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问号钩端螺旋体LA_2144基因产物PAF-AH和PLA2酶活性研究
被引量:
2
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作者
张琴超
孙爱华
+3 位作者
张金良
胡玮琳
严杰
林旭瑷
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第7期519-526,共8页
目的了解问号钩端螺旋体LA_2144基因产物血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)和磷脂酶A2(PLA2)的酶活性。方法生物信息学软件预测问号钩端螺旋体赖株LA_2144基因跨膜区、信号肽和结构域。构建无信号肽LA_2144基因原核表达系统,Ni-NTA亲和...
目的了解问号钩端螺旋体LA_2144基因产物血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)和磷脂酶A2(PLA2)的酶活性。方法生物信息学软件预测问号钩端螺旋体赖株LA_2144基因跨膜区、信号肽和结构域。构建无信号肽LA_2144基因原核表达系统,Ni-NTA亲和层析法提纯目的重组蛋白rLep2144后复性。采用分光光度法检测rLep2144水解PAF-AH底物2-thioPAF的活性及其Km和Kcat值以及水解PLA2底物花生四烯酸硫代卵磷脂的活性。采用实时荧光定量RT-PCR和Westernblot法检测问号钩端螺旋体感染人和小鼠血管内皮细胞(HUVEC和EOMA)后LA_2144基因转录、蛋白质表达和外分泌情况。结果LA_2144基因无跨膜区但有信号肽和SGNH水解酶超家族结构域。所构建的无信号肽LA_2144基因原核表达系统能高效表达rLep2144,提纯后的rLep2144在分离胶上为单一蛋白质条带并成功复性。rLep2144有较强PAF-AH活性,其Km和Kcat值分别为688.235μmol/L和0.976/s,但PLA2活性较弱。问号钩端螺旋体感染HUVEC和EOMA后LA_2144基因mRNA转录和蛋白质表达水平迅速升高(P<0.05)且外分泌。结论问号钩端螺旋体LA_2144基因产物具有较强PAF-AH活性和一定的PLA2活性,可在钩端螺旋体病出血性病变和炎症反应中发挥作用。
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关键词
问号钩端螺旋体
la_2144基因
血小板活化因子乙酰水解酶
磷脂酶A2
酶活性
原文传递
题名
问号钩端螺旋体LA_2144基因产物PAF-AH和PLA2酶活性研究
被引量:
2
1
作者
张琴超
孙爱华
张金良
胡玮琳
严杰
林旭瑷
机构
浙江大学医学院病原生物学和微生物学系
杭州医学院基础医学部
金华职业技术学院医学院
出处
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第7期519-526,共8页
基金
国家自然科学基金(81671974)
浙江省科技计划项目(2014C33143).
文摘
目的了解问号钩端螺旋体LA_2144基因产物血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)和磷脂酶A2(PLA2)的酶活性。方法生物信息学软件预测问号钩端螺旋体赖株LA_2144基因跨膜区、信号肽和结构域。构建无信号肽LA_2144基因原核表达系统,Ni-NTA亲和层析法提纯目的重组蛋白rLep2144后复性。采用分光光度法检测rLep2144水解PAF-AH底物2-thioPAF的活性及其Km和Kcat值以及水解PLA2底物花生四烯酸硫代卵磷脂的活性。采用实时荧光定量RT-PCR和Westernblot法检测问号钩端螺旋体感染人和小鼠血管内皮细胞(HUVEC和EOMA)后LA_2144基因转录、蛋白质表达和外分泌情况。结果LA_2144基因无跨膜区但有信号肽和SGNH水解酶超家族结构域。所构建的无信号肽LA_2144基因原核表达系统能高效表达rLep2144,提纯后的rLep2144在分离胶上为单一蛋白质条带并成功复性。rLep2144有较强PAF-AH活性,其Km和Kcat值分别为688.235μmol/L和0.976/s,但PLA2活性较弱。问号钩端螺旋体感染HUVEC和EOMA后LA_2144基因mRNA转录和蛋白质表达水平迅速升高(P<0.05)且外分泌。结论问号钩端螺旋体LA_2144基因产物具有较强PAF-AH活性和一定的PLA2活性,可在钩端螺旋体病出血性病变和炎症反应中发挥作用。
关键词
问号钩端螺旋体
la_2144基因
血小板活化因子乙酰水解酶
磷脂酶A2
酶活性
Keywords
Leptospira interrogans
la
_
2144
gene
PAF-AH
P
la
2
Enzymatic activity
分类号
R377 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
问号钩端螺旋体LA_2144基因产物PAF-AH和PLA2酶活性研究
张琴超
孙爱华
张金良
胡玮琳
严杰
林旭瑷
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019
2
原文传递
已选择
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参考文献
引证文献
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