LncRNA LBX2-AS1在结肠癌中生物信息学分析及初步验证

目的基于生物信息学角度探讨长链非编码RNA(LncRNA)LBX2反义RNA1(LBX2-AS1)对结肠癌预后的影响并进行初步验证。方法在基因表达交互分析(GEPIA)数据库查找并明确与结肠癌预后密切相关的基因LBX2-AS1,在UCSCxena数据库中下载结肠癌数据集(TCGA-COAD)及生存信息,并分为LBX2-AS1高低表达组后绘制生存曲线。分别检测临床标本结肠癌及癌旁组织中LBX2-AS1的表达并分析其与结肠癌临床病理特征的相关性。沉默SW480细胞株LBX2-AS1表达后,通过细胞增殖实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验检测各组细胞的增殖、侵袭和转移能力。结果通过GEPIA数据库检索发现LBX2-AS1与结肠癌患者的预后密切相关。UCSCxena数据库下载TCGA-COAD的生存信息分析提示,随着生存时间延长,高表达LBX2-AS1组存活例数明显少于低表达组;与癌旁组织比较,LBX2-AS1在结肠癌组织中明显高表达,且表达水平与患者年龄、性别临床参数无关,与结肠癌的病理分期及淋巴结转移呈正相关。沉默LBX2-AS1后结肠癌细胞SW480细胞增殖率明显降低,划痕距离明显增宽,侵袭细胞数明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论基于生物信息学分析,结合临床数据及细胞实验验证,LncRNA LBX2-AS1在结肠癌中起促癌作用。

布比卡因调控LncRNA LBX2-AS1对宫颈癌细胞SiHa增殖及凋亡的影响

目的:探讨布比卡因对宫颈癌细胞SiHa增殖、凋亡的影响及其对LncRNA LBX2-AS1的调控作用。方法:体外培养人宫颈癌细胞SiHa,分别加入不同剂量的布比卡因处理细胞,分别将si-NC、si-LBX2-AS1转染至SiHa细胞,分别将pcDNA、pcDNA-LBX2-AS1转染至SiHa细胞后使用布比卡因处理;采用MTT实验检测细胞增殖;应用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率;采用qRT-PCR法检测LBX2-AS1的表达量;Western blot法检测Cleaved-caspase3、pro-caspase3蛋白表达量。结果:布比卡因可明显降低光密度(OD)值、S期细胞比例、LBX2-AS1的表达水平及pro-caspase3蛋白水平(P<0.05),提高凋亡率、G0-G1期细胞比例及Cleaved-caspase3蛋白水平(P<0.05);转染si-LBX2-AS1可明显降低OD值、S期细胞比例及pro-caspase3蛋白水平(P<0.05),提高凋亡率、G0-G1期细胞比例及Cleaved-caspase3蛋白水平(P<0.05);转染pcDNA-LBX2-AS1可明显逆转布比卡因对SiHa细胞增殖、细胞周期及凋亡的作用(P<0.05)。结论:布比卡因可通过下调LBX2-AS1的表达从而抑制宫颈癌细胞增殖、诱导细胞周期阻滞于G0-G1期细胞比例及促进细胞凋亡。

长链非编码RNA LBX2-AS1调控微小RNA-491-5p影响骨肉瘤细胞增殖及凋亡的机制

目的探讨长链非编码RNA((lncRNA)LBX2-AS1靶向调控微小RNA(miRNA,miR)-491-5p影响骨肉瘤细胞增殖及凋亡的分子机制。方法采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测2017年10月至2018年12月郑州大学第一附属医院收集的骨肉瘤组织与瘤旁组织中LBX2-AS1、miR-491-5p的表达量。选取人骨肉瘤细胞U2OS为研究对象,按照数字表法随机分为4组:si-NC组(转染si-NC)、si-LBX2-AS1组(转染si-LBX2-AS1)、si-LBX2-AS1+anti-miR-NC组(共转染si-LBX2-AS1与anti-miR-NC)、si-LBX2-AS1+anti-miR-491-5p组(共转染si-LBX2-AS1与anti-miR-491-5p),分别将si-NC、si-LBX2-AS1、si-LBX2-AS1与anti-miR-NC、si-LBX2-AS1与anti-miR-491-5p转染至U2OS细胞。噻唑蓝(MTT)检测细胞存活率;应用流式细胞仪检测细胞周期;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证LBX2-AS1与miR-491-5p的靶向关系;蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、p21、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)蛋白表达量。两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果瘤旁组织与骨肉瘤组织组织中LBX2-AS1的表达量分别为(1.01±0.10)、(3.56±0.35),miR-491-5p的表达量分别为(1.02±0.10)、(0.16±0.02),与瘤旁组织比较,骨肉瘤组织中LBX2-AS1的表达水平显著升高(t=35.027,P<0.05),miR-491-5p的表达水平显著降低(t=42.165,P<0.05),差异均有统计学意义;si-NC组与si-LBX2-AS1组细胞存活率分别为(100.02±10.00)%、(55.67±5.54)%,G1期比例分别为(38.51±2.55)%、(52.27±4.68)%,S期比例分别为(30.10±2.14)%、(15.36±1.26)%,细胞凋亡率分别为(8.28±0.92)%、(24.11±2.37)%,与si-NC组比较,si-LBX2-AS1组细胞存活率显著降低(t=11.638,P<0.05),细胞周期G1期比例明显升高(t=7.745,P<0.05),S期比例明显降低(t=17.806,P<0.05),细胞凋亡率显著升高(t=18.680,P<0.05),Cyclin D1表达量显著降低(t=20.871,P<0.05),p21、Caspase-3表达量显著升高(t=22.687,P<0.05;t=20.871,P<0.05),差异均有统计学意义;双荧光素酶报告实验证实LBX2-AS1能够靶向结合miR-491-5p;抑制miR-491-5p表达能减弱抑制LBX2-AS1表达对U2OS细胞增殖的抑制作用,还能减弱抑制LBX2-AS1表达对U2OS细胞凋亡的促进作用。结论lncRNA LBX2-AS1通过调控miR-491-5p从而促进骨肉瘤细胞增殖,抑制细胞凋亡。

长链非编码RNA LBX2-AS1通过表皮生长因子受体信号通路调控胶质瘤细胞增殖、迁移及凋亡的研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)LBX2-AS1通过表皮生长因子受体(EGFR)信号通路调控胶质瘤细胞增殖、迁移及凋亡的机制。方法2018年4月至2021年8月,将脑胶质瘤U251细胞(简称U251细胞)分为对照组和观察组,每组4株,对照组采用常规培养,观察组利用靶向LBX2-AS1的特异性小干扰RNA(siRNA)转染。采用四甲基偶氮唑盐法检测U251细胞增殖能力,划痕实验检测U251细胞转移率,流式细胞仪检测U251细胞凋亡率,蛋白印迹法检测U251细胞总蛋白及血管内皮生长因子(VEGF)、磷酸化磷酸肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化Ras(p-Ras)和磷酸化Raf(p-Raf)蛋白的表达。结果观察组U251细胞增殖能力、转移率明显低于对照组[(27.15±1.38)%比(63.54±2.47)%、(37.09±3.74)%比(82.17±9.24)%],U251细胞凋亡率明显高于对照组[(69.17±5.83)%比(17.58±1.22)%],差异有统计学意义(P<0.01)。观察组U251细胞总蛋白及VEGF、p-PI3K、p-Akt、p-Ras、p-Raf蛋白表达水平明显低于对照组(1.52±0.23比2.39±0.31、0.73±0.08比1.68±0.45、0.57±0.11比1.89±0.31、0.68±0.06比1.74±0.51、0.84±0.12比1.99±0.63和0.71±0.08比1.52±0.37),差异有统计学意义(P<0.01)。结论lncRNA LBX2-AS1在胶质瘤细胞中高表达,沉默lncRNA LBX2-AS1的表达通过EGFR通路抑制脑胶质瘤细胞的增殖和转移。

LncRNA LBX2-AS1调控MDK对结肠癌细胞侵袭及转移的影响

目的探讨LBX2-AS1调控MDK对CRC细胞侵袭及转移的影响。 方法选取80例我院结肠癌患者的癌组织及癌旁组织,qPCR法检测LBX2-AS1在组织中的表达量并分析其与结肠癌临床病理特征的相关性。通过生物信息学预测、qPCR检测并结合双荧光素酶实验分别验证LBX2-AS1与miR-219a-2-3p、miR-219a-2-3p及MDK的靶向关系。将细胞分为 CON组、OE-NC组、OE-LBX2-AS1组、OE-LBX2-AS1+miR-219a-2-3p mimics组。使用CCK实验、划痕、Transwell侵袭实验检测细胞增殖、侵袭和转移能力;通过qPCR及Western blot了解MDK、TGF-β1、Vimentin、snail的表达情况。结果 与癌旁组织相比,LBX2-AS1 在 CRC组织中明显高表达,且表达水平与结肠癌的病理T分期以及淋巴结转移呈现正相关。生物信息学预测LBX2-AS1可作为ceRNA靶向调控miR-219a-2-3p促进MDK的表达,过表达LBX2-AS1后miR-219a-2-3p表达明显下降。双荧光素酶报告分析表明miR-219a-2-3p可分别作用于LBX2-AS1及MDK。与 CON组及NC 组相比,OE-LBX2-AS1组细胞增殖率升高,划痕距离缩短,侵袭细胞数增多,MDK、TGF-β1、Vimentin、snail表达增加;与OE-LBX2-AS1组相比,OE-LBX2-AS1+miR-219a-2-3p mimic组,细胞增殖率下降,划痕距离增宽,侵袭细胞数减少,MDK、TGF-β1、Vimentin、snail表达降低(P<0.05)。结论 lncRNA LBX2-AS1可miR-219a-2-3p竞争性调控MDK,并可能通过激活 TGFβ信号通路,促进Vimentin、snail的表达,从而促进结肠癌细胞侵袭及转移。