血清介质对体外培养L929系小鼠成纤维细胞表达产物Ⅰ、Ⅲ型胶原及其比值的影响

目的探讨不同浓度血清、不同体外培养时间对L929系小鼠成纤维细胞表达产物Ⅰ、Ⅲ型胶原及其比值的影响。方法采用双抗体夹心法检测细胞培养液中Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量,并同时计算出Ⅰ/Ⅲ型胶原的比值。结果除0%血清浓度组的Ⅰ、Ⅲ型胶原呈现无明显变化的微弱升高趋势外,其余各血清浓度组的Ⅰ、Ⅲ型胶原均处于增加状态,且在6~8 d时增加最为明显;另外,Ⅰ/Ⅲ型胶原比值随着血清浓度和细胞生长时间不同,表现出不同的变化趋势。其中20%和40%血清浓度组随着培养细胞生长时间延长,Ⅰ/Ⅲ型胶原比值逐渐增加;而其他血清浓度组,随着细胞培养时间的延长,Ⅰ/Ⅲ型胶原比值增加并不明显。结论 L929细胞在不同体外培养时间和不同浓度血清下其表达产物Ⅰ、Ⅲ型胶原含量及其比值有一定变化,为今后优化体外细胞培养条件提供了相关的实验数据。

辐射对L929细胞生长及CCN1基因表达的影响

目的通过观察辐射对小鼠皮肤成纤维细胞系L929生长及CCN1基因表达的影响,探讨CCN1基因与辐射损伤的关系。方法体外培养L929细胞系,以4Gy60Coγ射线照射为辐射组,并设对照组,MTT法测细胞增殖变化,平板克隆形成实验检测克隆形成能力,流式细胞术测细胞周期,RT-PCR及免疫细胞化学法检测L929细胞中CCN1基因的表达情况。结果辐射组细胞辐照2d增殖抑制明显(P<0.01),克隆形成也明显受到抑制(P<0.05);辐射后24h,细胞出现G2期停滞;辐射后6hL929细胞CCN1的mRNA表达水平明显降低(P<0.01),至24h开始回调(P<0.05);辐照后24～48h,细胞CCN1蛋白的表达水平明显下降(P<0.01)。结论因辐照生长受到抑制的小鼠成纤维细胞L929,其CCN1基因的表达水平下调,提示CCN1基因的表达水平低下是辐射导致细胞生长抑制的因素之一。

医疗器械细胞毒性试验方法标准化探讨

细胞毒性是医疗器械生物相容性评价的重要项目之一。四唑盐MTT法是经典定量细胞毒性试验方法,该实验研究了细胞浓度、培养时间对试验结果的影响。结果表明应用不同试验条件的MTT法对同一待检物会得到不同的细胞毒性结果,因此标准化MTT试验方法对医疗器械细胞毒性试验评价非常重要。

表达人类Bcl-2蛋白的L929细胞模型的建立与应用

将人类bcl 2cDNA以正向克隆于真核表达载体pLXSN并转染于L92 9细胞 ,建立了稳定表达人类Bcl 2蛋白的哺乳类细胞模型 .利用模型细胞进行研究表明 ,Bcl 2的表达对细胞的正常增殖与存活表型无明显影响 ,但能增加细胞对肿瘤坏死因子α(TNFα)和staurosporine(STS)两种致凋亡因素的抵抗能力 .此研究丰富了bcl 2基因调控细胞凋亡的资料 ,为深入探讨bcl