LAMP法在牛早期胚胎性别鉴定中的应用

对LAMP试剂盒的准确性、特异性和灵敏度进行鉴定,同时对11枚体外胚胎和38枚体内胚胎进行性别鉴定。结果表明:血样DNA的鉴定结果与实际性别吻合;LAMP试剂盒的灵敏度很高,且只对牛有特异性;对胚胎样品的鉴定结果与实际性别吻合。

应用PCR法和LAMP法鉴定牛早期胚胎性别的研究

通过设计特异性引物,优化Mg2+浓度、退火温度和循环时间等影响PCR的因素,确定了适合现场应用的PCR反应体系;46枚胚胎现场的鉴定率为87%,移植妊娠率为28%,准确率为85%,证明建立的PCR胚胎性别鉴定方法可用于生产。使用LAMP法对126枚常规胚胎和42枚性控胚胎现场鉴定,鉴定率95%,移植妊娠率33%,准确率88%,结果证明该方法可应用于牛早期胚胎性别鉴定。PCR法和LAMP法所鉴定同一样品的结果一致,说明在控制好实验条件的情况下,根据实际情况可选用这两种方法中的任何一种进行性别鉴定应用。

LAMP法鉴定奶牛早期胚胎性别的效果研究

本试验利用Lamp法对28枚鲜胚进行了性别鉴定,将其中13枚雌性胚和3枚雄性胚胎给受体牛移植,妊娠率达45.5%,性别鉴定的准确率为100%。说明Lamp法用于奶牛早期胚胎性别鉴定是切实可行的。

简便快速的胚胎性别鉴定方法-LAMP法

胚胎性别鉴定技术是家畜胚胎生物工程新技术,也是人为控制家畜后代性别的重要途径.胚胎性别鉴定技术的研究已有几十年的历史,前期的研究主要采用非分子生物学方法,如细胞学方法、免疫学方法、X-相关酶法等.

应用LAMP法鉴定牛早期胚胎性别试验

使用LAMP法对12枚牛体外受精胚胎的基因扩增,通过使用不同的引物,对牛胚胎中的雄性特异性核酸序列和雌雄共有的核酸序列进行扩增,鉴定胚胎的性别,结果7枚为雌性,5枚雄性。

LAMP法性别鉴定在胚胎工程技术中的应用

LAMP法特点是对目标基因6个区段设定4种引物,利用链置反应在等温条件下,使其发生反应。把基因检样、引物链置换型DNA聚合酶基质等放在一定温度条件(63～65℃)下保温。有无扩增反应是通过反应过程中获得的副产物焦磷酸镁所形成的白色沉淀的浑浊度来判定。应用LAMP法性别鉴定体内鲜胚移植291头,妊娠158头妊娠率为54.30%,其中公犊3头,母犊155头,鉴定准确率98.10%;鉴定体内冻胚移植47头,产犊17头,妊娠率为36.17%,母犊17头,鉴定准确率100%。鲜胚妊娠率高于冻胚,两者之间差异极显著(P<0.01),应用LAMP法性别鉴定平均准确率98.29%。

LAMP法在水牛早期胚胎性别鉴定中的应用

【目的】建立LAMP法快速鉴定水牛早期胚胎性别体系,为预知性别水牛胚胎移植奠定基础。【方法】分别采用化学裂解法和非化学裂解法提取水牛早期胚胎DNA,对比不同方法对G3PDH基因扩增效果的影响;基于水牛SRY基因和12S r RNA基因分别设计雄性特异性引物及雌、雄性共用引物用于LAMP法胚胎性别鉴定,同时以PCR对LAMP法鉴定结果进行验证。【结果】化学裂解法对水牛早期胚胎DNA具有良好的裂解效果,其有效检出率为94.1%。优化的LAMP法对水牛早期胚胎性别鉴定的准确率与检出率均为100.0%,检测灵敏度为2×10-5 ng。LAMP扩增产物中加入1%SYBR green I,于紫外光下观察,阳性呈绿色,阴性呈淡黄色;自然光下观察,阳性呈黄色,阴性呈橙色。以LAMP法对37枚水牛IVF早期胚胎性别进行鉴定,其中雄性为28枚,雌性为9枚。PCR验证结果与LAMP法鉴定结果一致。【结论】用化学裂解法提取水牛早期胚胎DNA,再根据水牛SRY基因及12S r RNA基因设计引物进行LAMP法水牛胚胎性别鉴定切实可行。

LAMP法鉴定胚胎性别在生产中的应用

家畜的性别控制(Sex Control)目前主要从两方面进行研究,一方面是分离X与Y精子,以此决定受精时后代的性别;另一方面是通过鉴定胚胎的性别,以控制出生后代的性别比.性别控制一直是生物科学研究领域一项重要课题,对畜牧业生产有着非常重要的意义,它可以按照生产需求控制家畜性别,以提高畜牧业生产的经济效益.

非电泳法PCR牛早期胚胎性别鉴定研究

为选出更高效、实用的牛胚胎性别鉴定方法 ,分别用成年牛血样提取的基因组DNA和冷冻的牛早期胚胎细胞DNA为样本 ,以电泳法和非电泳法用相应的性染色体DNA引物做胚胎PCR性别鉴定实验 ,以相对比。血液模板DNA结果与胚胎样本结果都表明 ,使用DYZ - 1引物的非电泳法在比使用SE引物的电泳节约 1h以上时间的同时 ,具有比SE更高的灵敏度。这次研究在我国首次成功地把非电泳PCR法应用到牛胚胎性别鉴定之中 ,减少了胚胎性别鉴定的操作步骤 ,并大大缩短了性别鉴定所需要的时间 ,从而使胚胎移植现场性别鉴定更加可行。

PCR法进行胚胎性别鉴定的研究进展

通过胚胎性别鉴定,可控制家畜后代性别比例,获得巨大经济效益。早期胚胎性别鉴定的方法有,核型分析法,H-Y抗原法,X-连接酶检测法和PCR扩增法等。PCR法因其简单、快速、准确等优点,成为目前比较理想的胚胎性别鉴定方法。笔者对性别决定基因、PCR法胚胎性别鉴定的几个关键环节进行了综述,并对其前景进行了展望。

LAMP法鸟类性别鉴定的研究与应用

本研究利用鸡W染色体中EE0.6序列上的Eco R片段为靶序列,进行引物设计,建立了基于LAMP法的快速鸟类性别鉴定方法。试验表明,该引物可用于多属种鸟类的性别鉴定,在64℃条件下,60 min即可完成检测。同时利用实时浊度法和荧光目视法两种LAMP检测法对体系进行了敏感性试验,并与PCR方法进行比较,实时浊度法与荧光目视法敏感性相近,是PCR方法的100倍。方法建立后,在大连老虎滩鸟语林进行了11目14科35种鸟类的性别鉴定临床试验,符合率为100%。

常规PCR和巢式PCR法鉴定牛早期胚胎性别体系的建立和优化

试验利用牛Y染色体重复序列作为雄性特异性引物,以肿瘤坏死因子(TNFα)为内标引物建立多重PCR和多重巢式PCR体系,进行牛早期胚胎性别鉴定。共设计4对引物—Y染色体重复序列外引物和内引物,其扩增片段大小分别为534bp和480bp,肿瘤坏死因子外引物和内引物,扩增片段大小分别为357bp和272bp。结果表明,4对引物均有很高的特异性和稳定性;多重PCR体系灵敏度为50pg(约8个细胞),多重巢式PCR体系灵敏度为10pg(约2个细胞),故多重巢式PCR体系更适合于牛胚胎性别鉴定。

家畜早期胚胎性别鉴定方法综述

家畜早期胚胎的性别鉴定在动物生产实际中具有重要意义。随着科学技术的不断进步,动物早期性别鉴定方法也在不断发展,目前已研究出了许多家畜早期胚胎性别鉴定方法。本文主要对家畜性别决定机理、早期胚胎性别鉴定常见的方法做一综述,特别对生产实用的PCR法及非电泳PCR法做一介绍,旨在为相关人员提供参考。

OPS法冷冻小鼠胚胎的双重套式PCR性别鉴定

本实验利用双重套式PCR扩增小鼠SRY、ZFX基因序列对OPS冷冻胚胎进行性别鉴定。同一胚胎 4份平行样品性别检验结果均一致则胚胎鉴定准确 ,否则鉴定失败。共检测 6 0枚桑椹胚 ,雄性一致有 35枚 ,雌性一致有 2 3枚 ,鉴定失败有两枚 ,可鉴定率为 96 .7% (5 8/ 6 0 )。

两种鉴定奶牛胚胎性别方法的比较

用LAMP法和PCR法对牛白细胞及奶牛鲜胚进行系统的性别鉴定比较。发现两种方法相同点是:灵敏度及准确性几乎相当,且都出现了一定数量未检出的样品;不同点是:LAMP法检出时间为1h,而PCR法为2h,LAMP法检出使用成本比PCR法高5～10倍,并且操作条件比PCR法要苛刻得多。

用 H-抗原方法鉴定小鼠胚胎性别的研究

本试验选用纯系 C_(57)BL/6小鼠,将雄鼠脾细胞悬液经腹腔注射免疫同基因型雌鼠。加强免疫后,常规尾静脉采血制备抗 H-Y 抗血清。采用精子微量细胞毒试验和酶联免疫法(ELISA)2种方法进行抗血清检测。将特异性和效价均较好的抗H-Y 抗血清用于间接免疫荧光法鉴定小鼠胚胎性别。共鉴定桑椹胚和早期囊胚462枚,呈荧光阳性(雄性)的占47%(219/462);呈荧光阴性(雌性)的占53%(243/462),经 X^2检验,符合正常性比例(1:1,P>0.05)。将这2类胚胎分别移植给假孕受体进行验证,并对验证结果进行分析。

家畜胚胎性别鉴定方法研究进展

前言 家畜胚胎性别鉴定的目的在于在胎儿出生前就确定其性别,以便通过人工方法控制出生后的雌雄比例,就畜牧生产而言,理想的性比例起码有以下几点重要意义:(1)使受性别限制的生产性状(如泌乳性状)和受性别影响的生产性状(如肉用性状,毛用性状等)能获得更大的效益,(2)增强选种中的选择强度,以获得最大的遗传进展,(3)排除畜群中有害的基因或基因型。

家畜胚胎性别鉴定技术的研究进展

性别控制是按照人们的意愿生产特定性别后代的动物繁殖新技术。早期胚胎性别鉴定是人们实现性别控制的重要途径。随着科学技术的发展和各种新的研究工具在性别鉴定中的应用,尤其是聚合酶链式反应(PCR)技术的应用,性别鉴定在生产实践中的应用越来越广泛。本文综述了胚胎性别鉴定方法的基本原理和研究概况,并阐述了该技术存在的问题和发展前景。

PCR法鉴别牛早期胚胎性别的研究进展

对PCR法鉴别动物胚胎性别的机理进行了分析,综述了近10年来相关操作技术的进展,包括早期胚胎取样、胚胎细胞DNA的提取、引物的设计、扩增条件的优化、扩增产物的检测和性控胚胎的冷冻等,并提出PCR法鉴别牛早期胚胎性别的前景与展望。