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含GFP-Lac Z基因的伪狂犬病病毒上海株缺失株的构建 被引量:3
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作者 姜焱 张常印 +1 位作者 黄伟坚 陈溥言 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期120-122,共3页
在伪狂犬病病毒 (PRV)上海株gI和gE基因克隆鉴定的基础上 ,用BamHⅠ +BstpⅠ去掉gE基因的 5′端 36 3bp ,在缺失位置插入绿色荧光蛋白 (GFP)和LacZ基因 ,构建含双报告基因的PRV SH转移载体pgEI GFPZ。将pgEI GFPZ转染PRV SH的BHK 2 1细... 在伪狂犬病病毒 (PRV)上海株gI和gE基因克隆鉴定的基础上 ,用BamHⅠ +BstpⅠ去掉gE基因的 5′端 36 3bp ,在缺失位置插入绿色荧光蛋白 (GFP)和LacZ基因 ,构建含双报告基因的PRV SH转移载体pgEI GFPZ。将pgEI GFPZ转染PRV SH的BHK 2 1细胞 ,待出现 80 %病变后收获病毒 。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 上海株 GFP-lac Z基因缺失株 蚀斑法 绿色荧光蛋白 基因表达盒 疫苗
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将含有报告基因LacZ的重组腺病毒载体从大鼠鼻腔转移至脑的实验研究 被引量:1
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作者 蓝玲 郭灵 《微创医学》 2009年第2期95-97,F0004,共4页
目的探讨将携带有报告基因的腺病毒载体由鼻腔转移至脑途径的可行性。方法将携带半乳糖苷酶报告基因(LacZ)的5型重组腺病毒载体(Ad5 CMVLacZ)注入SD大鼠鼻腔黏膜,分别在注射3 d、7 d、14 d、21 d及28 d切取大鼠鼻腔黏膜以及与嗅觉信息... 目的探讨将携带有报告基因的腺病毒载体由鼻腔转移至脑途径的可行性。方法将携带半乳糖苷酶报告基因(LacZ)的5型重组腺病毒载体(Ad5 CMVLacZ)注入SD大鼠鼻腔黏膜,分别在注射3 d、7 d、14 d、21 d及28 d切取大鼠鼻腔黏膜以及与嗅觉信息传导途径相关的脑组织,进行冰冻切片和β-半乳糖苷酶(β-gal)免疫组织化学反应显色,判断该载体是否转染和表达蛋白质产物。结果β-gal免疫组化染色反应显示,该病毒载体从第3天起即可在鼻腔黏膜与嗅球内的细胞转染和表达,在第7天至第21天病毒载体逐渐向颅内深部的室管膜下区、杏仁核及齿状回细胞转移和表达,持续性表达蛋白质产物达28 d之久。结论经鼻腔黏膜注入腺病毒载体不仅可将外源性基因转移到脑实质内,还可确保外源性基因转染和表达成功。 展开更多
关键词 微创途径 腺病毒载体 脑基因转移 Β-半乳糖苷酶基因 鼻腔
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pMCLacⅠ/neo转基因小鼠靶基因突变检测的新策略
3
作者 姚真真 黎怀星 +2 位作者 车文良 贺艳 傅继梁 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第7期589-593,共5页
由于pMCLacⅠ neo转基因小鼠含有两种不同状态的LacⅠ靶基因 ,有别于以往所建立的只含有一种靶基因的系统。因此 ,建立一种能快速、有效地分析这两种靶基因的检测方法 ,成为该转基因小鼠建立后的又一新课题。通过适当方法将pMCLacⅠ ... 由于pMCLacⅠ neo转基因小鼠含有两种不同状态的LacⅠ靶基因 ,有别于以往所建立的只含有一种靶基因的系统。因此 ,建立一种能快速、有效地分析这两种靶基因的检测方法 ,成为该转基因小鼠建立后的又一新课题。通过适当方法将pMCLacⅠ neo中两种LacⅠ靶基因分开后 ,采用了新近建立的M9 L正向选择系统进行检测 ,并用已知的LacⅠ基因突变子作为阳性对照 ,验证该策略的可行性。实验结果提示 ,M9 L正向选择系统可应用于pMCLacⅠ neo转基因小鼠中两种LacⅠ靶基因的检测 ;实验中所建立的突变检测方法快速。 展开更多
关键词 正向选择 lacI靶基因 突变检测
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cAMP对lac基因启动子体外转录影响的研究
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作者 翟玲 于成国 +1 位作者 付国 胡品良 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期172-173,共2页
目的:研究cAMP对lac基因启动子体外转录的影响作用。方法:以含lac基因启动子及其Z结构基因的线性pUR222DNA为模板,观察E.coliRNA聚合酶受cAMP作用后的转录强度。结果:0.10~0.80mmol... 目的:研究cAMP对lac基因启动子体外转录的影响作用。方法:以含lac基因启动子及其Z结构基因的线性pUR222DNA为模板,观察E.coliRNA聚合酶受cAMP作用后的转录强度。结果:0.10~0.80mmol/L的cAMP对lac基因启动子体外转录有明显的促进作用,低于0.10mmol/L对体外非特异性转录有促进作用;浓度进一步增高对转录起抑制作用。cAMP作用下特异性与非特异性转录产物放射活性间无相关性。结论:cAMP对转录有双重作用,这种作用可能与启动子区的构象特点及RNA聚合酶与启动子的特异结合有关。 展开更多
关键词 环磷酸腺甙 lac基因启动子 体外转录
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Lac启动子在可溶性抗体Fab表达中的作用 被引量:1
5
作者 李时荣 孙勤暖 +1 位作者 刘赟娜 王琰 《内蒙古医学院学报》 2002年第2期74-76,共3页
目的 :探讨Lac启动子在可溶性抗体Fab表达中的作用。方法 :利用DNA重组的方法对P3 -3G9噬菌体抗体表达载体[1 ] 进行改建 ,通过免疫印迹试验鉴定新的载体P3G9-L是否有可溶性Fab的表达。结果 :1.P3G9-L为单Lac启动子同时驱动Fd段及K链的... 目的 :探讨Lac启动子在可溶性抗体Fab表达中的作用。方法 :利用DNA重组的方法对P3 -3G9噬菌体抗体表达载体[1 ] 进行改建 ,通过免疫印迹试验鉴定新的载体P3G9-L是否有可溶性Fab的表达。结果 :1.P3G9-L为单Lac启动子同时驱动Fd段及K链的双顺反子的可溶性Fab段表达载体。 2 .P3G9-L中的Lac启动子的作用是缓和的 ,可溶性Fab表达量较低。结论 :1 Lac启动于可以用于可溶性抗体Fab的表达体系。 2 展开更多
关键词 lac启动子 抗体 基因表达 肿瘤
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大白菜LACS家族基因鉴定与表达分析 被引量:1
6
作者 王荣花 王树彬 +4 位作者 刘栓桃 张志刚 李巧云 王立华 赵智中 《山东农业科学》 北大核心 2022年第6期1-9,共9页
长链脂酰辅酶A合成酶(LACS)能催化游离的脂肪酸形成酰基辅酶A,是脂肪酸激活、转运、氧化及储存脂合成等生化途径的关键酶,在许多生物过程中发挥重要作用。本研究利用生物信息学方法鉴定大白菜LACS家族基因成员,分析其亲缘关系、蛋白质... 长链脂酰辅酶A合成酶(LACS)能催化游离的脂肪酸形成酰基辅酶A,是脂肪酸激活、转运、氧化及储存脂合成等生化途径的关键酶,在许多生物过程中发挥重要作用。本研究利用生物信息学方法鉴定大白菜LACS家族基因成员,分析其亲缘关系、蛋白质理化性质、染色体定位、共线性关系、基因结构、蛋白保守结构域和基因表达模式。结果表明,从大白菜全基因组共鉴定到13个BrLACS基因成员,分成4组,不均匀地分布在7条染色体和1个Scaffold上。BrLACSs的蛋白长度和分子量分别为199~1 072 aa和23.10~121.10 kDa。与拟南芥AtLACS1、AtLACS5和AtLACS6共线性的BrLACS基因发生了扩张,出现了双拷贝(BrLACS5a、BrLACS5b和BrLACS6a、BrLACS6b)及三拷贝(BrLACS1a、BrLACS1b和BrLACS1c)。表达模式分析表明,BrLACS4和BrLACS8基因在大白菜不同器官/组织中表达量最高,尤其在控制花器官蜡质性状中起着重要作用,在有蜡粉大白菜中的表达量显著高于无蜡粉大白菜。本研究结果为解析大白菜LACS基因在控制大白菜蜡质性状中的分子机制和指导大白菜亮绿种质资源创新具有重要意义。 展开更多
关键词 大白菜 lacS家族 蜡质 生物信息学分析 基因表达
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筛选化学诱变原的RNR3调控重组LacZ基因酵母细胞的建立 被引量:1
7
作者 王瑞鲲 葛宜枝 +2 位作者 陆益新 吴倩倩 李湘鸣 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2014年第3期213-217,共5页
目的:建立可筛选化学诱变物的RNR3调控重组Lac Z基因酵母细胞。方法:利用降式PCR技术从酵母基因组中扩增RNR3启动子,将其插入到pMP206/ERE酵母报告载体,构建成RNR3调控的Lac Z酵母报告载体,将该载体转入W303-1A酵母细胞,构建成RNR3调控... 目的:建立可筛选化学诱变物的RNR3调控重组Lac Z基因酵母细胞。方法:利用降式PCR技术从酵母基因组中扩增RNR3启动子,将其插入到pMP206/ERE酵母报告载体,构建成RNR3调控的Lac Z酵母报告载体,将该载体转入W303-1A酵母细胞,构建成RNR3调控的重组Lac Z基因酵母细胞。用数种化学诱变原作用于该重组基因酵母细胞,观察其对RNR3的诱导表达。结果:放线菌素D、丝裂霉素C、阿非迪霉素和溴乙锭不能诱导RNR3的表达,而甲磺酸甲脂、瘤可宁、顺铂、4-硝基-N-氧化喹啉、博来霉素、福莱霉素、5-氟尿嘧啶、喜树碱和羟基脲诱变原与RNR3表达有明显的剂量效应关系。结论:该重组酵母可用于对多种化学诱变原的快速筛选。 展开更多
关键词 化学诱变原 酵母 Β-半乳糖苷酶 lac Z基因
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小麦LACS基因家族的全基因组鉴定与表达分析 被引量:2
8
作者 武雄雄 杨成兰 +2 位作者 祁存英 熊辉岩 段瑞君 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期401-409,共9页
长链酰基辅酶A合成酶(long-chain acyl-coenzyme A synthetase,LACS)在脂肪酸代谢、角质层角质和蜡的合成中发挥着重要作用。为研究小麦中LACS基因的特征,以中国春为材料,进行全基因组鉴定和分析。结果共鉴定出148个小麦LACS基因(TaLAC... 长链酰基辅酶A合成酶(long-chain acyl-coenzyme A synthetase,LACS)在脂肪酸代谢、角质层角质和蜡的合成中发挥着重要作用。为研究小麦中LACS基因的特征,以中国春为材料,进行全基因组鉴定和分析。结果共鉴定出148个小麦LACS基因(TaLACS),不均匀分布于21条染色体上,且有成簇分布的现象,编码蛋白大部分为中性、亲水的水溶性蛋白,性质稳定。系统进化分析结果显示,148个TaLACS基因聚为6组,有55对旁系同源基因。表达谱分析表明,TaLACS基因在不同组织和逆境胁迫下存在明显的差异表达,说明TaLACS基因具有组织特异性,在抗低温、干旱和赤霉病过程中TaLACS基因发挥重要作用。该家族中含有响应低温、干旱和脱落酸元件的基因分别占34.9%、46.0%和85.8%,揭示TaLACS基因参与生物胁迫和非生物胁迫过程。 展开更多
关键词 小麦 lacS 基因家族 表达分析
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谷子LAC基因家族的鉴定及分析 被引量:1
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作者 薛佳丽 任晓庆 +3 位作者 郄倩茹 段明 申慧芳 高建华 《山西农业科学》 2021年第4期395-402,共8页
漆酶(LAC)是植物木质素生物合成中催化木质素单体聚合的关键酶,而木质素对植物生长有着重要的作用。试验采用生物信息学方法筛选了谷子(Setaria italica)漆酶基因家族成员,并对其理化性质、染色体定位、启动子顺式作用元件、基因结构以... 漆酶(LAC)是植物木质素生物合成中催化木质素单体聚合的关键酶,而木质素对植物生长有着重要的作用。试验采用生物信息学方法筛选了谷子(Setaria italica)漆酶基因家族成员,并对其理化性质、染色体定位、启动子顺式作用元件、基因结构以及表达情况进行了相关分析。结果表明,豫谷1号基因组中包括52个LAC同源基因,可分为5个亚家族,其中GroupⅤ中含有33个SiLAC成员,占整个家族的63.46%;52个基因不均匀地分布在1、3、4、5、7、8、9号染色体上,其中,5号和8号染色体上存在多基因串联重复;52个SiLAC基因的CDS序列长度在813~1953 bp,编码471~650个氨基酸,预测均为分泌型蛋白,这与其促进细胞壁中木质素合成的功能一致。SiLAC启动子序列包含与植物生长发育调控、逆境响应相关的顺式作用元件。基因结构分析显示,52个基因均为断裂基因,且每个基因的基因结构存在一定的差异。SiLAC的外显子数目在2~6个,其中,10个SiLAC基因没有UTR区域,并且聚集在同一分支的SiLAC基因的内含子和外显子结构相似。组织特异性表达模式分析结果显示,SiLAC13、SiLAC25、SiLAC28在根中的表达量最高,谷子LAC基因家族在叶片中几乎不表达。研究结果可为进一步分析谷子LAC基因家族的功能、解析其在谷子生长过程中表达调控机制提供参考。 展开更多
关键词 谷子 漆酶 基因家族 生物信息学
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基因工程菌株产生的含人类绒毛膜促性腺激素抗原的研究 Ⅲ.β—Galactosidase—hCG 免疫和生物活性的初步探讨
10
作者 罗玉香 刘杰森 +3 位作者 刘学高 吴伯良 叶彬 王璇 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 1990年第1期92-96,共5页
基因工程菌株产生的含人类绒毛膜促性腺激素(hCG)β亚单位 C 末端36肽的β-半乳糖苷酶杂交蛋白(简称:β-Galactosidasc-hCG),主动免疫昆明种小白鼠,能诱发特异抗 hCG 抗体的产生。其抗体滴度的高低与免疫原用量有关。通过对小鼠子宫增... 基因工程菌株产生的含人类绒毛膜促性腺激素(hCG)β亚单位 C 末端36肽的β-半乳糖苷酶杂交蛋白(简称:β-Galactosidasc-hCG),主动免疫昆明种小白鼠,能诱发特异抗 hCG 抗体的产生。其抗体滴度的高低与免疫原用量有关。通过对小鼠子宫增重抑制试验,表明其抗血清能中和 hCG 的生物活性。 展开更多
关键词 HCG抗原 抗体滴度 免疫 抑制试验
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辣椒中LACS家族基因鉴定及其对非生物胁迫的响应
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作者 贾切 刘亚博 +5 位作者 王飞 姚明华 余楚英 沈胜 刘奕清 李宁 《长江大学学报(自然科学版)》 2022年第6期117-126,共10页
为探究LACSs基因家族成员特征及其在辣椒非生物胁迫中的调控功能,通过同源性搜索,共鉴定出10个LACSs家族基因。然后通过生物信息学手段分析研究了其基因结构、基因组定位、系统发育关系和基因表达。根据系统发育分析可将鉴定到的10个LA... 为探究LACSs基因家族成员特征及其在辣椒非生物胁迫中的调控功能,通过同源性搜索,共鉴定出10个LACSs家族基因。然后通过生物信息学手段分析研究了其基因结构、基因组定位、系统发育关系和基因表达。根据系统发育分析可将鉴定到的10个LACSs基因分为8个亚家族,其中7个基因不均匀分布在辣椒染色体上,还有3个未被标定在染色体上。启动子顺式元件分析结果表明,CaLACSs可能参与了植物激素和/或非生物胁迫反应的调控。此外,辣椒材料‘6421’的表达谱分析表明,CaLACS基因在不同组织和逆境胁迫下存在明显的差异表达,说明CaLACS基因具有组织特异性,在抗低温、高温以及盐胁迫过程中CaLACS基因发挥重要作用。耐盐品种‘H1023’与盐敏感品种‘XWHJ-M’的qRT-PCR结果表明,CaLACS1和CaLACS2显著受盐胁迫诱导表达,耐盐品种比盐敏感品种的表达量更高,其可能在响应NaCl胁迫中起到关键性作用。总的来看,LACSs基因家族成员可能在响应生物和非生物胁迫中发挥重要作用。 展开更多
关键词 辣椒(Capsicum annuum L.) lacS家族 非生物胁迫 基因表达 生物信息学
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漆酶LAC表达与鸭梨果心褐变的关系 被引量:2
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作者 王梓宇 张引引 +5 位作者 李月圆 李玲 尤玲玲 李晓雁 晋朝 闫师杰 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第24期5073-5080,共8页
【目的】探究在不同成熟度和降温贮藏方式下,LAC表达模式与鸭梨果心褐变的关系,为进一步解析鸭梨果心褐变机制提供理论依据。【方法】以鸭梨作为材料,通过对不同成熟度(早采、中采和晚采)的鸭梨进行急速降温(急降)和缓慢降温(缓降)处理... 【目的】探究在不同成熟度和降温贮藏方式下,LAC表达模式与鸭梨果心褐变的关系,为进一步解析鸭梨果心褐变机制提供理论依据。【方法】以鸭梨作为材料,通过对不同成熟度(早采、中采和晚采)的鸭梨进行急速降温(急降)和缓慢降温(缓降)处理,观察贮藏期间鸭梨果心褐变情况,测定漆酶(Laccase,LAC)活性及其基因LAC的相对表达量,研究LAC在鸭梨果心褐变过程中的参与作用。【结果】冷藏60 d时,晚采鸭梨出现褐变,晚采缓降处理的鸭梨果心褐变指数为0.32,是同期急速降温处理的2.56倍;在贮藏90 d时,中采缓降处理的褐变指数是0.24,中采急降处理的褐变指数仅为0.01。各个处理组在贮藏期间LAC活性多数表现为先逐渐升高后下降的趋势,晚采的果实在贮藏60 d时出现活性高峰,褐变发生;早采和中采鸭梨LAC活性高峰均在90 d时出现,褐变程度低于晚采鸭梨。在贮藏期间,缓慢降温处理的LAC活性高于急速降温处理。鸭梨LAC14和LAC7表达量呈先上升后下降的趋势,LAC6表现为先下降后上升再降低的变化趋势;中采、晚采鸭梨在贮藏60 d时,LAC14和LAC7表达量最高。【结论】与缓慢降温相比,急速降温处理减少了鸭梨果心褐变的发生。在整个贮藏期间,LAC活性呈先上升后下降然后又上升的趋势,其峰值时的活性高低次序为:晚采>中采>早采,这与果心褐变趋势一致;LAC在鸭梨果心褐变过程中上调表达。相比缓慢降温处理,急速降温处理具有较低的LAC7、LAC14和LAC6表达量。急速降温结合适时采收能够抑制LAC的上调表达,减少鸭梨果心褐变发生。 展开更多
关键词 鸭梨 果心褐变 降温方式 漆酶 lac
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Molecular Cloning and Expression Analysis of <i>PgLAC</i>in Pomegranate 被引量:1
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作者 Lili Dong Feng Xiong +2 位作者 Na Liu Qi Wang Shuiming Zhang 《American Journal of Molecular Biology》 2018年第3期145-155,共11页
Decreasing the hardness of pomegranate seeds by reducing the content of lignin is an effective way to develop soft-seeded pomegranate. Laccases (LAC) is a key regulatory factor in lignin synthesis. The full-length seq... Decreasing the hardness of pomegranate seeds by reducing the content of lignin is an effective way to develop soft-seeded pomegranate. Laccases (LAC) is a key regulatory factor in lignin synthesis. The full-length sequence of PgLAC was obtained from “Punica granatum cv. Hongyushizi”, by using RACE and RT-PCR methods. PgLAC had an open reading frame of 1716 bp and encoded a protein of 571 amino acids. Phylogenetic tree analysis showed that PgLAC was most closely related to the LAC5 ortholog identified in Eucalyptus grandis (EgLAC5). Expression analysis showed that expression of PgLAC was higher in “Hongyushizi”, while lower in “Huiliruanzi” and “Tunisiruanzi”;PgLAC was predominantly expressed in stems;From 20 to 80 days after full bloom, the expression of PgLAC increased and reached a maximum at 80 d, then gradually decreased. These results suggested that PgLAC may be a candidate gene for reducing the hardness of pomegranate seeds. 展开更多
关键词 POMEGRANATE lac gene CLONING Expression ANALYSIS
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GFAP promoter directs lacZ expression specifically in a rat hepatic stellate cell line 被引量:4
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作者 Gunter Maubach Michelle Chin Chia Lim 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2006年第5期723-730,共8页
瞄准:GFAP 传统地被认为是为神经神经胶质的一个简历标记(主要星形细胞和 non-myelinating Schwann 房间) 。遗传上,一个 2.2-kb 人 GFAP 倡导者成功地被用来指向星形细胞在试管内和在活体内。更最近, GFAP 也为识别肝的星形细胞(HSC... 瞄准:GFAP 传统地被认为是为神经神经胶质的一个简历标记(主要星形细胞和 non-myelinating Schwann 房间) 。遗传上,一个 2.2-kb 人 GFAP 倡导者成功地被用来指向星形细胞在试管内和在活体内。更最近, GFAP 也为识别肝的星形细胞(HSC ) 作为几个制造者之一被建立。在这个工程,为指向 HSC 的一样的 2.2-kb 人 GFAP 倡导者的可能的申请被调查。方法:GFAP-lacZ transgene 是进各种各样的房间线(HSC, hepatocyte,和另外的 non-HSC 房间类型) 的 transfected。transgene 表示特性被贝它牛乳糖活动染色的 X 女郎决定。并且 transgene 的应答的海角与典型 pro-fibrotic cytokine TGF-beta1 被测试。内长的 GFAP 基因的表示被即时 RT-PCR 估计,提供为 transgene 表示的一本参考书。结果:结果第一次证明 2.2 kb hGFAP 倡导者不仅能够指导 HSC 特定的表示,而且对已知的 pro-fibrogenic cytokine TGF-beta1 作出回应由在在一个剂量依赖者和时间依赖者举止的规定上面,类似于内长的 GFAP。结论:在结论,这些调查结果为使用 GFAP 倡导者明确地为治疗学的目的操作 HSC 建议了新奇实用程序。 展开更多
关键词 肝星型细胞 基因表达 启动子 生理机制
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运用生色基因标记黄瓜根围促生菌(PGPR)筛选菌株 被引量:11
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作者 陈晓斌 张炳欣 +1 位作者 楼兵干 Ryder MH 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期287-292,共6页
采用三亲交配方法 ,通过Tn7转座系统将lacZY标记基因导入黄瓜根围促生菌 (PG PR)筛选菌株PseudomonasfluorescensCN1 1 6和PseudomonascorrugataCN31的利福平抗性突变株中 ;标记假单胞菌菌株则被赋予了利用乳糖作为唯一碳源的能力 ,在... 采用三亲交配方法 ,通过Tn7转座系统将lacZY标记基因导入黄瓜根围促生菌 (PG PR)筛选菌株PseudomonasfluorescensCN1 1 6和PseudomonascorrugataCN31的利福平抗性突变株中 ;标记假单胞菌菌株则被赋予了利用乳糖作为唯一碳源的能力 ,在只有乳糖的M9培养基上生长能分解X Gal,菌落显出特有的蓝色 ;经Southern杂交分析 ,证明标记基因lacZY存在于转化菌株的染色体上 ;经验证标记菌株标记性状稳定 ,与对应的野生菌株比较其它性状如培养性状、形态特征、生防效果等基本不变 ;PGPR菌株利福平抗性和生色基因标记的结合 (双标记 )能最大限度地将土壤中引入的PGPR菌株与土著细菌分开 ,检测下限可达 1 0CFU mL ,为PGPR在根围的分子生态学研究提供了一个较好的工具。 展开更多
关键词 植物根围促生菌 PGPR 基因标记 lacZY基因 转座子Tn7 分子生态学 黄瓜 筛选 基因
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成年大鼠骨骼肌干细胞纯化、培养及移植的初步实验研究 被引量:8
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作者 陈从波 黄铁柱 姚启盛 《生物医学工程与临床》 CAS 2007年第3期164-166,F0003,共4页
目的探讨成年大鼠骨骼肌干细胞纯化与培养方法及肌干细胞移植在肌疾病治疗中的价值。方法采用混合酶消化及反复差速贴壁法分离、纯化培养SD大鼠骨骼肌干细胞,然后用携带lac-Z基因的腺病毒载体转染肌干细胞,待转染成功后将携带lac-Z基因... 目的探讨成年大鼠骨骼肌干细胞纯化与培养方法及肌干细胞移植在肌疾病治疗中的价值。方法采用混合酶消化及反复差速贴壁法分离、纯化培养SD大鼠骨骼肌干细胞,然后用携带lac-Z基因的腺病毒载体转染肌干细胞,待转染成功后将携带lac-Z基因的骨骼肌干细胞注射于自体和同种异体的膀胱颈及后尿道周围,分别于注射后5、15d,处死大鼠取出膀胱颈及后尿道,行组织学检查及X-gal染色。结果成功地分离、培养了成年大白鼠的骨骼肌干细胞。注射部位无明显炎症改变,经X-gal染色显示自体细胞移植5d及15d均可见大量的蓝染细胞,提示移植细胞在体内成活,异体移植各时间点未见蓝染细胞。结论采用混合酶消化及差速贴壁的方法可以成功纯化骨骼肌干细胞;自体骨骼肌干细胞移植在体内可以存活,有可能成为治疗肌疾病的有效方法,而异体移植不能存活。 展开更多
关键词 骨骼肌干细胞 移植治疗 肌疾病 lac—Z基因
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受乳糖启动子控制的基因表达过程的优化 被引量:16
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作者 侯松旺 李小洁 马辉文 《武汉大学学报(自然科学版)》 CSCD 1998年第4期513-510,共1页
借助于SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析方法,对乳糖诱导的由乳糖启动子控制的大肠杆菌RNA聚合酶σ70因子基因表达过程进行了优化研究.结果表明,含此融合基因的大肠杆菌菌株BL21(DE3)pGEMD的生长量达到OD600... 借助于SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析方法,对乳糖诱导的由乳糖启动子控制的大肠杆菌RNA聚合酶σ70因子基因表达过程进行了优化研究.结果表明,含此融合基因的大肠杆菌菌株BL21(DE3)pGEMD的生长量达到OD600nm=1.0时,用终浓度为0.08%的乳糖进行连续5h的诱导,可使大肠杆菌RNA聚合酶σ70因子基因的表达量达到最大,并达到IPTG同样的诱导效果.流加低浓度的乳糖溶液能增加σ70因子的合成量,但是促进作用不很显著. 展开更多
关键词 乳糖诱导作用 启动子 基因表达
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基于pMTR1质粒的转基因小鼠突变研究模型的建立 被引量:4
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作者 卢洋 黎怀星 +1 位作者 李建秀 傅继梁 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期537-540,共4页
目的 :建立在基因组中整合有 p MTR1质粒的 C5 7BL / 6转基因小鼠家系 ,为体内基因突变研究提供有效的动物模型。方法 :利用分子克隆技术构建 p MTR1质粒。将其线性化后 ,用显微注射法注射入 5 72只 C5 7BL / 6小鼠受精卵 ,再将它们分... 目的 :建立在基因组中整合有 p MTR1质粒的 C5 7BL / 6转基因小鼠家系 ,为体内基因突变研究提供有效的动物模型。方法 :利用分子克隆技术构建 p MTR1质粒。将其线性化后 ,用显微注射法注射入 5 72只 C5 7BL / 6小鼠受精卵 ,再将它们分别移入 45只受体母鼠的输卵管中 ,共产仔 44只 ,存活 35只 ,采用 PCR,PCR- Southern和基因组 Southern杂交三级筛选法鉴定子代小鼠。以 4只经基因组 Southern杂交证实在基因组 DNA中整合有多拷贝结构完整的 p MTR1质粒的小鼠作Founder小鼠 ,进行转基因小鼠的建系工作。对每个 Founder小鼠已有的 F1代及 F2代转基因小鼠的基因组 DNA进行p MTR1质粒回收实验。结果 :从转基因小鼠基因组中可以回收出结构、功能完整的 p MTR1质粒。结论 :(1)建立了在基因组 DNA中整合有 p MTR1质粒的 C5 7BL / 6转基因小鼠家系 ;(2 ) 展开更多
关键词 转基因小鼠 基因突变 PMTR1质粒
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紫云英根瘤菌结瘤基因调控片段克隆和分析 被引量:1
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作者 农广 张忠明 +1 位作者 胡福荣 陈华癸 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期73-77,共5页
通过对紫云英根瘤菌7653R及其Nod-突变株7653R-1侵染根毛试验证实,7653R菌株318×103bp大质粒决定早期结瘤功能,分子杂交结果显示,其nodDABC定位于该质粒上.将7653R菌株的大质粒DN... 通过对紫云英根瘤菌7653R及其Nod-突变株7653R-1侵染根毛试验证实,7653R菌株318×103bp大质粒决定早期结瘤功能,分子杂交结果显示,其nodDABC定位于该质粒上.将7653R菌株的大质粒DNA进行酶切并克隆到表达载体pMP220上,构建lacZ重组子文库,将lacZ重组子文库导入7653R菌株,在加有X-gal和种子浸提物的根瘤菌培养基上选择蓝色菌落.通过Miler试验测定它们的β-半乳糖苷酶活性,获得1株种子浸提物对其有诱导效应的菌株HN18,对该菌株所含的重组质粒pHN18进行nodDABC探针杂交,发现有1条1.7×103bp的阳性杂交带。 展开更多
关键词 紫云英根瘤菌 nod基因 分子杂交 结瘤基因 克隆
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单分子水平的酶催化与基因表达研究 被引量:2
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作者 苏晓东 金坚石 谢晓亮 《物理化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第7期1976-1987,共12页
近半个多世纪以来生命科学取得了非凡的进展,从DNA双螺旋结构的提出,到第一个酶晶体结构的被解析,都得益于像X射线衍射、核磁共振、质谱这样的物理化学工具的发展.如今,在深入细致地定量研究生物活体系统中我们正面临新的挑战,例如:了... 近半个多世纪以来生命科学取得了非凡的进展,从DNA双螺旋结构的提出,到第一个酶晶体结构的被解析,都得益于像X射线衍射、核磁共振、质谱这样的物理化学工具的发展.如今,在深入细致地定量研究生物活体系统中我们正面临新的挑战,例如:了解酶及其他大分子复合物在体内是如何实时工作的,它们在分子数很少时是怎样工作的,在活细胞中大分子复合物是如何协调工作的,以及不同的基因在活细胞中分子数很少的情况下是如何实现表达和不表达的等等.近十多年来,单分子成像,超高分辨率显微镜和单分子操纵技术在世界范围内被广泛地运用于生物医学研究,对生物化学和分子生物学的发展产生着深远的影响,因为运用这些单分子、超高分辨技术,使很多如上述的令人感兴趣的生物学问题实现了单分子层面上的研究和理解.本文拟就近年来相关的物理化学方法特别是单分子方法和技术在生物医学中的应用做一个简要介绍. 展开更多
关键词 单分子酶学 米氏方程 荧光蛋白 乳糖操纵子 基因表达 阻遏子
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