LASS1基因克隆及其在大鼠脑皮层的表达与神经元衰老的相关性初步研究(英文)

长寿保障基因 LAG1 是从酵母中克隆的与酵母寿命相关的基因,随酵母生命衰老而表达发生变化. 对大鼠中同源基因LASS1 进行克隆、测序和序列分析,发现其 mRNA 序列不同于 GenBank 中的预测序列,开放阅读框包含 1 053 碱基对,编码蛋白由 350 个氨基酸组成,内含 Lag1 蛋白家族保守的 Lag1p motif 和 TLC 结构域. 从新生、1 月龄、6 月龄、12 月龄和 24月龄大鼠脑顶叶皮质提取总 RNA,用半定量 RT-PCR 及 RNA 印迹方法对 LASS1 在大鼠脑皮质中的表达随年龄变化情况进行分析. 结果表明,出生后 LASS1 表达量随年龄增加而增高,至 6 月龄达高峰,然后随年龄增加而逐渐下降,至 24 月老龄鼠达最低. 衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-gal)对鼠脑皮层染色发现,神经元阳性染色随年龄增长明显增加. 大鼠 LASS1 基因表达在正常衰老过程中发生变化,为进一步研究该基因的作用奠定了基础.

LASS1基因在鼠脑皮层中的表达研究

目的探讨LASS1基因在大脑衰老中的作用。方法分别从胎鼠、新生鼠、1月龄、3月龄、6月龄、11月龄、18月龄和24月龄鼠大脑皮层组织提取总RNA,RT-PCR扩增获得LASS1的cDNA片段并植入pGEM-T载体,以重组质粒载体为定量标准模板,采用Taqman荧光探针,一步法实时定量RT-PCR检测LASS1mRNA表达,并以肌动蛋白基因(β-actin)和18SrRNA基因作为看家基因。结果在胎鼠至青壮年鼠(1～3个月龄)发育过程中大鼠脑皮层LASS1表达水平呈上调趋势,之后随年龄增长逐渐下降;β-actin表达量在胎鼠及新生鼠明显高于成年鼠和老年鼠;18SrRNA基因表达相对稳定。结论成功建立了大鼠LASS1基因表达的荧光实时定量RT-PCR检测方法;大鼠脑皮层中LASS1基因转录水平随年龄变化呈现相应的规律性,这将为进一步研究该基因在衰老过程中的作用提供实验室依据;同时,作为看家基因用于衰老研究,18SrRNA较β-actin基因更为可靠。