(P<0.05);CyclinD1的表达增强(P<0.05),P27的表达减弱(P<0.05)。结论:小鼠肝癌细胞培养上清液诱导的细胞CyclinDl、P27的表达及细胞周期分布与正常细胞不同,CyclinDl表达增强和P27表达减弱可能在细胞恶性转化过程中发挥作用。

赤芝提取物的抗氧化美白及细胞增殖作用研究

目的:研究赤芝提取物(GLE)抗氧化美白及细胞增殖作用。方法:以测定GLE中糖类含量,体外1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除力、蘑菇酪氨酸酶活性抑制力、抑制B16F10细胞黑色素合成及酪氨酸酶活性抑制、结晶紫实验和划痕实验为评价指标,研究GLE抗氧化美白及对L929成纤维细胞增殖的作用。结果:GLE中富含总糖、多糖,GLE相较于β-熊果苷对DPPH自由基和ABTS自由基表现出较弱的清除作用,其自由基清除率半抑制浓度(IC 50)分别为1.6 mg/mL和1.2 mg/mL;对蘑菇酪氨酸酶活性有很强的抑制能力,基于α-MSH促黑激素细胞表型造模实验显示,0.4 mg/mL和0.8 mg/mL的GLE具有显著抑制B16F10细胞酪氨酸酶活性以及黑色素生成的作用;GLE具有促进L929成纤维细胞增殖作用。结论:GLE是美白及功能食品开发利用领域的候选者。

小鼠肝癌细胞H_(22)培养上清液对鼠细胞L_(929) MTP53、EGFR蛋白表达的影响

目的探讨小鼠肝癌细胞H22培养上清液对鼠L929细胞MTP53、EGFR蛋白表达的影响。方法采用肝癌细胞H22的培养上清液诱导正常成纤维细胞L929,诱导细胞为L929-H22。采用免疫细胞化学方法检测MTP53、EGFR蛋白的表达。结果MTP53、EGFR蛋白的表达L929-H22细胞较L929细胞显著增强(Ρ<0.001)。结论小鼠肝癌细胞培养上清液诱导细胞MTP53、EGFR的表达与正常细胞不同,MTP53、EGFR的表达增强可能在细胞恶性转化过程中发挥作用。

ZD制剂对RAW264.7细胞分泌TNF-α水平及TNF-α诱导L929细胞死亡的影响

[目的]研究ZD制剂对炎症模型细胞中TNF-α含量及对TNF-α诱导小鼠成纤维细胞L929死亡的影响。[方法]通过脂多糖(LPS)刺激小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7细胞系来构建炎症细胞模型,使用5种不同浓度(100、10、1、0.1、0.01μg/m L)的ZD制剂进行试验,并用ELISA法检测ZD制剂干预前后细胞上清液中TNF-α浓度。通过TNF-α刺激小鼠成纤维细胞L929细胞系来构建细胞毒性模型,采用MTT法检测ZD制剂干预前后L929细胞活力。[结果]ZD制剂浓度为100、10、1、0.1μg/m L时,TNF-α浓度与LPS模型组相比,差异极显著(P<0.01);ZD制剂浓度为0.01μg/m L时,TNF-α浓度与LPS模型组相比,差异显著(P<0.05)。经100、10μg/m L ZD制剂干预后的小鼠成纤维细胞L929细胞活力与TNF-α组相比显著提高。[结论]ZD制剂可以通过降低TNF-α的分泌量和降低TNF-α的生物学活性来达到抗炎的目的。

低弹性模量医用钛合金梯度复合材料对L929细胞周期及凋亡的影响

将实验对象分为3组,分别为低弹性模量医用钛合金试件、经氧化处理、经氧化处理并在其表面喷涂钽的低弹性模量医用钛合金试件,制备浸提液培养小鼠成纤维细胞L929。利用流式细胞术检测细胞周期及凋亡并与常规钛合金Ti-6Al-4V试件及阴性组(含10%FBS的培养液18 ml)进行比较。浸提液培养48 h后,G2期细胞周期比例涂层组为(14.43±0.18)%,Ti-6Al-4V组为(13.97±1.39)%(P>0.05);细胞早期凋亡率涂层组为(1.39±0.08)%,Ti-6Al-4V组为(1.40±0.05)%(P>0.05)。低弹性模量医用钛合金梯度复合材料与Ti-6Al-4V比较对L929细胞周期及凋亡无差异,细胞相容性良好。

L929细胞骨架系统的图像分析

细胞骨架系统在维持细胞形态的同时也辅助细胞的代谢、增殖、迁移及分化等作用。通过图像处理软件ZEN和ImageJ、统计分析软件SPSS等3种软件对L929的黏着斑及微丝免疫荧光染色图像进行预处理、图像有效部分提取以及数据处理。结果表明黏着斑的数量与细胞面积、微丝总长度存在极显著的正相关关系。