miR-218-5p通过调控LAYN抑制结肠癌发展的机制

目的探讨miR-218-5p和LAYN在结肠癌中的表达水平以及二者的调控关系对结肠癌进展的影响。方法采用RT-qPCR对结肠癌组织、癌旁组织以及细胞系中的miR-218-5p的表达进行检测。采用Western blot对结肠癌组织、癌旁组织和细胞系中的LAYN蛋白表达水平进行检测。采用原位杂交(in situ hybridizsation,ISH)实验对结肠癌组织和癌旁组织中的miR-218-5p的表达进行检测。采用免疫组化(immunohistochemistry,IHC)实验对结肠癌组织和癌旁组织中的LAYN蛋白分布和表达进行检测。采用双荧光素酶实验对miR-218-5p与LAYN的3’-非翻译区(rn-translation region,UTR)的结合关系进行检测。采用CCK-8对细胞的增殖进行检测;采用Transwell法对细胞的侵袭能力进行检测;采用流式细胞术对细胞的凋亡水平进行检测;采用Western blot对细胞中cleaved Caspase3表达水平进行检测。结果在结肠癌组织和结肠癌细胞系中,miR-218-5p表达降低并且HT-29细胞中表达最低(P<0.0001),LAYN表达升高并且HT-29细胞中表达最高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结合Western blot实验表明miR-218-5p可以结合在LAYN的3’U TR区域并抑制其蛋白表达(P<0.01)。在细胞实验中,过表达miR-218-5p抑制细胞增殖(P<0.05)、侵袭(P<0.001)并增加凋亡(P<0.01)和cleaved Caspase3蛋白的表达(P<0.01);过表达LAYN促进细胞增殖(P<0.05)、侵袭(P<0.001)并减少凋亡(P<0.0001)和cleaved Caspase 3蛋白的表达(P<0.01),同时过表达miR-218-5p和LAYN部分逆转了上述变化。结论在结肠癌组织中,miR-218-5p表达水平降低,细胞实验表明miR-218-5p通过靶向调控LAYN抑制细胞的侵袭和增殖,促进其凋亡。

基于生物信息学方法分析LAYN在甲状腺癌中临床预后价值及对免疫细胞浸润的影响

目的探索LAYN基因在甲状腺癌组织中的表达与临床预后的相关性及对免疫细胞浸润的影响,为进一步研究潜在的分子机制提供基础。方法在Oncomine和GEPIA数据库中检索甲状腺癌相关的基因,分析LAYN基因在甲状腺癌组织与正常组织之间表达的差异。通过GEPIA数据库分析LAYN基因与甲状腺癌患者临床分期及预后的相关性。结合ImmucellAI及TIMER2.0工具分析LAYN基因与甲状腺癌组织中CD4^(+)T细胞和CD8+T细胞浸润丰度的关系。联合STRING数据库分析LAYN表达相关的蛋白。通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)进一步验证检测甲状腺癌组织及癌旁组织,甲状腺癌细胞系SW579,TPC-1及甲状腺上皮细胞TEC中LAYN的表达水平。结果Oncomine、GEPIA和STRING数据库结果表明,与正常甲状腺组织相比,LAYN基因在甲状腺癌组织中低表达(P<0.05)。LAYN基因与甲状腺癌临床TNM分期相关(P<0.05),Ⅲ/Ⅳ期患者肿瘤组织中LAYN基因低表达。LAYN基因高表达组患者总生存期(Overall survival,OS)较差,而无疾病生存期(Disease free survival,DFS)较好(P<0.05)。在甲状腺癌组织中,CD4^(+)T细胞和CD8+T细胞的浸润丰度较低,且CD4^(+)T细胞和CD8+T细胞的浸润丰度与LAYN基因的表达水平呈正相关(P<0.05)。此外,LAYN相互作用的蛋白为PNRC1,MAGEH1,HAPLN1,SMOC1,PRSS12,HMMR,NF2,TLN2,TLN1,TLE2。RT-qPCR验证结果表明,LAYN在甲状腺癌及甲状腺癌细胞系SW579及TPC-1中低表达(P<0.05)。结论LAYN基因在甲状腺癌组织中低表达,且与甲状腺癌患者临床TNM分期及预后相关,可作为预后判断的分子标志物。其潜在机制可能通过影响浸润性免疫细胞丰度发挥作用。为研究甲状腺癌致病机制及靶向药物的开发提供理论依据。