LASS2/TMSG-1基因对肿瘤疾病和神经损伤修复的影响

人源性长寿保障基因2(LASS2)是中国发现并命名的一个肿瘤转移抑制基因,也被称作肿瘤转移抑制相关基因1(TMSG-1),能够通过抑制V-ATPase质子泵活性、调节神经酰胺表达、调控转录过程等途径抑制人类多个系统的肿瘤的生长、浸润及转移,LASS2的表达与肿瘤的临床分期、预后和耐药性密切相关,同时有新的研究提出LASS2/TMSG-1能够参与调控正常细胞的迁移从而促进神经损伤的修复,现就LASS2/TMSG-1基因在相关疾病中表达的意义及可能的作用机制和应用前景的研究现状做一综述。

长寿保障同源基因2诱导Hepal-6肝癌细胞G0／G1期阻滞的作用及其机制

目的探讨长寿保障同源基因2（Lass2）对小鼠肝癌细胞Hepal-6细胞周期的影响及其机制。方法将前期成功构建的pEGFP-Lass2采用脂质体转染法转染Hepal-6肝癌细胞48h，流式细胞术碘化丙锭（PI）法检测各组（阴性对照、空载、实验组）细胞周期，实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法和Western blot法检测Lass2、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、核因子-κB（NF-κB）p65mRNA及蛋白相对表达水平，并Western blot法检测核NF-κBp65磷酸化（NF-κB p-p65）表达水平；采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞增殖活性；为进一步验证且明确其机制，利用Hepal-6细胞悬液肝内注射法，构建C57BL／6J小鼠原位肝癌模型，采用流体力学尾静脉分次加强注射裸质粒，转染后分别提取各组小鼠肝组织总RNA、总蛋白及核蛋白，FQ-PCR、Western blot法验证Lass2、CyclinD1、NF-κBp65mRNA和蛋白相对表达水平、NF-κBp65磷酸化水平。结果Hepal-6肝癌细胞实验组Lass2 mRNA及蛋白相对表达水平较阴性对照组、空载组明显上调（mRNA：F=1486．895，均P=0．000；蛋白：F=55．964，均P=0．000），细胞周期G0／G1期百分比明显增高（F=239．867，均P=0．000）、G2／M期和S期明显减少（FG2/M=13．462，PG/M=0．003，0．005；FS=46．207，均P=0．000），同时下调实验组NF-κBp65、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达水平（mRNA：FNF-κBP65=29．993，FcYELIN D1=113．260，均P=0．000；蛋白：FNF-κBP65=17．679，P=0．003，0．002；Fcyclin D1：176．357，均P=0．000），NF-κBp-p65蛋白磷酸化水平明显抑制（FNF-κ p-p65=33．817，P=0．000）。结论Lass2基因使肝癌细胞Hepal-6的细胞周期阻滞于G0／G1期，其作用机制可能是通过抑制NF-κB的激活，下调Cyclin D1的转录与蛋白表达有关。

肿瘤转移抑制基因-1与肿瘤关系的研究进展

肿瘤转移抑制基因-1(tumor metastasis suppressor gene-1,TMSG-1)是一个新发现的肿瘤转移抑制基因,在促进肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤细胞浸润和转移中起着重要的作用.TMSG-1抑制肿瘤的机制,主要可能与V-ATPase和神经酰胺有关.本文就TMSG-1的发现、编码蛋白的结构、抑制肿瘤浸润和转移的可能机制、在各类肿瘤中的表达和意义以及应用前景等作一综述.

特异性小片段干扰RNA降低人源性长寿保障基因2/肿瘤转移抑制基因-1表达对人前列腺癌细胞株侵袭转移能力的影响

目的 观察人源性长寿保障基因2（LASS2）/肿瘤转移抑制基因-1（TMSG-1）对人前列腺癌细胞株侵袭转移能力的影响.方法 首先采用小片段RNA干扰技术沉默人前列腺癌细胞株PC-3M-2B4（低转移潜能）中LASS2/TMSG-1的表达,并通过实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术、免疫细胞化学法筛选干扰效率最高的小干扰RNA （siRNA）后,选取干扰效率最高的siRNA-2进行后续实验,通过体外侵袭实验、细胞划痕实验及黏附实验检测干扰LASS2/TMSG-1基因前后,PC-3M-2B4细胞侵袭转移能力的改变.结果 筛选出4条siRNA,以空白对照为1,siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3及siRNA-4的LASS2/TMSG-1 mRNA表达量分别为1.557、0.155、0.369及0.193;siRNA-2转染组穿膜细胞数为（21.20±1.21）个,细胞的侵袭能力明显高于无关阴性对照组[（l0.07±1.39）个]和空白对照组[（11.00±1.97）个,P＜0.01];siRNA-2转染组细胞划痕修复率[（64.90±0.56）％]明显高于无关阴性对照组[（26.46±0.31）％]和空白对照组[（22.18±0.57）％],差异有统计学意义（P＜0.01）;细胞黏附30、60 min后,与无关阴性对照组[（29.83±0.15）％、（49.90±0.35）％]、空白对照组[（30.37±1.27）％、（50.20±0.06）％]比较,siRNA-2转染组细胞黏附率[（10.10±0.27）％、（30.37±0.30）％]明显下降,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 通过RNA干扰技术证实了LASS2/TMSG-1在肿瘤侵袭转移中的作用,证明它是一种肿瘤转移抑制基因.

LASS2诱导甲状腺未分化癌8505c细胞自噬、凋亡及相关机制的探讨

目的:研究LAG1长寿保障同系物2(LASS2)对甲状腺未分化癌细胞株8505c凋亡及自噬的影响及可能的分子机制。方法:用Adv-GFP或Adv-LASS2-GFP重组腺病毒感染8505c细胞,细胞分为阴性对照(NC)组、空载体组(Adv-GFP组)和实验组(Adv-LASS2-GFP组)。感染48 h后提取各组细胞总RNA和蛋白,采用RT-qPCR和Western blot分别检测LASS2 mRNA和蛋白表达水平的变化;CCK-8和集落形成实验评价各组细胞增殖能力的差异;TUNEL染色评估各组细胞凋亡水平;透射电子显微镜观察细胞超微结构及自噬状态;Western blot检测各组细胞凋亡及自噬相关蛋白[细胞色素C(Cyto-C)、Bcl-2、Bax、p62、LC3-I、LC3-II和beclin-1]的表达水平;免疫共沉淀(CoIP)联合液相色谱-质谱(LC-MS)鉴定与LASS2相互作用的蛋白,结合基因本体论(GO)数据库等分析并经Co-IP进一步验证互作关系。结果:与NC组和Adv-GFP组相比,Adv-LASS2-GFP组LASS2 mRNA和蛋白表达水平均显著上调(P<0.01),且随时间延长Adv-LASS2-GFP组细胞增殖能力显著被抑制,集落形成能力降低,细胞凋亡增加(P<0.01);透射电镜结果显示,与NC组和Adv-GFP组相比,Adv-LASS2-GFP组细胞可见双层膜结构的自噬小体及大量自噬溶酶体;Western blot结果显示,Adv-LASS2-GFP组Bcl-2和p62蛋白表达水平较NC组和Adv-GFP组均显著下调(P<0.01),Bax、Cyto-C和beclin-1表达及LC3-II/LC3-I比值均显著上调(P<0.01);Co-IP/LC-MS鉴定及GO等富集分析筛选出参与调控自噬信号通路且与LASS2相互作用的4个蛋白,分别为p62、HSC70、HSP90和CSNK2A1。Co-IP结果显示LASS2与p62不存在直接相互作用。结论:LASS2能促进8505c细胞凋亡并激活自噬,其作用机制可能是通过与p62/HSC70/HSP90/CSNK2A1相互作用而影响自噬和凋亡级联信号通路。