检验用鲎试剂及重组试剂的现状与思考

目的通过研究检验用鲎试剂及重组试剂的使用及管理现状,为细菌内毒素检测和鲎试剂使用的科学有序发展提供参考。方法结合日常医疗产品检测和管理工作实践,梳理检测用鲎试剂的相关历史沿革和国内外监管现状,分析在鲎资源短缺情况下,细菌内毒素检测主要替代方法及其所用重组试剂的基本情况。结果与结论对目前在无菌医疗产品细菌内毒素检测领域可能面临的原材料短缺、监管方式有待进一步完善等主要问题进行总结,建议明确鲎试剂的管理归属、对医疗产品检验用鲎试剂的质量标准开展标准提高及生产质量管理的研究工作、加强鲎试剂检测替代方法相关试剂的监管等。

鲎试剂的研究及应用进展

鲎试剂已广泛用于细菌内毒素的检验,本文介绍了鲎试剂的生产、分类,用于细菌内毒素检查的反应原理和检测方法、应用领域以及国内外鲎试剂生产和质量的现状和研究进展,并提出了我国鲎试剂应用中急需解决的问题。

热毒宁注射液中内毒素的快速检测

目的研究一种快速检测热毒宁注射液中内毒素的新方法。方法根据细菌内毒素在溶液中团聚的光散射特征,建立内毒素浓度与团聚粒子平均粒径的线性方程对热毒宁注射液中的内毒素进行检查,并以鲎试剂法作验证。结果经方法学考察,线性关系良好,稳定性、精密度、重复性的相对误差(RSD)均控制在1.0%左右,加样回收率达到100%以上及RSD为3.5%;分别测量3个批次热毒宁注射液的内毒素浓度均值为0.36 EU/m L,经鲎试剂法验证测得为0.39 EU/m L。结论与家兔法和鲎试剂法测定内毒素相比,本法检测热毒宁注射中内毒素快速简便,可满足临床要求。

血液内毒素对哺乳仔猪腹泻的影响

前腔静脉采集试验组(腹泻组)与对照组(不腹泻组)母猪和仔猪血液,用LAL试剂(鲎试剂)测定血液内毒素含量,用分光光度法测定D-乳酸浓度和二胺氧化酶活性。结果表明,试验组母猪血液内毒素含量平均为1.978 EU/m L,比对照组1.007 EU/m L高96.43%,说明母猪体内高含量的内毒素是引起新生仔猪腹泻的原因之一。试验组仔猪血液内毒素含量为1.125 EU/m L,比对照组0.276 EU/m L高307.61%,说明仔猪体内较高含量的内毒素是引起仔猪腹泻的直接原因。试验组仔猪血浆D-乳酸含量达12.33μg/m L,比对照组仔猪血浆D-乳酸含量8.17μg/m L高4.16μg/m L。试验组仔猪血浆二胺氧化酶活性9.12 U/L,比对照组仔猪血浆二胺氧化酶活性5.63 U/L高3.49 U/L,说明腹泻仔猪肠黏膜屏障受到一定程度的破坏。

几种蛇毒与鲎试剂产生凝胶反应的实验研究

目的探讨蛇毒能否与鲎试剂产生凝胶反应,建立中药及有效成分抗蛇毒作用的试验途径。方法采用鲎试剂试管凝胶反应法。结果不同的蛇毒能使鲎试剂产生凝胶反应的浓度不同,眼镜蛇毒与竹叶青蛇毒为5μg/ml,五步蛇毒0.32μg/ml,蝮蛇毒37.5μg/ml,蝰蛇毒2.5μg/ml。结论蛇毒能与鲎试剂产生凝胶反应。

注射用阿奇霉素细菌内毒素检查方法的研究

考察了6批注射用阿奇霉素的细菌内毒素检查法的可行性。按《中国药典》2005年版细菌内毒素检查法。结果可见,浓度为0.2 mg.mL-1的样品稀释液对标示灵敏度为0.25 EU.mL-1的鲎试剂无干扰作用。本品稀释为0.2 mg.mL-1的溶液后,可用灵敏度为0.25 EU.mL-1的鲎试剂进行检测。

显色基质法在盐酸左氧氟沙星注射液热原检测中的应用

目的建立快速的盐酸左氧氟沙星注射液细菌内毒素定量检查法,替代凝胶法。方法使用显色基质鲎试剂对不同批号的盐酸左氧氟沙星注射液分别进行干扰试验,考察确立盐酸左氧氟沙星注射液内毒素定量检查法。结果表明标准曲线的线性相关系数r≥0.98,盐酸左氧氟沙星注射液在1∶32稀释级别无干扰作用。结论显色基质法与凝胶法比较,有灵敏、快速、能定量、重复性好的特点,可用于盐酸左氧氟沙星内毒素含量的测定。

鲎法检测奥硝唑注射液内毒素的增强抑制实验

目的:通过对鲎试剂的灵敏度试验,确定鲎法检测奥硝唑注射液细菌内毒素的可行性。方法:用鲎法对其细菌内毒素进行检测。结果:奥硝唑注射液对鲎试剂凝集没有增强抑制作用,可用标示灵敏度为0.25Eu·ml-1的鲎试剂检测样品的细菌内毒素。结论:该方法灵敏、简便,可用于检测奥硝唑注射液的内毒素。

用鲎试剂检测药品膦甲酸钠中的细菌内毒素

细菌内毒素检测方法的有效性必须能充分证明该方法对反应无增强和抑制作用 ,对整个检测过程无其他干扰。通过一系列实验 ,验证不同浓度的膦甲酸钠溶液对鲎试剂 (LAL)的抑制效果 ,证明该细菌内毒素检测方法对最终产品中细菌内毒素的检测是有效的。

鲎试剂检测减少临床热原反应的试验研究

证实了我国药品标准尚未采用鲎试剂进行细菌内毒素检查的药品葡萄糖氯化钠、硫酸庆大霉素等注射剂容易发生临床输液反应的原因,是各自污染的界于鲎法不合格而兔法合格之间的细菌内毒素,在临床合并用药时加在一达到了兔法不合格的污染量而造成的。

鲎试剂检测自制200批注射剂热原的结果分析

通过使用鲎试剂对青岛医学院附属医院制剂室自制的200批注射剂进行热原检测的结果进行分析,认为鲎试验法操作简便,快速,灵敏度高,结果可靠,故应用鲎试验法检测注射剂热原是非常适宜的。

注射用阿奇霉素磷酸二氢钠细菌内毒素检测方法的研究

目的对注射用阿奇霉素磷酸二氢钠进行凝胶法干扰试验,建立注射用阿奇霉素磷酸二氢钠细菌内毒素检查的试验方法。方法采用中国药典2010年版二部附录收载的细菌内毒素检查方法。结果浓度为0.10mg·m L-1的样品稀释液对标示灵敏度为0.125EU·m L-1的鲎试剂无干扰作用。结论使用细菌内毒素检查法检查注射用阿奇霉素磷酸二氢钠中的细菌内毒素是可行的,可用细菌内毒素检查法代替家兔热原检查法。

鲎试剂检测乌司他丁中细菌内毒素探讨

根据中国药典 2 0 0 0版二部内毒素检查法 ,对不同批号的乌司他丁进行了细菌内毒素检测 ,并与家兔法进行了比较。

动态浊度法定量检测醒脑静注射液中的细菌内毒素

目的:建立动态浊度法测定醒脑静注射液中细菌内毒素含量的方法。方法:依据《中国药典》2020年版四部通则(1143细菌内毒素检查法)中的动态浊度法及其指导原则,分别应用美洲鲎试剂和安度斯鲎试剂,在Pyros Kinetix Flex(PKF)细菌内毒素定量检测系统上,对醒脑静注射液细菌内毒素进行方法开发。通过细菌内毒素标准曲线可靠性试验和干扰预实验确定有效稀释倍数,测定干扰试验的回收率,完成醒脑静注射液细菌内毒素的定量检测。结果:可靠性试验中,LAL标准曲线浓度线性范围为0.001~1.0 EU·mL^(-1)(r=-0.9877),标准曲线的回归方程为:lg T=-0.3123lg C+2.740。TAL标准曲线浓度线性范围为0.01~1.0 EU·mL^(-1)(r=-0.999),标准曲线的回归方程为:lg T=-0.270lg C+2.830。供试品在稀释比例1∶20及以下浓度时对鲎试剂反应无干扰作用;3批供试品的内毒素定量检测结果均低于供试品规定限值。结论:应用Pyros Kinetix Flex(PKF)细菌内毒素定量检测系统,动态浊度法可用于醒脑静注射液细菌内毒素含量的定量检测。

组分百日咳抗原中间品中内毒素含量动态显色定量检测方法的建立及验证

目的 建立组分百日咳抗原中间品中内毒素含量的动态显色定量检测方法,并对方法进行验证,以期更好地对组分百白破疫苗进行质量控制。方法 建立动态显色法(美洲鲎试剂)检测百日咳各抗原中间品脱毒后的内毒素含量,对方法的线性、专属性、准确性、重复性、中间精密度进行验证,并对动态显色法定量检测结果与凝胶法检测结果进行对比。结果 动态显色法线性相关系数的绝对值(|r|)大于0.99;最大有效稀释倍数下中间品的干扰试验回收率在50%~200%之间,脱毒后百日咳类毒素(pertussis toxin,PT)稀释至10、100、1 000倍,丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)稀释至3 000、5 000、10 000倍,百日咳黏附素(pertussis adhesin,PRN)稀释至50、75、100倍对试验均无干扰作用;PT、FHA和PRN的准确性验证回收率分别为125%、110%和99%,重复性验证变异系数(CV)分别为7.21%、8.31%和5.84%,中间精密度验证CV分别为6.04%、16.29%和12.23%。动态显色法检测3批百日咳抗原中间品细菌内毒素含量与凝胶法检测结果一致,均小于脱毒后百日咳抗原中间品中细菌内毒素限值。结论 建立的动态显色法具有良好的线性、专属性、准确性及精密性,检测结果准确,可用于脱毒后组分百日咳抗原中间品中内毒素含量的检测。

动态显色法定量检测磺达肝癸钠注射液中的细菌内毒素

目的:建立动态显色法测定磺达肝癸钠注射液中细菌内毒素含量。方法:依据2020年版《中华人民共和国药典》(通则1143细菌内毒素检查法)的要求,应用Pyros Kinetix^(■)Flex(PKF)细菌内毒素定量检测系统,使用动态显色法鲎试剂,建立细菌内毒素标准曲线,通过干扰预试验确定稀释倍数,测定供试品溶液中外加内毒素的回收率进行干扰试验,完成供试品中细菌内毒素含量的定量检测试验。Pyros^(■)EQS软件自动绘制并出具标准曲线,计算溶液中内毒素的绝对含量,生成报告储存在Oracle数据库中。结果:标准曲线的线性范围为0.001~0.125 EU·mL^(-1)(r=-0.9991),回归方程为lgT=-0.2658 lgC+2.818,供试品在稀释5000、10000、15000、16500倍时均对反应无干扰作用,细菌内毒素回收率在50%~200%范围内,4批供试品的内毒素定量检测结果均符合规定。结论:在Pyros Kinetix^(■)Flex(PKF)细菌内毒素定量检测系统平台,本法可用于磺达肝癸钠注射液中细菌内毒素含量的测定,可定量检测供试品中内毒素的含量。

鲎试剂法测定毕格犬血清中香菇多糖的含量

目的:对鲎试剂显色基质法测定毕格犬血清中香菇多糖含量的方法进行探讨。方法:香菇多糖、鲎试剂、鲎三肽在一定的条件下反应释放出对硝基苯胺(PNA),溶液呈现黄色,再加入显色剂,呈现玫瑰红色,于550nm波长处比色测定吸光度,其与香菇多糖浓度呈线性关系,从而定量测定出香菇多糖的含量。结果:香菇多糖浓度在5～200ng.mL-1范围内线性关系良好,相关系数0.9922;最低定量检测限为5ng.mL-1;低、中、高3种浓度的日内精密度分别为15.4%,9.8%,4.6%;日间精密度分别为14.3%,9.3%,5.9%;相对回收率为(99.1±9.8)%;绝对回收率为(99.0±4.7)%;血清样品在4℃和-20℃放置条件下7d内稳定性良好。结论:鲎试剂显色基质法具有灵敏度高,准确、快速,重复性好,经济实用等特点,可用于毕格犬血清中香菇多糖含量的测定。

鲎试验和家兔法测定干扰素和白蛋白中内毒素的比较

本文分别用鲎试验和家兔热原法对16批人白细胞干扰素及5批人血浆白蛋白中的内毒素进行了检测。两种方法检测人白细胞干扰素和人血浆白蛋白的符合率分别为81.75%和80%;阴性符合率为100%。

动态浊度法定量检测乳糖一水合物中细菌内毒素的含量

目的:应用美洲鲎试剂(Limulus Amebocyte Lysate,LAL)的动态浊度法,定量检测乳糖一水合物中细菌内毒素。方法:依据2015年版《中华人民共和国药典》<1143细菌内毒素检查法>的要求,应用Pyros Kinetix■Flex(PKF)细菌内毒素定量检测系统,使用葡聚糖抑制缓冲液稀释溶解LAL,建立细菌内毒素的标准曲线并确定稀释倍数,通过测定供试品溶液中外加内毒素的回收率进行干扰试验,并定量测定样品中的细菌内毒素含量。Pyros■EQS软件自动绘制并出具标准曲线,计算溶液中内毒素的绝对含量。结果:内毒素检测标准曲线浓度线性范围为0.001~0.032 EU·mL^-1(r=-0.9854),标准曲线回归方程为logT=-0.200logC+2.943;供试品在稀释100、300、500倍时均对试验无干扰作用,细菌内毒素回收率在50%~200%之间;4批样品的内毒素定量测定结果符合规定。结论:在Pyros Kinetix?Flex(PKF)细菌内毒素定量检测系统平台,使用LAL建立的动态浊度法,可用于乳糖一水合物的细菌内毒素定量检测。LAL有更高的灵敏度,葡聚糖抑制缓冲液可有效阻止由(1→3)-β-D-葡聚糖引起的干扰,提高试验的成功率,符合数据完整性的要求。

奥拉西坦注射液细菌内毒素检测方法的研究

目的对奥拉西坦注射液进行凝胶法干扰试验,建立奥拉西坦注射液细菌内毒素检查的试验方法。方法采用《中国药典》2010年版二部附录收载的细菌内毒素检查方法。结果浓度为12.5mg/mL的样品稀释液对标示灵敏度为0.25EU/mL的鲎试剂无干扰作用。结论使用细菌内毒素检查法检查奥拉西坦注射液中的细菌内毒素是可行的,可用细菌内毒素检查法代替家兔热原检查法。