伊立替康、紫杉醇联合顺铂治疗对宫颈癌CYFRA21-1、VEGF-C及LC3-Ⅱ水平的影响

目的:分析伊立替康、紫杉醇联合顺铂治疗对宫颈癌的治疗效果及对细胞角蛋白19片段抗原21-1(Cytokeratin 19 fragment 21-1,CYFRA21-1)、血管内皮生长因子C(Vascular endothelial growth factor C,VEGF-C)及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(Microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3-Ⅱ)水平的影响.方法:回顾性分析本院2020年3月至2023年4月收治的122例宫颈癌患者的临床资料,根据治疗方案不同将患者分为IP组(伊立替康+顺铂治疗,60例)和TP组(紫杉醇+顺铂治疗,62例).分析对比两组的临床疗效、CYFRA21-1、VEGF-C及LC3-Ⅱ水平以及毒副反应.结果:IP组与TP组总疗效率分别为56.67%、79.03%,TP组总疗效率显著高于IP组(P<0.05).两组治疗后的CYFRA21-1、VEGF-C及LC3-Ⅱ水平均显著下降,且TP组CYFRA21-1、VEGF-C及LC3-Ⅱ水平均显著低于IP组(P<0.05).TP组0度、Ⅰ度例数占比显著高于IP组,Ⅲ度例数占比显著低于IP组(P<0.05).结论:与伊立替康联合顺铂比较,紫杉醇联合顺铂治疗宫颈癌临床疗效更为理想,可有效降低CYFRA21-1、VEGF-C及LC3-Ⅱ水平,且安全性高.

电气化铁路“车-网”系统串/并联双模式宽频谐波扰动产生装置设计与测量方法

精确测量动车组与电力机车(简称机车)四象限变流器(four-quadrant converter,4QC)和牵引网的宽频带阻抗特性是识别电气化铁路“车-网”系统振荡和不稳定问题的重要途径。然而,已有研究采用单一电压/电流扰动注入方式对牵引网或机车4QC阻抗进行测量,可能造成部分谐波扰动流向非目标测量对象,导致被测对象的谐波扰动信噪比低,影响阻抗测量精度。因此,该文提出一种适用于电气化铁路“车-网”联合系统的串/并联双模式宽频谐波扰动产生装置与阻抗测量方法,装置具有电压和电流两种工作模式,可以发出频带为1~3000Hz的宽频谐波扰动。扰动产生装置拓扑主要由多绕组降压变压器、谐波功率放大单元、并联LC谐振电路和反串联绝缘栅双极晶体管(insulated gate bipolar transistor,IGBT)模块等部分构成,结合双闭环dq解耦控制和载波移相开环脉宽调制(pulse-width modulation,PWM)控制策略,实现频带双边可控、幅值可控且分布均匀的大功率谐波扰动输出。最后,利用MATLAB/Simulink仿真和RT-Lab硬件在环实验验证该文串/并联双模式宽频谐波扰动产生装置设计方案及阻抗测量方法的正确性与有效性。

LC-APCI-MS/MS法测定大鼠血浆中维胺酯浓度及其药代动力学研究

本文建立一种高灵敏度的液质联用方法用于快速测定大鼠血浆中维胺酯的浓度。采用蛋白沉淀法制备样品；色谱柱为Agilent TC C18柱（150mm×4．6mm ID，5um），流动相为甲醇-水-甲酸（93：7：0．1），辛伐他汀作为内标；在三重四极杆串联质谱仪上，采用大气压化学离子化（APCI），正离子方式选择性离子模式进行监测；血浆浓度在0．05～50ng·mL^-1线性关系良好，定量限为10Pg·mL^-1，日内、日间精密度分别在95．97％～104．43％，RSD在4．63％～10．69％。本文利用该方法对大鼠进行药代动力学研究，3个剂量（2．5、5和10mg·kg^-1）大鼠灌胃给药后的药代动力学参数分别为T1/2（11．28±7．23）、（8．90±3．82）、（8．01±5．65）h；AUC0-∞：（103．41±61．46）、（190．23±74．99）、（421．66±229．20）ng·h·mL^-1；MRT：（6．31±0．75）、（5．98±0．71）、（6．18±0．97）h；CL／F：（30．10±13．67）、（29．58±10．59）、（31．18±17．51）L·h^-1·kg^-1；F1／F：（414．94±159．82）、（356．16±139．85）、（369．28±322．72）L·kg^-1.

LC-APCI-MS／MS法测定大鼠尿液和胆汁中的BAPTA-AM浓度

目的：建立液相色谱-大气压化学离子化-串联质谱联用（LC-APCI-MS／MS）法测定大鼠尿液和胆汁中的BAPoTA-AM浓度。方法：尿液和胆汁样品经乙腈沉淀去蛋白，离心后取上清液进行LC-APCI-MS／MS分析。色谱柱：Zorbax C18柱（150mm×4．6mm，5μm）；流动相：含0．5％乙酸和75％甲醇的水溶液；流速：1mL／min。大气压化学离子化（APCI）离子源，以选择离子反应检测（SRM）方式进行检测。用于定量分析的检测离子对分别为：m／z 765．15→647．25（BAPTA-AM）和m／z 419．10→343．05（内标，尼莫地平）。结果：尿液和胆汁中BAPTA-AM在0．25-50n异／mL范围内线性关系良好，回收率大于90％，定量下限为0．25ng／mL．批内与批间RSD均小于10％。结论：建立的LC-APCI-MS／MS法符合生物样本测定要求，可用于大鼠静脉给予BAPTA-AM脂质体后，大鼠尿液和胆汁中BAPTA-AM浓度的测定。

LC-APCI-M/SMS测定全血中苯妥英钠的含量

目的：建立了LC-APCI-MS/MS法测定全血中苯妥英钠的血药浓度。方法：采用Zorbax Eclipse XDB-C18（4.6×150 mm,5μm）色谱柱,流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液（50：50）。大气压喷雾离子源（APCI）,正离子检测,采用多反应监测方式进行定量分析,检测离子为m/z 253→182（苯妥英钠）,m/z 316→270（内标氯硝西泮）。结果：全血中苯妥英钠浓度在4～2400 ng/ml范围内线性关系良好,最低检测限为2 ng/ml。苯妥英钠的萃取平均回收率为71.45%～87.27%,日内及日间RSD都低于6%。结论：该法操作简便、快速、灵敏度高,可用于苯妥英钠的临床毒物分析。

HPLC-APCI(+)MS/MS内标法测定水产品中的3种硝基咪唑类药物残留量

建立了水产品中3种硝基咪唑类残留量的HPLC-APCI(+)MS/MS测定方法。以氘代二甲硝唑(DMZ-D3)作为内标,以乙酸乙酯提取水产品中残留的硝基咪唑类药物,采用HPLC-MS/MS多反应监测(MRM)正离子模式测定,可一次对水产品中的MTZ、DMZ和RNZ进行定性和定量。该法简便快捷,适合大批量样品处理。方法简化了样品前处理过程,省去固相萃取步骤,具有操作简便和有机试剂消耗量少等优点。DMZ、MTZ和RNZ的检出低限均为0.5μg/kg,DMZ、MTZ和RNZ的定量下限均为1.0μg/kg。

HPLC/APCI/MS法测定水果中6-苄基腺嘌呤

建立了高效液相色谱-质谱联用测定水果中6苄基腺嘌呤残留的方法。样品用酸化甲醇提取,以ZorbaxSBC18柱(150mm×4.6mm×5μm)分离,以甲醇+0.1%醋酸(75+25)为流动相。质谱检测采用了大气压化学电离(APCI)离子化技术和选择离子检测(SIM)模式,定量检测离子m/z226[M+H]+,线性范围为0.05～2.0mg/L,检测下限为0.0025mg/kg,平均回收率为94.0%,RSD小于10%。LC/MS法不仅快速方便,而且比LC/UV法灵敏度高近20倍。用于实际样品的检测,结果满意。

NIX和LC3-Ⅱ在成年牦牛不同脑组织中的表达与定位分析

为了探讨牦牛(Bos grunniens)脑组织低氧适应性,选择成年(3~5岁)牦牛脑组织,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、免疫组织化学技术及免疫荧光技术检测低氧诱导因子2α(HIF2α)与促凋亡BNIP3L蛋白(BNIP3L/NIX)和微管相关蛋白轻链3(LC3-Ⅱ)在大脑皮质、海马、丘脑、延髓和小脑中的表达与定位情况,并用半胱氨酸天冬氨酸酶3(Caspase-3)检测脑组织中细胞的凋亡水平。qRT-PCR和免疫组织化学光密度分析结果显示,成年牦牛大脑皮质和海马的HIF2α、NIX、LC3-ⅡmRNA和蛋白水平显著高于丘脑、延髓及小脑(P<0.05),另外Caspase-3 mRNA和蛋白水平在五个部位之间无显著差异。免疫组化镜下观察发现HIF2α阳性反应表达于神经元胞核及胞质,而NIX、LC3-Ⅱ和Caspase-3阳性反应均集中在细胞质,且上述四个因子主要分布于大脑皮质的多形细胞层和海马的CA区锥体细胞层,另外,在丘脑、延髓和小脑神经元中均有表达。免疫荧光结果显示,HIF2α、NIX、LC3-Ⅱ与神经元核抗原抗体NeuN在上述各部位神经元细胞共定位,Caspase-3荧光强度较弱。以上结果表明,海马和大脑皮质可能更容易受到低氧刺激;另外,HIF2α的表达可能促进NIX和LC3-Ⅱ的表达,降低Caspase-3表达水平,从而使牦牛大脑和海马适应高原环境。本试验为深入研究牦牛中枢神经系统的低氧适应机制提供了基础数据。

Salubrinal对大鼠脑缺血再灌注模型LC3-Ⅱ mRNA及LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA的影响

目的探讨Salubrinal对大鼠脑缺血再灌注模型LC3-ⅡmRNA及LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA表达的影响。方法用线栓法建立大鼠大脑中动脉脑缺血(MCAO)缺血再灌注模型。大鼠随机分为假手术组、模型组、Salubrinal组(Sal组),各组又分为再灌6、12、24、72 h 4个亚组。各组于再灌相应时间点行神经功能缺损评分,并断头取脑行HE染色及Real time-PCR检测。结果神经功能缺损:与假手术组比较,模型组、Sal组各时间点均有神经功能缺损(P<0.01);与模型组比较,再灌24、72 h Sal组神经功能缺损评分降低(P<0.05)。HE染色:模型组神经元减少、缺失,细胞肿胀,部分破裂,细胞核固缩、偏移、深染,胶质细胞增生,经Salubrinal干预后,再灌各时间点神经元增多,胞膜较完整,核固缩现象较轻,水肿轻微。Real time-PCR检测:与假手术组比较,模型组、Sal组各指标于再灌各时间点均增高(P<0.01)。与模型组比,Sal组LC3-ⅡmRNA表达于再灌12、24、72 h下降明显(P<0.05);Sal组LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA于再灌后各时间点下降均明显(P<0.01)。结论 Salubrinal通过下调LC3-ⅡmRNA及LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA比值,对大鼠脑缺血再灌注损伤起保护作用。

LC-MS/MS同时检测烟草中的6种杀菌剂

为测定烟草中的杀菌剂残留量，利用液相色谱-串联质谱（LC—MS／MS）建立了一种同时检测烟草中6种杀菌剂的方法：烟草样品提取液经处理后，在AtlantisdC18柱上以乙腈-水（含0．1％甲酸）为流动相进行分离，用LC—MS／Ms在多反应监测（MRM）模式下测定，内标法定量。采用该方法测定了145个国内外烟草样品中6种杀菌剂农药的残留量。结果表明：①6种杀菌剂线性范围是5～200ng／mL，线性关系良好限。〉0．999），平均回收率为85．3％～118．8％，相对标准偏差（RSD）小于7．7％，定量限在0．007～0．033mg／kg之间。②所测样品中，有52个烟叶和30个卷烟样品中未检出任何杀菌剂农药，分别占所选烟叶和卷烟样品数的52％和66．7％；在6种杀菌剂农药中，除苯茵灵未检出外，其他5种农药均有检出。该方法适用于烟草及烟草制品中6种杀菌剂残留的快速检测。

Beclin-1、LC3-Ⅱ在缺血后处理大鼠再灌注中的表达及意义

目的研究自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ在缺血后处理大鼠脑缺血再灌注海马中的表达及意义。方法根据Zea-Longa线栓法制作大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,将实验动物随机分为3组:假手术组、缺血再灌注组、缺血后处理组,缺血后处理组再按不同缺血后处理时间分为15 s、30 s、1 min 3个亚组。缺血2 h再灌注24h后用免疫组织化学法检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达情况,透射电镜观察神经细胞中自噬和溶酶体的激活以及细胞超微结构的变化。结果与缺血再灌注组相比,缺血后处理组神经行为学评分明显降低(P<0.05),脑梗死体积明显减小(P<0.01),Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达细胞数明显增加(P<0.01),自噬体形成和溶酶体激活量增加;缺血30 s亚组相比较15 s和1 min亚组上述指标(神经行为学评分除外)(P>0.05),差异亦有显著性(P<0.01)。结论脑缺血后处理的抗缺血再灌注损伤作用可能与上调自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达有关。

HPLC-MS法鉴定甘草的指纹图谱

目的:对甘草液相色谱指纹图谱主要色谱峰进行定性,了解甘草甲醇-水提取物的化学成份。方法:测定甘草甲醇提取物的HPLC-DAD及HPLC-MS指纹图谱。结果:结合文献对指纹图谱主要色谱峰进行鉴定,推断出17个色谱峰中19个可能的成分。结论:本研究给甘草质量评价等各类研究提供较全面的化学依据。

自噬相关蛋白LC3-Ⅱ在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

目的本研究检测微管轻链Ⅰ蛋白3-Ⅱ型(LC3-Ⅱ)在不同卵巢肿瘤组织中的表达情况,探讨其与浆液性卵巢癌及粘液性卵巢癌发生、发展的相关性和意义。方法选取204例上皮性卵巢肿瘤标本,其中,卵巢浆液性囊腺瘤46例,交界性浆液性肿瘤28例,浆液性囊腺癌40例,黏液性囊腺瘤32例,交界性黏液性囊腺瘤30例,黏液性囊腺癌28例,另选取正常卵巢上皮组织28例作为对照。使用SP法检测正常卵巢上皮组织、上皮性卵巢肿瘤组织中LC3-Ⅱ的表达,并结合浆液性癌、黏液性癌临床病理因素进行分析。结果1正常卵巢上皮中LC3-Ⅱ无表达,卵巢良性浆液性囊腺瘤、交界性浆液性肿瘤及浆液性癌中LC3-Ⅱ的阳性率分别为4.5%、71.0%、95.0%,交界性浆液性肿瘤和浆液性癌中LC3-Ⅱ的表达明显高于良性浆液性囊腺瘤,差异有统计学意义(P<0.01)。卵巢良性黏液性囊腺瘤、交界性黏液性肿瘤及黏液性癌中LC3-Ⅱ的阳性率分别为6.7%、66.7%、92.9%,交界性浆液性肿瘤和浆液性癌中LC3-Ⅱ的表达明显高于良性浆液性囊腺瘤,差异有统计学意义(P<0.01);2在40例卵巢浆液性癌、28例卵巢黏液性癌中,LC3-Ⅱ表达与患者年龄、FIGO分期及病理学分级等临床病理特征均无关。结论 LC3-Ⅱ在卵巢上皮性交界性肿瘤、癌中表达增高,自噬活性增强,可能与卵巢上皮性恶性肿瘤的进展有关。

HPLC及LC-MS法测定全血中青霉素

青霉素(penicilin G)属于青霉素类杀菌剂药物,极易溶于水,在甲醇、乙醇中溶解,在脂溶性溶剂中不溶解.易吸潮,遇酸、碱或氧化剂等迅速失效,水溶液也易分解.人体肌注后15～30 min血浓度达到高峰值,有60%～90%原形物从肾脏中排出.青霉素毒性很小,人类即使使用大剂量也难以中毒,但是青霉素肌内注射、输液常引起过敏,并导致死亡.……

五味温通除痹胶囊对佐剂性关节炎大鼠自噬蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响

目的明确五味温通除痹胶囊(桂枝、茯苓、淫羊藿,等)对佐剂性关节炎大鼠自噬蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响,探讨其防治类风湿关节炎的可能机制。方法雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、五味温通除痹胶囊(0.80、1.60、3.20 g/kg)组、阳性药雷公藤多苷片(40 mg/kg)组,每组10只。除正常组外,采用弗氏完全佐剂诱导佐剂性关节炎大鼠模型。致炎后第12天灌胃给药,连续12 d。实验结束后,取非致炎侧踝关节,HE染色观察病理学改变,实时定量荧光PCR测定滑膜组织中Beclin-1、LC3-ⅡmRNA的表达,免疫荧光组织化学染色和Western blot法检测滑膜组织中Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白的表达。结果与模型组相比,五味温通除痹胶囊(1.60、3.20 g/kg)不仅可减轻佐剂性关节炎大鼠关节病理损伤程度,还可显著升高Beclin-1、LC3-ⅡmRNA和蛋白的表达水平。结论五味温通除痹胶囊对佐剂性关节炎大鼠具有一定的治疗作用,其机制可能与促进细胞自噬,减少滑膜细胞的过度增殖,从而减轻关节软骨损伤有关。

生物检材中59种滥用药物的LC-MS/MS-MRM分析

针对滥用药物分析鉴定实践中急待解决的问题，建立生物检材中59种滥用药物的液相色谱-串联质谱-多反应监测（LC-MS／MS-MRM）分析方法。生物检材包括血液、尿液和毛发等，样品前处理简便、快速。建立LC-MS／MS数据库和定性认定准则，方法包括筛选和确证分析，筛选方法的LOD在0．1～10ng／mL范围，其中73％目标物的LOD≤0．1ng／mL。方法的应用范围广、特异性强、灵敏度高，并且已在实践中得到了验证。

自噬相关基因Atg4B及LC3-Ⅱ在肌萎缩侧索硬化症转基因鼠海马中的表达及意义

目的观察自噬相关基因Atg4B及LC3-Ⅱ在肌萎缩侧索硬化症(ALS)转基因鼠海马组织中的表达变化,探讨细胞自噬机制在ALS发病中的作用及意义。方法选择SOD1-G93A转基因鼠进行试验,分别于发病早、中、晚期,通过RT-PCR、免疫荧光检测小鼠海马组织中Atg4B、LC3-Ⅱ在m RNA、蛋白水平的表达及变化。结果与野生型鼠相比较,转基因鼠的Atg4B在m RNA及蛋白水平表达均下调;LC3-Ⅱ在蛋白水平表达上调,在m RNA水平变化不明显。结论自噬相关基因Atg4B及LC3-Ⅱ参与了ALS发病,ALS海马组织的病变与自噬异常有关。

α-硫辛酸对糖尿病肾病自噬相关因子LC3、Rab7和Beclin1表达的影响

目的:研究α-硫辛酸对糖尿病肾病(DN)自噬相关因子LC3、Rab7和Beclin1表达的影响。方法:2型糖尿病肾病Ⅲ期患者110例,其中55例常规治疗为对照组,55例患者在常规治疗的基础上加用硫辛酸治疗为研究组;建立DN模型大鼠,对比硫辛酸治疗的DN患者和DN模型组大鼠Scr、BUN水平和肾脏组织中LC3、Rab7和Beclin1的表达的影响。结果:治疗后两组患者Scr和BUN均显著降低(P<0.05),且研究组患者治疗后Scr和BUN均显著低于对照组患者(P<0.05),肾脏组织中LC3、Rab7和Beclin1蛋白表达均显著高于对照组(P<0.05);DN模型大鼠经硫辛酸治疗后,Scr和BUN均显著降低(P<0.05),肾脏组织中LC3、Rab7和Beclin1基因表达显著升高(P<0.05)。结论:α-硫辛酸对糖尿病肾病肾脏的保护作用可能通过促进肾脏中自噬相关因子LC3、Rab7和Beclin1的表达有关。

梳状亲水性环氧基载体固定化Pseudomonas stutzeri LC2-8脂肪酶

以氯乙酰化聚苯乙烯微球(PS-acyl-Cl)为引发剂,亲水性丙烯酰胺(AM)和甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)为单体,CuCl及联吡啶(Bipy)为催化体系,通过原子转移自由基聚合反应(ATRP)制备得到梳状亲水性环氧基柔性载体(PS-acyl-P(AM-co-GMA)),通过改变AM与GMA配比,使载体环氧基含量和亲水性得到控制。用该柔性载体固定Pseudomonas stutzeri LC2-8脂肪酶,优化了固定化条件,并对柔性固定化酶性质进行考察。结果显示,当n(AM):n(GMA)=20:60,固定化时间为24 h,固定化温度为30℃,固定化pH为7.0时,固定化酶活力达到最高,为24.1U g 1。固定化酶的最适pH为8.0,最适温度为30℃,其热稳定性比游离酶高,重复使用8次,剩余酶活力80%左右。以上表明,以ATRP法合成的载体PS-acyl-P(AM-co-GMA)可成功用于脂肪酶的固定化,有效提高脂肪酶的稳定性和实用性。

Beclin-1、LC3-Ⅱ在宫颈病变组织中的表达及意义

目的检测Beclin-1、LC3-Ⅱ在宫颈病变组织及HPV感染中的表达,并探讨其临床意义。方法选取昆明医科大学第二附属医院妇科2014年10月至2016年6月的行宫颈癌筛查(HPV、TCT)的患者,筛查结果任意一项异常患者均行宫颈活检,最终选取病检结果为正常的宫颈组织40例(其中HPV感染20例,无HPV感染20例);CINⅠ30例;CINⅡ/Ⅲ30例;年龄范围为25～55岁;妊娠及已行宫颈治疗过的患者不纳入研究范围。用Western Blot法检测正常宫颈组织、CINⅠ及CINⅡ/Ⅲ组织中Beclin-1、LC3-Ⅱ相对表达量。结果 (1)Beclin-1在正常的宫颈组织、CINⅠ及CINⅡ/Ⅲ组织中的相对表达量分别为(0.561±0.041)、(0.421±0.018)、(0.351±0.016);LC3-Ⅱ在正常宫颈组织、CINⅠ及CINⅡ/Ⅲ组织中的相对表达量为(0.683±0.027)、(0.435±0.029)、(0.325±0.017);Beclin-1、LC3-Ⅱ在3组间的相对表达量差异有统计学意义(P <0.001);Beclin 1,LC3-Ⅱexist in the relative expression between the 3 group were statistically significant (P <0.001)(2)病检结果为正常的宫颈组织中HPV感染组中Beclin-1和LC3-Ⅱ的相对表达量均显著低于无HPV感染组(P <0.05)。结论随着宫颈病变级别的增加,自噬相关基因Beclin-1、LC3-Ⅱ的相对表达量呈下降趋势,提示自噬基因活性下降或缺失可能参与宫颈癌的进展。