人内皮抑素在毕赤酵母中的表达、纯化及其对小鼠肺腺癌LA795细胞生长的抑制

目的通过基因重组技术获得能高效分泌表达人内皮抑素的毕赤酵母菌株;观察纯化的重组人内皮抑素(rhES)对小鼠肺腺癌LA795生长的抑制作用。方法 利用氯化锂转化法将人内皮抑素基因整合入毕赤酵母基因组,获得可分泌表达人内皮抑素(endostatin)的菌株。用肝素亲和层析的方法纯化目的蛋白。观察人内皮抑素对碱性纤维生长因子(bFGF)刺激的人血管内皮细胞系ECV－304细胞增殖的作用。将接种LA795肺腺癌细胞的T739小鼠随机分成2组,分别给予rhES和磷酸缓冲盐液(PBS)皮下注射,每日1次,连续14d。观察2组小鼠肿瘤生长情况。结果经筛选获得表达量较高的转化菌株,其表达的rhES能明显抑制bFGF刺激的人血符内皮细胞系ECV－304细胞的增殖,与对照组比较具有显苫差异(P＜0．001),动物实验表明其有效抑制小鼠肺腺癌LA795的生长(P＜0．001)。结论用毕亦酵母作为宿主分泌表达的rhES具有良好的生物学活性,能有效抑制小鼠肺腺癌LA795的生长。

毕赤酵母表达重组人内皮抑素对小鼠肺腺癌LA795生长和转移的抑制作用

背景与目的:肿瘤的生长和转移有赖于新生血管的生成,内皮抑素能抑制肿瘤的血管生成。本研究旨在观察毕赤巴斯德酵母(pichia.pastoris.GS115)分泌表达的重组人内皮抑素(recombinanthumanendostatin,rhES)对小鼠肺腺癌LA795生长和转移的抑制作用。方法:挑取一株高效分泌表达rhES的毕赤巴斯德酵母菌株,利用甲醇进行大量诱导表达;用肝素亲和层析的方法纯化目的蛋白;将接种LA795肺腺癌细胞的T739小鼠随机分成两组,分别给予rhES和PBS皮下注射,每日1次,连续14天;观察两组小鼠肿瘤生长情况,测量肿瘤体积大小,并观察两组小鼠肿瘤肺部转移情况。结果:经甲醇诱导的毕赤巴斯德酵母菌株高效分泌表达了rhES;动物实验研究发现rhES能显著抑制小鼠肺腺癌LA795的生长,rhES治疗组肿瘤大小与对照组比较具有显著性差异(P<0.001),抑瘤率达到66.4%,并且有效抑制了肿瘤的肺部转移。结论:利用毕赤酵母作为宿主分泌表达的rhES具有良好的生物学活性,可显著抑制小鼠肺腺癌LA795的生长和转移。

小鼠肺腺癌LA795细胞系移植特性的初步观察

目的和方法：实验研究了小鼠肺腺癌ＬＡ７９５ 细胞系对不同品系小鼠的移植特性。结果与结论：ＬＡ７９５ 细胞皮下接种的Ｔ７３９ 和６１５ 近交系小鼠移植成功率１００％ ；其中Ｔ７３９ 小鼠肺转移率１００％ ，平均生存时间２６．５±５．３ｄ；环磷酰胺可显著抑制移植ＬＡ７９５ 细胞肿瘤的生长，ＬＡ７９５ 细胞在昆明种小鼠移植不能存活。

E838联合γ射线对小鼠肺腺癌LA795抑瘤作用的实验研究

目的本研究对E838在体内抑瘤效果及合用137Csγ射线是否具有抑瘤增效作用进行探讨。方法LA795肿瘤组织用生理盐水稀释约3.5×107/m l瘤细胞。取细胞悬液0.2m l/只接种于小鼠腋部皮下,24h后将荷瘤小鼠随机分为对照组、单放组、E838药物组(5、7.5、10mg/kg)和药物合用照射组、环磷酰胺组。药物组与药物合用照射组ip相同剂量给药,每日1次,连续7d,环磷酰胺(25mg/kg)隔日1次×4。药物合用照射组于给药的第4d进行全身1Gy照射,每日1次,连续5d。观察其抑瘤效果及相关的免疫学指标。结果E838三个剂量对小鼠LA795的抑瘤率分别为42.73、70.91和64.09%,与对照组比较差异有显著性(P<0.05),骨髓有核细胞数水平有所升高,合用137Csγ射线能提高抑瘤效果,抑瘤率分别为63.63、75和68.64%(P<0.05),对肿瘤的杀伤作用高于单放组和单药治疗组。结论E838对小鼠肿瘤细胞具有良好的抑制作用,合用γ射线抑瘤疗效比E838更为明显,但没有显著性差异。调节机体的免疫功能是E838抗肿瘤作用的机制之一。

PCNA反义寡核苷酸对小鼠LA795肺腺癌皮下移植瘤生长的影响

目的探讨增殖细胞核抗原(PCNA)反义寡核苷酸对小鼠LA795肺腺癌皮下移植瘤生长的抑制作用。方法将20只接种LA795肺腺癌细胞T739小鼠随机分成两组。①治疗组接种LA795肺腺癌细胞后24h内用PCNA反义寡核苷酸(PCNA-ASODN)原位穿刺注射进行治疗;②对照组只注射Hank's液,每周1次,连续4周。观察两组大鼠肿瘤的一般情况与生存期。4周后断颈处死小鼠,完整地取下肿瘤,测量肿瘤体积,计算其抑瘤率。结果PCNA-ASODN治疗组小鼠LA795肺腺癌皮下移植瘤生长明显受到抑制,抑瘤率为68.53%。结论PCNA-ASODN对LA795肺腺癌皮下移植瘤生长具有抑制作用,通过反义技术可抑制靶基因的表达,从而抑制LA795肺腺癌细胞的增殖生长。

小鼠肺腺癌LA795不同转移克隆细胞株转移潜能表达的稳定性及维胺酸的作用效应

本文观察了来源于同一母系的不同转移克隆细胞株在多次传代（12～14代）后，其体内转移潜能的变化，并探讨了这些克隆株在不同宿主（近交系T739和SCID鼠）体内转移性的表达及维胺酸作用后对其转移性及表皮钙粘连分子（E－cadherin）表达的影响。结果表明：不同克隆株其体内转移潜能具有相对稳定性。SCID鼠也是克隆株转移潜能表达的良好宿主。体外维胺酸作用后，LA795瘤细胞各在T739小鼠体内肺转移性下降，而对不同克隆体内表皮钙粘连分子的表达无明显影响。

TNP-470联合CTX对小鼠LA795肺腺癌皮下移植瘤生长的影响

目的研究血管生成抑制剂TNP-470联合CTX对小鼠L795肺腺癌生长的抑制作用。方法将40只接种高转移性的LA795肺腺癌细胞T739小鼠随机分成5组:对照组、溶剂对照组、TNP-470组、环磷酰胺(CTX)组和TNP-470+CTX组。接种4d后开始用药,用药期间,每隔1d测量皮下移植瘤体积,20d后处死全部小鼠,剥离皮下移植瘤并称重。采用免疫组化和图像分析系统定量检测皮下移植瘤中微血管密度(MVD)、血管生长因子bFGF及增殖核抗原PCNA的表达,用原位凋亡TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数。结果各用药组肿瘤的生长明显受到抑制,而联合用药组抗瘤作用进一步增强,且具有协同作用。CTX组、TNP-470组和联合用药组与对照组相比都能减少bFGF表达;与CTX组相反,TNP-470组肿瘤组织中抗原PCNA的表达与对照组相比无差异显著性。TNP-470组和联合用药组肿瘤组织中的MVD与对照组相比都明显减小;而各用药组的凋亡指数比对照组都明显增高。结论TNP-470组、CTX组中LA795肺腺癌生长受到明显抑制,两者联合应用具有协同作用。

小鼠肺腺癌LA795细胞系具不同转移潜能亚系的体内侵袭力及定量分析

利用肾包膜下体内侵袭模型,对小鼠肺腺癌具不同转移潜能亚系LA1、LAD和LA5的体内侵袭能力进行比较观察。结果表明:3个亚系的体内侵袭均呈进行性,瘤组织侵袭生长区面积不断增大,所占总面积的百分比不断升高。其中转移潜能较强的LA5亚系侵袭程度、瘤组织所占面积的百分比均较高,显示了较强的体内侵袭能力;转移潜能较弱的LAD居中;不转移的LA1亚系瘤组织侵袭程度、所占面积的百分比均较低。3个亚系的体内侵袭能力与其转移潜能相一致.

Augiostatin对小鼠肺腺癌LA795的生长抑制作用

为探讨ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ（血管抑制因子）对小鼠肺腺癌ＬＡ７９５的治疗作用，将４×１０５ＬＡ７９５细胞接种于Ｔ７３９小鼠皮下，细胞接种后第１４ｄ，治疗组给予ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ腹腔注射，对照组注射等量ＰＢＳ液，共１４ｄ，观察肿瘤大小及动物生存期。结果：治疗组肿瘤直径由２．３５±０．１６ｃｍ缩小至０．９７±０．３４ｃｍ，而对照组瘤体直径由２．２６±０．１２ｃｍ增至４．０２±０．３６ｃｍ，两者之间差异显著（Ｐ＜０．０１）。治疗组平均生存期７６．６ｄ，对照组为３８．４ｄ，统计学分析差异显著（Ｐ＜０．０１）。结论：ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ可以抑制ＬＡ７９５细胞所致小鼠实验性肿瘤的生长，显著延长动物生存期，可能是治疗恶性肿瘤的一种全新的有效物质。

氯化镁局部导入对T739鼠LA795肺癌的放射增敏作用及机理探讨

本文采用动物肿瘤模型,观察氯化镁阳极离子导入的放射增敏效应,并通过检测肿瘤组织内CAMP含量变化,来探讨其增敏作用机理。 将接种LA795肺癌的T739纯系小鼠60只随机分为四组:对照组(不做任何处理),导入组(用直流感应电疗机行20％氯化镁阳极离子导入),放射组(用深部X线机行局部照射),放射加导入组(先行导入。

新型光敏剂DTPP介导的光动力对肺癌LA795的治疗作用

目的：研究新型光敏剂DTPP介导的光动力对肺癌LA795的治疗作用，初步探讨光动力杀伤细胞的机制。方法：对数生长期LA795细胞接种于96孔板，加入不含血清含光敏剂的RPl640培养基共孵育，不同时间后用RI-PA裂解细胞，通过紫外分光光度计．荧光法检测LA795细胞对光敏剂DTPP的摄取过程。LA795接种于共聚焦皿中，

核苷二磷酸激酶A亚基的纯化、鉴定及其对顺铂抗癌作用的增强

目的 了解核苷二磷酸激酶A亚基 (NDPK A)能否提高顺铂的抗癌效果。方法 利用十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和Western印迹杂交来监测和鉴定目标蛋白NDPK A ,利用离子交换、亲和层析结合高效液相色谱纯化分离目标蛋白 ;MTT比色法测定药物对细胞生长抑制率的影响。结果 获得NDPK A单体蛋白 ,酶比活为 8mmol·min- 1·g- 1蛋白质 ;细胞生长抑制率显示 ,NDPK A单独处理细胞时未见明显的细胞毒性 ,但与顺铂联合处理却能大大加强后者对鼠肺腺癌细胞LA795和人喉癌细胞Hep 2的细胞毒性。结论 NDPK A与顺铂联用能增强顺铂对体外培养的鼠肺腺癌细胞LA795和人喉癌细胞Hep

^(99)Tc^m-annexinV在肺癌化疗评估中的应用

目的制备放射性药物99Tcm-annexinV,评估其在早期预测肺癌化疗效果中的作用。方法通过毕赤酵母重组表达、硫酸铵沉淀和分子筛层析纯化得到annexinV,采用氯化亚锡还原法在annexinV的氨基端标记放射性核素99Tcm,经脱盐柱纯化获得标记产物。采用薄层层析测定99Tcm-annexinV的标记率和放射性化学纯度,外露磷脂酰丝氨酸的红细胞测定99Tcm-annexinV的生物活性。通过在615小鼠腋部皮下接种LA795细胞和组织插块法获得荷肺癌小鼠模型,经腹腔注射环磷酰胺治疗肺癌后6、12、24和48h测定99Tcm-annexinV在小鼠体内的分布情况。结果毕赤酵母工程菌株分泌表达annexinV,经硫酸铵分级沉淀和分子筛层析纯化后annexinV得以有效回收。室温下30min完成anne-xinV的99Tcm标记,标记率为50.2%。99Tcm-annexinV放射性化学纯度为93.9%,其生物活性保存良好。生物分布实验表明,99Tcm-annexinV通过肾脏排泄。615荷肺癌小鼠模型经过环磷酰胺化疗后48h,99Tcm-annexinV在肿瘤组织的摄取达到最高,肿瘤/肌肉放射性摄取率之比为6.34,肿瘤/血液放射性摄取率之比为4.09。结论制备了毕赤酵母来源的99Tcm-annexinV,有可能应用于早期预测肺癌化疗效果。

E_(838)对小鼠移植性肿瘤的治疗研究

目的观察E838对小鼠宫颈癌、肺腺癌的治疗效果。方法IRM2小鼠皮下接种宫颈癌(U14)、肺腺癌(LA795)瘤细胞,取E838三个剂量5mgkg、7.5mgkg、10mgkg对小鼠U14、LA795进行治疗,观察荷瘤小鼠生长情况和肿瘤生长曲线,测定肿瘤生长抑制率和骨髓有核细胞(BMC)数及脾脏、胸腺重量的变化。结果E83855mgkg、7.5mgkg、10mgkg三个剂量对小鼠U14的抑瘤率分别为36.8%、64.3%、49.7%,对LA795的抑瘤率分别为46%、60%、58%,BMC数均高于对照组,肿瘤生长也较对照组慢。结论E838对小鼠U14、LA795肿瘤的生长有明显的抑制作用和刺激骨髓细胞增殖功能。

蛇床子素对小鼠肺腺癌和人肝癌细胞生长抑制作用的研究

目的:检测天然蛇床子素在体外培养小鼠肺腺癌LA795细胞和人肝癌Bel-7402细胞抑制作用。方法:体外蛇床子素对小鼠肺腺癌细胞LA549和人肝癌细胞Bel-7402的抗肿瘤实验采用MTT法,浓度为6.25、12.5、25、50、75、100μg/mL,作用时间24,48 h,计算细胞生长抑制率和半数抑制浓度IC50。结果:蛇床子素体外对小鼠肺腺癌LA795细胞生长抑制率是53.78%,对人肝癌Bel-7402细胞生长抑制率为35.9%,IC50分别为81.3μg/mL和134.8μg/mL,作用48 h比24 h的细胞生长抑制率要高。结论:蛇床子素体外对小鼠肺腺癌LA795细胞和人肝癌Bel-7402细胞都有细胞生长抑制作用,对小鼠肺腺癌LA795细胞的抑制作用更为显著。

重组人白介素-2抑制小鼠LA_(795)肺腺癌高转移株肺转移的研究

目的 :探讨不同剂量的重组人白介素 2抑制LA795肺腺癌高转移株皮下肿瘤生长及肺转移的作用。方法 :皮下接种LA795肺腺癌高转移株于T739同系小鼠 ,腹腔注射不同剂量的重组人白介素 2 ,观察抑制肿瘤生长及肺转移的作用。结果 :rhIL 2 1.5× 10 5U/d能明显地抑制肿瘤生长。肿瘤体积 ,瘤体湿重以及肺转移结节数较对照组小和少 ,抑制率分别达 66.0 3 %、76.0 3 %、97.5 4 % (P <0 .0 1)。小剂量rhIL 2 2 .6× 10 3U/d ,抑制肿瘤生长的抑制率仅为 5 .13 % (P >0 .0 5 ) ,而对肺转移有 68.75 %的抑制率 (P <0 .0 1)。结论 :大剂量的rhIL 2仅能有效地抑制LA795肺腺癌的肺转移 ,且能较好地抑制肿瘤生长。小剂量的rhIL 2仅对LA795肺腺癌转移有一定的抑制作用。因此rhIL 2治疗肿瘤应使用大剂量。

TNP-470联合重组人内皮抑素抑制小鼠肺腺癌生长的研究

目的 :观察TNP 4 70和重组人内皮抑素 (recombinanthumanendostatin ,rhES)联合治疗对小鼠肺腺癌LA795肿瘤生长的抑制作用。方法 :用甲醇诱导能高效分泌表达重组人内皮抑素 (rhES)的毕赤酵母菌株分泌表达rhES ,将皮下接种LA795肺腺癌细胞的T739雄性近交系小鼠随机分成 3组 ,每组各 10只 ,分别给予PBS ,rhES及TNP 4 70 +rhES皮下注射 ,每日 1次 ,连续 14d ;观察各组小鼠肿瘤生长情况 ,游标卡尺测量肿瘤体积大小。断颈处死小鼠 ,原位肿瘤免疫组化观察肿瘤内部微血管密度 (microvesseldensity ,MVD)。结果 :经甲醇诱导 ,毕赤酵母重组菌分泌表达rhES ,并应用肝素亲和层析将其纯化 ;动物试验显示与PBS对照组比较 ,rhES治疗组及rhES +TNP 4 70治疗组均明显抑制小鼠肿瘤的生长 (P <0 .0 1) ,TNP 4 70 +rhES组与rhES组比较亦有显著性差异 (P <0 .0 1)。原位肿瘤免疫组化显示联合治疗组抑制血管生成更显著 (P <0 .0 1)。结论 :TNP 4 70联合rhES治疗对小鼠肺腺癌LA795生长的抑制效果比单独使用rhES的治疗效果更佳 ,具有良好的协同治疗作用。

重组人内皮抑素对小鼠肺腺癌肿瘤血管生成及肺转移的抑制作用

目的观察酵母表达重组人内皮抑素(recombinant human endostatin, rhES)对小鼠肺腺癌LA795原位肿瘤微血管生成及肺转移的抑制作用。方法对含有人内皮抑素基因的重组酵母菌株进行诱导表达及纯化rhES;将接种LA795小鼠肺腺癌细胞的T739小鼠随机分成两组,每组各10只,于接种后第6日起给予rhES和磷酸缓冲盐液(PBS)皮下注射,每日1次,连续14 d;观察两组小鼠原位肿瘤微血管生成情况及肺部肿瘤转移情况。结果经甲醇诱导酵母转化子表达rhES,并用肝素亲和层析的方法获得纯化的rhES;治疗结束后用免疫组化方法观察两组小鼠原位肿瘤微血管密度发现rhES治疗组肿瘤微血管密度明显小于PBS对照组(P<0.01);观察两组小鼠肺部发现rhES治疗组小鼠肺部未见有明显肿瘤转移病灶,而PBS对照组小鼠肺部可见大量散在肿瘤转移病灶;两组小鼠肺湿重比较具有显著性差异(P<0.01)。结论rhES具有良好的生物学活性,显著抑制了小鼠肺腺癌LA795肿瘤血管生成,并能有效抑制肿瘤的肺部转移。