基于LC-MS/MS测定人体类固醇激素的研究进展

类固醇激素是一类具有环戊烷多氢菲结构的化合物,由细胞色素P450酶催化形成,在调节机体代谢、促进性器官发育等方面起着重要作用。临床上将类固醇激素水平作为肾上腺疾病、精神类疾病等的诊断指标。液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)联用技术因具有高灵敏度、高通量和高专属性的特点,已成为类固醇临床测定的首选方法。本文综述了LC-MS/MS在内源性类固醇激素测定中的应用,特别是在样品前处理、色谱条件和质谱条件优化等方面的研究进展,为临床上类固醇激素的诊断检测提供参考。

全二维液相色谱(NPLC×RPLC)接口及其应用

用内径为0.53mm的填充毛细管正相液相色谱为第一维,用4.6mm(i.d.)×50mmRP-18e整体柱反相色谱为第二维,建立了定量环-阀切换接口的全二维液相色谱系统(NPLC×RPLC).第一维色谱分离洗脱出的组分交替存储在十通阀上的两个定量环中,同时定量环中前一个组分被转移到第二维进行反相分离.因为第一维的流动相流量仅是第二维的1/500,自然解决了流动相兼容问题.采用芳香族化合物的混合物和中药丹参正己烷提取液对该全二维液相系统的分离能力进行了评价.

在线LC-GC联用接口技术

综述了在线ＬＣ－ＧＣ技术的接口形式和工作原理。

LC-MS/MS检测尿液类固醇激素在疾病研究中的应用

内源性类固醇激素具有维持新陈代谢、调节性功能等多种生理作用。其种类较多,且相关标志物的精确定量在内分泌及相关代谢性疾病的筛查与诊断中具有重要意义。液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术因灵敏度高、特异性强、可同时检测多种物质等特点在临床类固醇激素检测领域显示极大潜力。尿液区别于其他复杂生物基质,具有无创收集、前处理简单、代谢产物丰度较高、24 h尿排泄浓度稳定等优势。相比于临床应用较为广泛的血清类固醇激素定量研究,尿液类固醇激素的临床定量研究正逐步展开,尚缺少整体性综述。本文简要综述了近年来尿液类固醇激素测定领域的LC-MS/MS技术及临床应用,旨在进一步揭示基于LC-MS/MS技术的尿液类固醇激素检测在临床研究中的意义。

NPLC×RPLC二维液相色谱系统分离分析牛黄解毒片提取物成分的实验研究

构建了定量环-阀切换接口的二维液相色谱系统(NPLC×RPLC),采用此系统对牛黄解毒片样品进行分离分析,以4.6mm×50 mm i. d.的SiO_2正相色谱柱为第一维,4.6mm×250 mm i. d.的C18反相色谱柱为第二维。根据有机溶剂的特征,在第一维正相色谱流动相中加入1,4—二氧六环;第二维反相色谱流动相中加入异丙醇,同时通过升高第二维色谱温度的方法增加两维流动相间互溶性,在改善流动相兼容性的同时,有效调整分离选择性。最终,通过总共440min的七次切割共检测出了153个峰,达到950的峰容量。

LC-MS法同时测定3种脑立清制剂中6种甾体

目的建立LC-MS法同时测定脑立清丸、脑立清胶囊、脑立清片(磁石、赭石、牛膝等)中β-蜕皮甾酮、25 R-牛膝甾酮、25 S-牛膝甾酮、牛磺猪去氧胆酸、甘氨猪去氧胆酸、甘氨鹅去氧胆酸的含量。方法3种制剂内标(黄芪甲苷)提取液的分析采用Waters ACQUITY UPLC HSS C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm);流动相乙腈(含0.1%甲酸)-水(含0.1%甲酸),梯度洗脱;体积流量0.4 mL/min;柱温40℃;电喷雾离子源;正离子检测;多反应监测模式。结果3种制剂中6种甾体在各自范围内线性关系良好(r>0.9990),平均加样回收率分别为99.06%~104.19%、99.08%~103.78%、99.24%~103.38%,RSD分别为1.35%~4.68%、0.94%~4.54%、1.23%~2.91%。16家厂家88批样品中各甾体含量差异明显。结论该方法简便准确,重复性好,专属性强,可用于3种脑立清制剂的质量控制。牛膝、猪胆粉质量应引起关注。

LC-MS和LC-NMR在中药三萜和甾体类成分快速鉴定中的研究进展

三萜和甾体类化合物作为具有多方面生物活性的化学成分,一直是中药活性和质量控制研究的重点。文章对近十年运用LC-MS和LC-NMR联用技术鉴定、分析中药中三萜类和甾体类成分的前沿方法进行综述。两种联用技术的特点是将HPLC的高效分离能力和MS、NMR精确的结构表征能力巧妙结合起来,方法更具选择性和灵敏性。与此同时,笔者讨论了LC-MS和LC-NMR在中药三萜和甾体结构指认中的适用性并进行了展望,期望为实现中药中复杂成分结构的快速鉴定提供借鉴。

龙胆泻肝丸的NPLC×RPLC二维液相色谱分析

目的：构建定量环-阀切换接口的二维液相色谱系统（NPLC×RPLC），并使用此系统对龙胆泻肝丸样品进行分离分析。方法：以4．6mm×50mmi．d．的ZORBAXRx—SIL正相柱为第一维，4．6mm×250mmi．d．的ZORBAXExtend—C18反相柱为第二维，在第一维正相色谱流动相中加入二氧六环；第二维反相色谱流动相中加入异丙醇的方法增加两雏流动相间互溶性。结果：应用此系统对龙胆泻肝丸进行分析，通过十次切割共检测出了577个峰，峰容量达到了990。结论：构建的全二维液相色谱（NPLC×RPLC）系统能充分发挥正相色谱与反相色谱的色谱保留相关性低的特点。取得较好的分离分析效果。

动物尿液中15种甾类同化激素的液相色谱-串联质谱同时测定

采用液相色谱-电喷雾串联质谱仪（LC-ESIMS/MS）,在多反应监测（MRM）模式下建立了动物尿液中15种甾类同化激素（睾酮、孕酮、诺龙、甲基睾酮、丙酸睾酮、丙酸诺龙、苯丙酸诺龙、大力补、勃地龙、群勃龙、康力龙、醋酸群勃龙、甲炔诺酮、甲羟孕酮、醋酸甲羟孕酮）的快速确证测定方法。试样经酶解处理后,过C18固相萃取柱净化,氮吹至干,残余物用0.50 mL乙腈-水（体积比1∶1）溶解后测定。采用正离子扫描方式进行仪器方法学研究,确定监测离子对,进行MRM模式定性定量分析。该方法的检出限（LOD）为0.2～0.5μg/L,定量下限（LOQ）为0.5～1.0μg/L;在2.0～200.0μg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.998。在1.0、5.0μg/L的添加水平上,上述15种激素的平均回收率为59%～118%,相对标准偏差为1.0%～11.2%。该法操作简单,灵敏度高,可用于动物尿液中15种甾类同化激素的测定。

液相色谱-串联质谱结合谱库检索法同时测定猪组织中12种类固醇激素

建立了猪组织中12种类固醇类激素(炔诺酮、雄诺龙、醛固酮、去氢睾酮、达那唑、去氢甲睾酮、甲基睾丸酮、诺龙、孕酮、康力龙、睾酮和丙酸睾酮)多残留的液相色谱-四极杆/线性离子阱串联质谱(QTrap LC-MS/MS)的检测方法。组织样品经β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶酶解提取,混合型强阳离子交换固相萃取小柱(MCX柱)净化后,以含0.1%(体积分数)甲酸的乙腈和水为流动相,经Venusil MP C18色谱柱(100mm×2.1mm,3μm)分离,按照多级反应监测(MRM)、信息相关采集(IDA)、增强子离子扫描(EPI),结合建立的12种类固醇类激素的标准谱图库检索的多步模式进行分析。结果表明,12种类固醇激素的线性范围为0.5～100.0μg/L,线性相关性良好(r>0.99);样品在5.0μg/kg添加水平下的平均回收率为72.0%～98.1%,相对标准偏差为3.1%～12.5%;方法检出限(S/N=3)为0.2～0.5μg/kg。实际样品检测结果表明,应用本方法可以实现对猪组织样本中类固醇类激素残留的定性定量分析,且具有灵敏、准确的特点。

固相萃取-液相色谱串联质谱同时测定牛奶中8种甾类同化激素多残留

采用固相萃取-液相色谱串联质谱仪(SPE-LC/MS),建立牛奶中8种同化激素(睾酮、孕酮、诺龙、甲基睾酮、勃地龙、群勃龙、美雄酮、康力龙)多残留的快速测定方法。样品经叔丁基甲醚提取,过C18固相萃取柱净化,氮吹至干,残留物用10%甲醇-水(10:90,V/V)溶解后测定。采用正离子扫描方式进行仪器方法学研究,确定监测离子对,进行MRM模式定性定量分析。该方法的检出限(LOD)为0.2～0.5μg/L,定量限(LOQ)为0.5～1.0μg/L;在2.0～200.0μg/L范围内线性关系良好(r>0.9990)。在1.0～5.0μg/L的添加水平上,8种激素的平均回收率在59.1%～97.7%之间,相对标准偏差(RSD)为3.2%～11.9%。该法操作简单、灵敏度高,可用于牛奶中8种甾类同化激素的测定。

二维液相色谱技术在药物分析中的应用

二维液相色谱联用(2D-LC)技术作为一项新的分析技术,已在复杂样品的分离分析中发挥了巨大作用。2D-LC提供了一个真正的正交分离系统,使其分辨率达到最大。它把分离机理不同而又互相独立的两支色谱柱以串联方式结合组成二维液相色谱,在这两支色谱柱之间的接口起捕集再传送的作用。本文简单介绍了该技术的原理和方法,并对其在天然药物和体内药物分析中的应用进行了总结分析。

液相色谱-串联质谱法测定尿液中的内源性类固醇激素

建立了液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）测定尿液中的内源性类固醇激素的方法。尿样经葡萄糖醛酸甙酶酶解后进行液-液提取,以甲醇-0.1%甲酸缓冲液（含0.02mol/L乙酸铵）（体积比为68∶32）为流动相,采用CosmosilC18色谱柱分离,并以三重四极杆串联质谱多反应监测扫描方式对尿样中的脱氢表雄酮（DHEA）、睾酮、表睾酮、雄酮和苯胆烷醇酮等5种激素进行检测。方法的最低检出限为0.01-10ng/mL,平均回收率为96.7%-106.5%,日内和日间相对标准偏差（RSD）分别小于7%和11%。应用所建立的方法测定了健康志愿者口服DHEA后尿液中内源性类固醇激素的变化情况,结果表明该方法样品处理简便,色谱分离完全,结果准确可靠,可替代气相色谱-质谱法用于体液中内源性类固醇激素兴奋剂的常规分析。

液相色谱-四极杆/离子阱质谱同时确证和测定肌肉中16种同化甾体激素残留

采用液相色谱-四极杆/离子阱质谱(LC-Q/Trap-MS)建立了肌肉中16种同化甾体激素类物质(ASs)残留的同时确证及测定方法。肌肉中的ASs采用乙腈超声辅助提取,正己烷脱脂,氨基固相萃取柱净化,CAPCELL PAK C18MGⅢ柱(150 mm×2.0 mm,5.0μm)分离,0.1%(v/v)甲酸-乙腈溶液和0.1%(v/v)甲酸-5 mmol/L甲酸铵水溶液为流动相梯度洗脱;预设定多反应监测(sMRM)-信息依赖性采集(IDA)-增强子离子扫描(EPI)模式检测,在线EPI谱库确证,内标法定量。结果表明,16种ASs在线性范围内线性关系良好(r≥0.999);定量限(LOQ,S/N≥10)为0.029～0.36μg/kg;3个添加水平(0.5、2.0和20μg/kg)下的回收率为89.9%～118%;相对标准偏差(RSD)为6.3%～16.2%。该方法准确灵敏,一次性完成16种ASs的确证和测定,可有效用于肌肉组织中ASs残留的监测分析。

二维液相色谱接口技术

二维液相色谱具有峰容量大、分辨率高、分析速度快等优点,已经成为复杂样品分离分析的重要工具。两种分离模式的转换通常需要经过一个特殊接口来完成,接口是二维液相色谱系统的核心,也是限制二维液相色谱应用的瓶颈;两种流动相不互溶时,接口尤为重要。本文针对二维液相色谱接口技术近期的发展和应用进行总结。引用文献51篇。

液相色谱-串联质谱法检测血清中15种甾体激素的动态变化

建立了用液相色谱-串联质谱检测血清中15种甾体激素的方法。在血清样品中加入含内标的乙腈沉淀蛋白质后,用100 mmol/L盐酸羟胺衍生,经Agilent-C18柱(50 mm×3.0 mm,2.7μm)分离,内标法定量。质谱分析采用电喷雾电离(ESI)正离子扫描,多反应监测(MRM)模式检测。数据显示,13种激素在0.05~20 ng/mL范围内线性关系良好(相关系数(R2)不小于0.995 6),检出限不大于1 ng/mL;皮质醇及脱氢表雄酮硫酸酯在50~2 000ng/mL范围内线性关系良好(R2不小于0.997 9),检出限不大于0.5 ng/mL。将该方法应用于女性月经周期激素变化规律的研究,结果表明,15种甾体激素在一个完整的月经周期内有不同特征的动态变化,其中雄激素在滤泡期的后期达到最高值,孕(雌)激素在黄体期达到最高值,而皮质激素则波动不明显。该方法灵敏度高、重复性好,为临床诊疗提供了参考。

液相色谱串联质谱法检测马尿中32种蛋白同化激素

目的：建立马尿中32种蛋白同化激素的液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）检测方法。方法：利用Agilent 6410A LC-MS/MS仪器;色谱柱采用Agilent Zorbax XDB-C18柱（2.1×100 mm,3.5μm）;流动相采用0.1%甲酸水溶液（A）和乙腈（B）进行梯度洗脱;离子检测方式为多反应离子检测（MRM）;正离子检测。结果：建立了马尿中32种蛋白同化激素的检测方法,药物浓度线性方程的相关系数均大于0.992,日内和日间精密度基本小于20%,提取回收率在84%以上且基质效应多在80%~120%之间,LOD和LOQ满足相关马术检测机构的要求。结论：本方法操作简单,经方法学验证符合相关标准,能满足马术项目的兴奋剂检查要求,可以应用于常规的兴奋剂检测。

胡芦巴来源的甾体皂苷研究进展

中药胡芦巴是豆科一年生草本植物胡芦巴(Trigonella foenum-graecum L.)的干燥种子,富含甾体皂苷。本实验室对胡芦巴中甾体皂苷进行了系统研究,包括原生呋甾皂苷及其酶解产物的分离鉴定、利用液质联用技术对甾体皂苷类成分的快速表征与结构分析,以及利用超临界流体色谱技术对螺甾皂苷C-25R/S异构体的分析、制备分离等。本文对本实验室相关研究进行总结,以期有助于胡芦巴的开发与利用,也为今后中药的化学成分研究工作提供借鉴。

液相色谱-电喷雾电离质谱法检测尿液中的3种合成类固醇药物

研究建立了合成类固醇药物群勃龙、四氢孕三烯炔酮和孕三烯酮的液相色谱-电喷雾质谱的检测方法。尿样经过β-葡萄糖醛酸酶酶解和叔丁基甲醚提取后,采用Zorbax SB-C18分析柱(150mm×2.1mm,5μm),在流动相为pH3.5的甲酸铵缓冲液-乙腈的条件下进行梯度洗脱,在正离子模式下检测。考察了不同的质谱条件对这类化合物检测结果的影响。建立了人尿液中合成类固醇药物的液相色谱-电喷雾电离质谱的初筛和确证方法。

Influence of Mineral Admixtures on the Permeability of Lightweight Aggregate Concrete

The permeability of lightweight aggregate concrete was studied. Some efforts were taken to increase the resistance of lightweight aggregate concrete (LC) to water penetration by using the mineral admixtures of fly ash, granulated blast furnace slag or silica fume. Accelerated chloride penetrability test and liquid atmosphere press method were used to study the anti-permeability of lightweight aggregate concrete. The experimental results show that fly ash, granulated blast furnace slag and silica fume can decrease the permeability of lightweight aggregate concrete, but the effect of granulated blast furnace slag is poor. According to the SEM and pore structure analyzing results,an interface self-reinforcing effect model was presented and the reinforced mechanism of mineral mixture on LC was discussed according to the model described by authors.