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荷斯坦奶牛乳腺LAP基因的克隆与序列分析
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作者 程兰玲 曹贵方 +2 位作者 赵鹏伟 凃勇 包图雅 《湖南农业科学》 2012年第3期132-135,共4页
为了研究奶牛乳腺防御素基因的表达调控机制,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出LAP基因的核心片段序列,并与NCBI数据库序列比对同源性;进一步扩增其DNA序列中间片段;其后运用反向PCR技术并结合半巢式PCR技术扩增其侧翼的序列。... 为了研究奶牛乳腺防御素基因的表达调控机制,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出LAP基因的核心片段序列,并与NCBI数据库序列比对同源性;进一步扩增其DNA序列中间片段;其后运用反向PCR技术并结合半巢式PCR技术扩增其侧翼的序列。结果表明:序列与NCBI数据库中序列同源性为100%,确认为LAP基因;DNA序列扩增得到1 760 bp的中间序列,并预测了其酶切位点;得到5'侧翼序列107 bp,3'侧翼序列87 bp,经预测发现有转录因子GATA。为进一步研究防御素的防御功能、寻找防御素基因体外表达调控机制以及利用基因工程防治奶牛乳腺炎积累了基本资料。 展开更多
关键词 荷斯坦奶牛 乳腺炎 舌抗菌肽(lap)基因 反向PCR 防御素
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奶牛LAP基因真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的瞬时表达 被引量:1
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作者 曹随忠 袁曦 +2 位作者 栾红雨 余树民 刘宗平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期521-524,共4页
根据GenBank上发表的牛舌抗菌肽(Lingual antimicrobial peptide,LAP)基因cDNA序列设计1对特异引物,从患乳腺炎的奶牛乳腺组织中以RT-PCR方法扩增LAP基因片段,将其克隆到pMD19-T Simple载体中测序。重组质粒经EcoRⅠ+BamHⅠ双酶切回收... 根据GenBank上发表的牛舌抗菌肽(Lingual antimicrobial peptide,LAP)基因cDNA序列设计1对特异引物,从患乳腺炎的奶牛乳腺组织中以RT-PCR方法扩增LAP基因片段,将其克隆到pMD19-T Simple载体中测序。重组质粒经EcoRⅠ+BamHⅠ双酶切回收目的基因片段,亚克隆入增强型绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1中构建重组融合表达质粒pEGFP-LAP,将其脂质体转染COS-7细胞,经荧光显微镜观察到融合表达的绿色荧光蛋白,采用RT-PCR检测到LAP基因在COS-7细胞中转录。pEGFP-LAP重组表达质粒的成功构建为进一步研究奶牛LAP基因的表达特性及利用基因工程技术防治奶牛乳腺炎奠定了基础。 展开更多
关键词 奶牛 Β-防御素 lap基因 绿色荧光蛋白 真核表达
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牛LAP3基因内含子12和外显子13单核苷酸多态性
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作者 郑雪 鞠志花 +4 位作者 李荣岭 李秋玲 张爱武 仲跻峰 王长法 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2010年第5期74-79,共6页
采用单链构象多态性(single-strand conformation polymorphism,SSCP)、创造酶切位点PCR(createdrestriction site-PCR,CRS-PCR)、限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)以及直接测序方法,研究中国荷斯... 采用单链构象多态性(single-strand conformation polymorphism,SSCP)、创造酶切位点PCR(createdrestriction site-PCR,CRS-PCR)、限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)以及直接测序方法,研究中国荷斯坦牛、鲁西黄牛和渤海黑牛LAP3基因第12内含子和第13外显子的单核苷酸多态性(SNP)。共检测到5个SNP,分别为24 794(T/G)、24 803(T/C)、24 846(T/C)、24 564(G/A)和25 415(T/C),其中24 564(G/A)为首次报道的位点。经PCR-SSCP结合测序图谱发现24 794(T/G)、24 803(T/C)、24 846(T/C)位点完全连锁,但该连锁位点在鲁西黄牛群体中未检测到。5个SNP位点在中国荷斯坦牛、鲁西黄牛和渤海黑牛群体的优势等位基因相同,分别是T、T、T、G、T,其等位基因频率分别是T(CH0.579/LY 1/BB 0.722)、T(CH0.579/LY1/BB 0.722)、T(CH0.579/LY1/BB 0.722)、G(CH0.584/LY0.775/BB 0.500)和T(CH0.596/LY 0.796/BB 0.750),多态信息含量均在0.25至0.5之间,属于中度多态。 展开更多
关键词 lap3基因 单核苷酸多态性 单链构象多态性 优势等位基因
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华支睾吸虫LAP2基因的生物信息学分析及克隆表达、组织定位
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作者 邓传欢 余新炳 +5 位作者 王乐旬 黄灿 黄艳 李文芳 李然 徐劲 《热带医学杂志》 CAS 2011年第5期491-495,508,共6页
目的利用生物信息学方法分析华支睾吸虫LAP2全长基因的结构和功能,并将该基因克隆至原核表达载体进行表达、纯化,为进一步研究LAP2功能奠定基础。方法利用生物信息学相关软件,分析华支睾吸虫LAP2基因及其蛋白的结构、生物学和免疫学功... 目的利用生物信息学方法分析华支睾吸虫LAP2全长基因的结构和功能,并将该基因克隆至原核表达载体进行表达、纯化,为进一步研究LAP2功能奠定基础。方法利用生物信息学相关软件,分析华支睾吸虫LAP2基因及其蛋白的结构、生物学和免疫学功能特征。针对LAP2的EST序列的编码区设计引物,从华支睾吸虫囊蚴cDNA质粒中扩增目的基因,克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,经PCR、双酶切及DNA测序鉴定的阳性克隆诱导目的蛋白表达、亲和层析纯化、免疫印迹鉴定及组化定位。结果华支睾吸虫LAP2基因全长为1761bp,其编码序列长度为1662bp,编码553个氨基酸,理论分子量是59696.5Da,与人的该基因氨基酸序列相似性为26.7%,一致性仅为15.4%。该基因在大肠杆菌中可被高效表达,纯化的重组蛋白能被感染华支睾吸虫的大鼠血清识别,免疫组化结果表明该重组蛋白定位于华支睾吸虫成虫的肠支及表膜。结论华支睾吸虫LAP2在大肠杆菌中呈高效的可溶性表达,具有良好的抗原活性,可能为华支睾吸虫成虫分泌排泄抗原的组份之一。 展开更多
关键词 华支睾吸虫 lap2基因 生物信息学 克隆 表达
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Dynamic expression of the LAP family of genes during early development of Xenopus tropicalis 被引量:3
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作者 YANG QiuTan LV XiaoYan +3 位作者 KONG QingHua LI ChaoCui ZHOU Qin MAO BingYu 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2011年第10期897-903,共7页
The leucine-rich repeats and PDZ (LAP) family of genes are crucial for the maintenance of cell polarity as well as for epithelial homeostasis and tumor suppression in both vertebrates and invertebrates.Four members of... The leucine-rich repeats and PDZ (LAP) family of genes are crucial for the maintenance of cell polarity as well as for epithelial homeostasis and tumor suppression in both vertebrates and invertebrates.Four members of this gene family are known:densin,erbin,scribble and lano.Here,we identified the four members of the LAP gene family in Xenopus tropicalis and studied their expression patterns during embryonic development.The Xenopus LAP proteins show a conserved domain structure that is similar to their homologs in other vertebrates.In Xenopus embryos,these genes were detected in animal cap cells at the early gastrula stage.At later stages of development,they were widely expressed in epithelial tissues that are highly polar in nature,including the neural epithelia,optic and otic vesicles,and in the pronephros.These data suggest that the roles of the Xenopus LAP genes in the control of cell polarity and morphogenesis are conserved during early development.Erbin and lano show similar expression patterns in the developing head,suggesting potential functional interactions between the two molecules in vivo. 展开更多
关键词 Xenopus tropicalis lap gene family Densin ERBIN Scrib Lano expression pattern
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