miR-518b靶向调控LAPTM4B在稽留流产发病中的作用

目的:探讨miR-518b在稽留流产发病中的作用。方法:①利用双荧光素酶报告实验验证miR-518b与LAPTM4B的靶向关系。②HTR8/SVneo细胞分别转染miR-518b mimic及其阴性对照(NC)质粒,24 h后实时荧光定量PCR法及Western blot法检测细胞中miR-518b、LAPTM4B mRNA及蛋白的表达。③HTR8/SVneo细胞分别转染miR-518b mimic NC、miR-518b mimic和miR-518b mimic+LAPTM4B过表达质粒24 h后,与人脐静脉血管内皮细胞混合,行成管实验。④收集22例稽留流产患者及24例同期正常妊娠并自愿行人工流产者(对照组)的绒毛组织,实时荧光定量PCR法检测miR-518b、LAPTM4B mRNA,免疫组化法检测微血管密度(MVD),Western blot法检测LAPTM4B蛋白的表达。结果:①双荧光素酶报告实验证实miR-518b与LAPTM4B存在靶向关系。②与miR-518b mimic NC组比较,miR-518b mimic组细胞中LAPTM4B蛋白和mRNA表达水平均下降(P<0.05)。③miR-518b mimic NC组、miR-518b mimic组及miR-518b mimic+LAPTM4B过表达质粒组新生小管数分别为(31.00±1.00)、(16.33±2.08)、(32.67±2.08),3组比较,差异有统计学意义(P<0.001);miR-518b mimic组小于NC组和miR-518b mimic+LAPTM4B过表达质粒组(P<0.05)。④稽留流产组绒毛组织中miR-518b表达高于对照组,LAPTM4B mRNA、蛋白表达水平及MVD均低于对照组(P<0.05)。稽留流产组miR-518b与LAPTM4B mRNA的表达、MVD呈负相关(r=-0.546,-0.439,P<0.001);LAPTM4B蛋白表达与MVD呈正相关(r=0.686,P<0.001)。结论:miR-518b可能通过调控LAPTM4B的表达,抑制绒毛滋养层细胞血管成管能力,参与稽留流产的发病。

人肝癌相关新基因编码产物LAPTM4B的鉴定及其生物学特性

目的 :鉴定由肝细胞癌 (HCC)相关新基因LAPTM 4B编码的蛋白质并研究其生物学特性。方法 :以Westernblot、免疫组化及双向电泳鉴定新基因的表达产物 ;以免疫共沉淀等方法研究分子间的相互作用。结果 :LAPTM4B基因编码相对分子质量分别为 35× 10 3 和 2 4× 10 3 、等电点分别为 9.0 7和 4 .6 5的两种异型分子。它们在肝癌组织及肝癌细胞系的表达显著上调 ,而相对分子质量为 35× 10 3 者尤为明显 ,并与细胞分化程度相关。LAPTM4B蛋白可与整合素α 6亚单位及表皮生长因子 (EGF)受体形成信号复合物。结论 :LAPTM4B 35蛋白在人肝癌组织及细胞系过表达 ,并可能通过与细胞表面的整合素受体及EGF受体形成复合物而参与细胞外基质成分所启动的信号转导。

肝癌中高表达的新基因LAPTM4B对细胞增殖及成瘤性的影响

目的 :研究在肝细胞癌中高表达的新基因LAPTM4B对小鼠NIH3T3细胞生物学行为的影响 ,探讨LAPTM4B基因的生物学功能。方法 :构建真核表达质粒 pcDNA3 TM 4B ,利用脂质体稳定转染LAPTM 4BcDNA至NIH3T3细胞中 ,用RT -PCR、Northern和Western杂交法筛选和鉴定转染后LAPTM4B基因高表达的单克隆细胞株 ,研究其与细胞增殖相关的生物学特征的变化。结果 :与转染空载体的对照组相比 ,转染了LAPTM4BcDNA的NIH3T3细胞表面发生明显变化 ,微绒毛的数量和长度增加 ,多分枝且缠绕成团。转染细胞在纤黏连蛋白、人工基膜和层黏连蛋白基质上的黏附 /铺展能力增强。生长曲线显示转染细胞的生长速率增高。流式细胞仪检测显示转染细胞的S期细胞数比未转染细胞显著增多 ,而G0 ～G1期细胞数减少。Western杂交显示CyclinE蛋白在转染细胞中的表达显著增加。转染细胞对血清的依赖性下降并具有成瘤性。结论 :LAPTM 4B基因能影响细胞增殖的调节 ,促进NIH3T3细胞的增殖 ,并使NIH3T3细胞具有成瘤性 ,在肿瘤发生过程中具有重要的作用。

LAPTM4B在胶质瘤组织中表达及对细胞增殖和侵袭力的影响

目的检测胶质瘤组织中溶酶体相关4次跨膜蛋白B(lysosome-associated protein transmembrane-4 beta,LAPTM4B)蛋白表达,探讨其对细胞增殖和侵袭力的影响以及与患者预后的相关性。方法选取2011年6月至2015年6月在新乡市中心医院行手术切除的胶质瘤患者86例,术后随访,随访截止时间2018年6月30日。选取同期正常脑组织25例,免疫组化(SP法)检测胶质瘤和正常脑组织中LAPTM4B蛋白表达,生存分析采用Kaplan-Meier法和Log-Rank检验,影响患者预后的风险因素分析采用Cox比例风险模型分析,培养U251细胞并分为siRNA-LAPTM4B组、siRNA-NC组和空白组,实时荧光定量PCR技术检测细胞中LAPTM4B表达,MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwell法检测细胞迁移和侵袭力,Western blot检测细胞中LAPTM4B、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果LAPTM4B蛋白在胶质瘤组织中的阳性表达率为77.91%,高于正常脑组织中的28.00%(P<0.001);LAPTM4B蛋白阳性表达率在不同WHO分级差异有统计学意义(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析结果显示,LAPTM4B蛋白阳性表达组患者中位生存时间和累积生存率低于LAPTM4B蛋白阴性表达组(P=0.002);Cox比例风险模型分析结果显示,WHO分级和LAPTM4B蛋白表达是影响胶质瘤患者预后的风险因素(P<0.05);与siRNA-NC组和空白组比较,siRNA-LAPTM4B组细胞中LAPTM4B mRNA和蛋白相对表达量降低(P<0.05),24、48、72、96 h时光密度值及细胞克隆数、迁移细胞数、侵袭细胞数、N-cadherin和Vimentin蛋白表达量均降低,而E-cadherin蛋白表达量升高(P<0.05)。结论LAPTM4B蛋白在胶质瘤组织中高表达,促进细胞增殖和侵袭,其机制可能与上皮-间质转化有关。LAPTM4B蛋白表达高低与胶质瘤患者生存有关。

基于高分辨率CT图像特征及纹理参数分析肺腺癌TRIM28、LAPTM4B表达的危险因素

目的:探讨肺腺癌高分辨率CT图像特征及纹理参数与三结构域蛋白28(TRIM28)、溶酶体相关4次跨膜蛋白B(LAPTM4B)表达的相关性。方法:纳入行手术治疗的182例肺腺癌患者作为研究对象,术中取患者的肺腺癌组织和癌旁正常组织。患者行胸部CT检查,记录肿瘤大小、肿瘤边界、有无分叶征、毛刺征、血管集束征、胸膜牵拉征、空气支气管征及空泡征和CT纹理参数,包括偏度、平均值、熵值、能量、峰度、均质性和自相关。肺腺癌组织和癌旁正常组织中的TRIM28和LAPTM4B表达水平应用免疫组织化学法进行检测。结果:TRIM28高表达者中出现肿瘤边界不规整、分叶征、毛刺征和胸膜牵拉征的比例(分别为67.0%、62.5%、70.5%、69.3%)显著高于低表达者(分别为50.0%、44.7%、53.2%、44.7%),差异均有统计学意义(P值均<0.05);TRIM28高表达者CT纹理参数中的峰度(17.52±2.56)显著高于低表达者(8.76±1.74),而均质性(0.14±0.02)显著低于低表达者(0.18±0.03),差异均有统计学意义(P值均<0.05)。LAPTM4B高表达者中出现分叶征、毛刺征、血管集束征和空气支气管征的比例(分别为66.7%、72.2%、64.4%、63.3%)显著高于低表达者(分别为40.2%、51.1%、45.7%、44.6%),差异均有统计学意义(P值均<0.05);LAPTM4B高表达者CT纹理参数中的的峰度(18.48±2.77)和熵值(3.20±0.37)与低表达者(分别为8.36±1.88、2.61±0.30)相比显著升高,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。对单因素分析中有统计学意义的因素进行多因素Logistic回归分析,结果显示肿块边界不光整、分叶征、峰度升高及均质性降低是TRIM28高表达的独立危险因素(P值均<0.05),分叶征、血管集束征、峰度和熵值升高是LAPTM4B高表达的独立危险因素(P值均<0.05)。结论:高分辨率CT图像特征及纹理参数与肺腺癌TRIM28和LAPTM4B蛋白表达水平有关,有助于预测疾病预后及制定临床治疗方案。

LAPTM4B基因多态性与肺癌易感性的关系

目的:探讨溶酶体相关4次跨膜蛋白质β(lysosome-associated protein transmembrane4 beta,LAPTM4B)基因多态性与肺癌易感性的关系.方法:以病例-对照研究的方法,用基于特异性引物的PCR对134例正常人和162例肺癌患者进行LAPTM4B基因分型,将卡方检验用于检测肺癌组和对照组基因型频率和其它参数的分布.结果:LAPTM4B的*2等位基因频率在肺癌组中为40.1%,较对照组(28.0%)显著增高(P=0.002).基因型分布在肺癌组和对照组间差异有统计学意义.*1/2和*2/2基因携带者患肺癌的危险性分别是*1/1的1.91倍(95%CI:1.178～3.110)与3.26倍(95%CI:1.338～7.929).LAPTM4B基因型分布与患者年龄,肺癌的病理类型,分化程度,临床分期以及HBV感染等无明显关系.结论:LAPTM4B基因多态性与肺癌易感性相关,* 2等位基因可能是肺癌发生的危险因素.

LAPTM4B新基因在肿瘤细胞中的表达及其免疫学检测技术的建立

目的利用制备的鼠抗人肝癌相关LAPTM4B蛋白的单克隆抗体,检测LAPTM4B蛋白在不同肿瘤细胞中的表达。方法重组质粒pGEX-KG-LAPTM4B-N1-99经酶切及测序鉴定正确后,1 mmol/L IPTG 37℃诱导获得融合蛋白。利用亲和层析方法纯化抗人LAPTM4B单抗,免疫印迹法进行单抗鉴定,免疫细胞化学染色法检测5种肿瘤细胞中LAPTM4B的表达。结果经western b lot分析抗LAPTM4B单抗可与LAPTM4B-N1-99编码的融合蛋白以及肿瘤细胞中的天然蛋白特异性结合。免疫细胞化学染色(IHC)检测到肝癌、肺癌等5种肿瘤细胞均表达LAPTM4B蛋白。IHC和免疫印迹分析证明了LAPTM4B蛋白在肿瘤细胞中的表达。结论该单抗能特异识别原核及真核细胞表达的LAPTM4B蛋白,为进一步探讨LAPTM4B蛋白的生物学效应提供了条件。

LAPTM4B启动子荧光素酶报告基因重组体的构建

目的:LAPTM4B基因是肝癌中高度表达的新基因。为下一步LAPTM4B启动子的活性分性,本文构建了LAPTM4B基因启动子调控的报告基因重组表达质粒。方法:以LAPTM4B基因组cDNA为模板扩增翻译起始位点上游DNA序列。PCR产物定向克隆到含荧光素酶报告基因的载体pGL3-Basic中,并经限制性内切酶消化鉴定。结果:通过酶切鉴定和基因测序,证明成功地构建了三种不同长度的pGL3-LAPTM4B-Luc荧光素酶表达质粒,形成了系列的LAPTM4B启动子重组体。结论:充分利用生物信息学资源,利用已知基因的启动子序列,可快速,准确地克隆已知基因启动子序列并构建启动子载体。LAPTM4B启动子荧光素酶报告基因重组体的构建为LAPTM4B启动子的活性分析奠定了基础。

人LAPTM4B新基因多态性与淋巴瘤易感性的关系

目的探讨人新基因溶酶体相关4次跨膜蛋白质B(lysosome-associated protein transmembrane 4 beta,LAPTM4B)多态性与淋巴瘤易感性的关系。方法以病例-对照研究的方法,基于特异性引物的PCR对350例正常人和166例胃癌患者进行LAPTM4B基因分型,用χ2检验检测淋巴瘤组和对照组基因型频率和其他参数的分布。结果淋巴瘤组中LAPTM4B基因的*2等位基因的频率为34.94%,较对照组(24.14%)显著增高(P<0.001)。基因型分布在淋巴瘤组与对照组间差异有统计学意义。*1/2和*2/2基因携带者患淋巴瘤的危险性分别是*1/1的1.475倍(95%CI:0.994-2.189)与3.532倍(95%CI:1.802-6.923)。*2等位基因携带者患淋巴瘤的危险性是*1等位基因的1.710倍(95%CI:1.287-2.271)。LAPTM4B基因型分布与患者年龄、性别、病理类型、临床分期、HBV感染、乳酸脱氢酶(LDH)、β2-微球蛋白(β2-MG)以及有无全身症状等参数无明显关系。结论LAPTM4B基因多态性与淋巴瘤易感性相关,*2等位基因可能是淋巴瘤发生的危险因素。

人肝癌相关新基因LAPTM4B研究进展

LAPTM4B是北京大学基础医学院细胞生物学教研室新近克隆的一个在肝细胞癌中高表达的新基因,具有癌基因特性．本文将对其发现过程、结构、理化性质、功能研究及其多态性与肿瘤的关系等方面进行初步总结．

LAPTM4B-35蛋白在涎腺腺样囊性癌中的表达及临床意义

目的:检测溶酶体相关4次跨膜蛋白B(lysosome-associated protein transmembrane-4 beta,LAPTM4B)-35蛋白在正常涎腺及涎腺腺样囊性癌中的表达水平,探讨其与肿瘤患者临床病理特征的相关性。方法:收集95例涎腺腺样囊性癌和20例正常涎腺组织,以及相关临床病理资料,应用免疫组织化学法检测LAPTM4B-35在正常涎腺组织、涎腺腺样囊性癌的表达水平,卡方检验或Fisher精确检验及多因素Logistic回归分析探讨LAPTM4B-35表达水平与涎腺腺样囊性癌临床病理特征的关系。结果:LAPTM4B-35蛋白在正常涎腺组织不同细胞中呈差异性表达:在腺泡细胞中表达为阴性,在导管和闰管细胞中表达很弱,在纹状管细胞中表达中等。在涎腺腺样囊性癌组织中,48.00%的高级别涎腺腺样囊性癌LAPTM4B-35表达增高,显著高于低级别涎腺腺样囊性癌。此外,LAPTM4B-35高表达与临床分期晚亦呈显著相关。结论:LAPTM4B-35蛋白在正常涎腺组织细胞中呈差异性表达,与涎腺腺样囊性癌的组织学分级和临床分期显著相关。

质粒介导LAPTM4B过表达胰腺癌细胞株PANC-1的构建及鉴定

目的筛选低表达LAPTM4B-35细胞株并构建质粒介导的LAPTM4B过表达胰腺癌细胞株并进行鉴定。方法通过RT-PCR及Western-Blot方法检测3种胰腺癌细胞LAPTM4B的表达,筛选出现低表达LAPTM4B细胞株。通过质粒稳定转染胰腺癌细胞PANC-1,pcDNA3.0-AE过表达LAPTM4B基因,应用RT-PCR,Western-blot进行鉴定。结果成功扩增提取pcDNA3.0-AE质粒,转染并筛选稳定细胞株。RT-PCR及Western-Blot显示相对空白对照,稳定株的过表达LAPTM4B-35明显。结论成功构建筛选低表达细胞株,并建立稳定过表达LAPTM4B的胰腺癌细胞株。

胃窦黏膜肠上皮化生腺体中LAPTM4B蛋白的表达及其意义

本研究通过免疫组织化学染色方法检测了80例胃窦黏膜中LAPTM4B蛋白表达情况,并结合形态学观察判断肠上皮化生的类型及程度。80例标本中28例检测到LAPTM4B蛋白在肠上皮化生腺体表达(35%),52例未检测到LAPTM4B蛋白在肠上皮化生腺体表达(65%)。LAPTM4B蛋白在不同类型、不同程度肠上皮化生中的表达有显著性差异(P<0.01)。LAPTM4B基因的异常表达可能在胃癌发生的早期阶段发挥重要作用。

LAPTM4B在子宫内膜癌组织中表达及临床意义

目的探讨LAPTM4B在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义。方法选取2011年3月至2013年3月鄂东医疗集团黄石市妇幼保健院行手术治疗的子宫内膜癌患者76例,同期,选取正常子宫内膜组织40例作为对照组,免疫组化法检测子宫内膜癌和对照组组织中LAPTM4B蛋白表达,所有患者均进行随访,随访截止日期2018年3月31日,随访过程中失访4例,随访率93.42%,生存分析采用Kaplan-Meier法和Log-Rank检验,影响患者预后的多因素分析采用Cox比例风险回归模型。结果子宫内膜癌组织中LAPTM4B蛋白阳性表达率为73.68%,高于对照组的27.50%,差异有统计学意义(χ~2=22.911,P <0.001);LAPTM4B蛋白表达在不同FIGO分期、不同分化程度和是否淋巴结转移差异有统计学意义(P <0.05);Kaplan-Meier生存分析结果显示,阳性表达组平均生存时间(42.76±4.16)个月,生存率33.96%,阴性表达组则分别为(71.53±4.78)个月和78.95%,Log-Rank检验差异有统计学意义(χ~2=10.458,P=0.001);Cox比例风险回归结果显示,分化程度、淋巴结转移和LAPTM4B蛋白表达是影响患者预后的因素(HR=0.436、5.993和3.052,P <0.05)。结论子宫内膜癌组织中LAPTM4B蛋白表达升高,且与肿瘤恶性进展有关及预后有关,是影响患者预后的危险因素。

LAPTM4B与肺癌多基因突变状态及EGFR-TKIs耐药关系的分析

目的观察溶酶体相关跨膜蛋白4B(LAPTM4B)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)不同基因突变状态下的表达,探究LAPTM4B在EGFR-TKIs耐药中的作用。方法收集464例细胞学标本,其中31例为EGFR-TKIs靶向治疗后继发耐药基因T790M突变的标本,离心沉淀制成细胞块,经HE及免疫细胞化学染色确诊为NSCLC,应用实时荧光定量PCR法联合检测多基因(EGFR、ALK、ROS1、RET、KRAS、BRAF、HER-2、NRAS、PIK3CA、c-MET)突变状态;免疫细胞化学染色检测不同基因改变状态下LAPTM4B的表达。收集EGFR-TKIs治疗前的31例标本及配对的EGFR-TKIs治疗后继发耐药基因T790M突变标本,对比分析继发耐药基因T790M突变前后LAPTM4B的表达变化。结果464例NSCLC细胞学标本进行多基因突变联合检测,结果示单基因突变365例(78.7%)、双基因伴随突变14例(3%)、野生型85例(18.3%),阳性率为81.7%。单基因EGFR、ALK、ROS1、RET、KRAS、BRAF、HER-2、NRAS、c-MET突变率分别为59%、6%、3%、2%、4%、2%、2%、0.2%、1%;双基因伴随EGFR+PIK3CA、ALK+KRAS、EGFR+BRAF、EGFR+HER-2、EGFR+RET、EGFR+KRAS、RET+HER-2突变率分别为1%、0.4%、0.4%、0.4%、0.4%、0.2%、0.2%。LAPTM4B蛋白表达与患者性别、年龄无关,与肿瘤分化程度呈正相关(P<0.001),差异有统计学意义。LAPTM4B蛋白表达与基因突变及EGFR基因突变密切相关,差异有统计学意义(P<0.05);与K-RAS等基因突变无关。基因突变型病例相对于基因野生型病例,LAPTM4B蛋白表达增高的风险增加(OR=2.94,95%CI:1.804~4.791)。31例EGFR-TKIs继发耐药基因T790M突变NSCLC标本的LAPTM4B蛋白表达水平高于EGFR-TKIs治疗前标本,差异有统计学意义(P<0.05)。结论LAPTM4B蛋白表达水平与NSCLC肿瘤分化程度及EGFR基因突变相关。LAPTM4B在EGFR-TKIs继发耐药基因T790M突变时表达增加,可能是EGFR-TKIs继发耐药产生的机制。

Laptm4b缺失对小鼠造血干祖细胞稳态维持的影响

目的:探讨溶酶体相关4次跨膜蛋白B(LAPTM4B)在小鼠造血干祖细胞稳态维持过程中的作用。方法:构建造血系统特异的Laptm4b缺失小鼠;采用流式细胞术分析该模型小鼠的造血干祖细胞:LSK、LT、ST、MPP等细胞的数目和比例;通过流式分选仪分选造血干细胞SLAM-HSC,体外培养检测Laptm4b缺失对造血干细胞克隆形成能力的影响;通过造血干细胞SLAM-HSC竞争性骨髓移植实验分析Laptm4b缺失对小鼠造血干细胞造血重建能力的影响。结果:Laptm4b基因缺失仅轻微上调稳态下小鼠外周血中的T细胞的比例,对稳态下小鼠造血干祖细胞的比例和数量无显著影响。Laptm4b基因的缺失不影响造血干细胞竞争性移植后的造血重建能力,但能够抑制体外培养下造血干细胞的克隆形成。结论:Laptm4b缺失可能在造血干细胞体外扩增等快速增殖压力下发挥一定的抑制作用。在造血系统中特异敲除Laptm4b基因对小鼠造血干祖细胞的稳态维持及其造血重建能力无显著影响。

LAPTM4B在胰腺癌中的表达与其侵袭、转移及预后的关系

目的探讨溶酶体相关4次跨膜蛋白B(LAPTM4B)在胰腺癌组织中的表达水平,并分析LAPTM4B表达水平对癌细胞侵袭及转移的影响。方法选取2015年1月至2019年1月本院收治的96例胰腺癌患者,采用免疫组化染色法检测LAPTM4B在胰腺癌组织及癌旁正常组织中的表达情况,分期与病理特征的关系。Kaplan⁃Meier生存分析LAPTM4B表达对胰腺癌患者预后生存的影响,使用tarone法进行检验,Logistic回归分析影响患者预后的相关因素。结果观察组LAPTM4B阳性表达率为76.04%,显著高于对照组54.17%,差异具有统计学意义(P<0.05)。LAPTM4B表达与TNM分期、淋巴结转移、分化程度有关,TNM分期为Ⅲ~Ⅵ期、有淋巴结转移、分化程度为中⁃低分化的胰腺癌患者LAPTM4B阳性表达率更高(P<0.05)。96例胰腺癌患者1年生存率为20.83%(20/96),LAPTM4B阳性表达的胰腺癌患者死亡率更高(P<0.05)。LAPTM4B表达阴性及表达阳性半数生存时间分别为(8.30±0.73)个月、(6.82±0.51)个月。生存分析显示LAPTM4B表达阳性的患者生存期明显短于LAPTM4B表达阴性的患者,Keplan⁃meier生存曲线比较差异具有统计学意义(P<0.05)。TNM分期为Ⅲ~Ⅵ期、有淋巴结转移、分化程度为中⁃低分化、LAPTM4B表达阳性为影响胰腺癌患者预后生存的独立危险因素(P<0.05)。结论LAPTM4B在胰腺癌的侵袭及转移中发挥重要作用,与胰腺癌患者预后密切相关,可作为评估胰腺癌患者预后的重要检测标志物。

Expression of lysosome-associated protein transmembrane 4B-35 in cancer and its correlation with the differentiation status of hepatocellular carcinoma

AM: To produce high-quality potyclonal antibody to lysosomeassociated protein transmembrane 4B-35 and to identify LAPTM4B-35 expression in cancer tissues and its correlation with differentiation status of hepatocellular carcinoma (HCC). METHODS: The 297 bp 5' end of LAPTM4BcDNA was obtained by PCR and inserted into prokaryotic expression vector pGEX-KG. Then the recombinant pGEX-KG-N_(1-99) was transformed into E. coli JM109 to express GST-fusion protein. The fusion protein was purified by glutathione sepharose^(TM) 4B agarose. The purified GST-LAPTM4B-N_(1-99) was characterized by SDSPAGE, and used to immunize rabbits. The titer and specificity of antisera were detected by ELISA and Western blot, respectively. The correlation between the expression levels of LAPTM4B-35 and the differentiation status of HCC was analyzed via Western blot. The expression of LAPTM4B-35 in HCC and other six cancer tissues was investigated via tissue chip and immunohistochemical analysis. RESULTS: About 6.2 mg of pure GST-LAPTM4B-N_(1-99) was isolated from 1 L of bacteria. The GST-LAPTM4B-N_(1-99) produced high titer antisera in rabbits and showed good immunity. Western blot showed specific reactions for the antibody to the LAPTM4B-35 in the total proteins from HCC tissues and BEL-7402 cells, also to the fusion protein purified or in the transformed bacteria. LAPTM4B-35 was remarkably expressed in several cancers, such as HCC, breast cancer, gastric carcinoma, lung cancer, and colon carcinoma, but not commonly expressed in esophageal cancer and rectum carcinoma. Notably, the expression levels of LAPTM4B-35 were significantly and inversely correlated to the differentiation of HCCs in a 20 case analysis. CONCLUSION: Specific polyclonal antibody (LAPTM4BN_(1-99)-pAb) to LAPTM4B-35 was produced. It identified the expression of LAPTM4B-35 in some cancer tissues originated from single layer cuboidal and columnar epithelial cells and firmly demonstrated that the expression of LAPTM4B-35 in HCC was inversely correlated with the differentiation of HCC.

建立数字PCR检测非小细胞肺癌溶酶体相关的4次跨膜蛋白B基因拷贝数变异方法

建立芯片式数字PCR(dPCR)检测非小细胞肺癌(NSCLC)LAPTM4B基因拷贝数变异方法,并初步评估其基本性能和临床应用的可行性。设计LAPTM4B基因引物及特异性探针,建立dPCR反应体系,根据制备的不同浓度目的DNA样品验证该检测方法的最低检测限、精密度和线性范围。本研究首次建立并优化dPCR检测LAPTM4B基因拷贝数的反应体系,分析数据显示,该方法最低检测到12.5%的LAPTM4B基因拷贝数缺失,批间精密度变异系数CV<10%,且缺失比例在12.5%~100%范围内线性良好(R^(2)>0.99)。此外,收集2021年3月至7月于北京大学肿瘤医院就诊的6例NSCLC患者,采用自建方法检测其冰冻组织标本,探究其临床应用可行性。dPCR结果显示,其中5例患者的组织样本存在LAPTM4B基因拷贝数缺失,1例出现拷贝数增加,推测可能与其术前化疗有关。综上所述,本研究成功应用芯片式dPCR方法,建立非小细胞肺癌LAPTM4B基因拷贝数变异的检测体系,并在组织标本中初步证实其临床应用的价值。

胃癌组织中溶酶体相关四次跨膜蛋白B、三叶因子家族1表达与胃癌的关系

目的探讨胃癌组织中溶酶体相关四次跨膜蛋白B(LAPTM4B)、三叶因子家族1(TFF1)蛋白表达与胃癌的关系。方法选取2015年8月至2018年6月郑州人民医院收集的80例胃癌组织及40例胃癌癌旁组织,采用免疫组织化学染色技术检测LAPTM4B、TFF1蛋白表达情况,观察不同病灶最大径、TNM分期、组织学分化程度、淋巴结转移情况、浸润程度及胃癌组织中LAPTM4B、TFF1蛋白的阳性表达率。结果胃癌组织中LAPTM4B蛋白阳性表达率为61.25%、TFF1蛋白阳性表达率为68.75%,胃癌癌旁组织中LAPTM4B蛋白阳性表达率为25.00%、TFF1蛋白阳性表达率为35.00%;胃癌组织均高于癌旁组织(P<0.05)。在TNM分期(Ⅲ期+Ⅳ期)、发生淋巴结转移的胃癌组织中LAPTM4B蛋白阳性表达率分别为78.79%、74.42%,高于TNM分期(Ⅰ期+Ⅱ期)48.94%、未发生淋巴结转移45.95%的病人(P<0.05);在TNM分期(Ⅲ期+Ⅳ期)、发生淋巴结转移、低分化的胃癌组织中TFF1蛋白阳性表达率分别为90.91%、81.40%、87.10%,高于TNM分期(Ⅰ期+Ⅱ期)53.19%、未发生淋巴结转移54.05%、高分化和中分化的57.14%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论胃癌组织中LAPTM4B、TFF1表达强度明显较癌旁组织增强,可能与胃癌的发生及发展有一定的关系。