基于LC-QTOF-MS代谢组学解析牛樟芝子实体和菌丝体中氨基酸代谢差异

为分析氨基酸在牛樟芝子实体和菌丝体代谢中的差异,采用LC-QTOF-MS系统质谱技术对牛樟芝子实体和菌丝体等3组样品进行代谢组分析,运用SIMCA软件(V16.0.2)对差异氨基酸代谢物进行筛选,分析重要氨基酸及其代谢途径,挖掘潜在标记物用于牛樟芝品种多样性和差异性分析。样品间主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)表明样品间在负离子条件下具有显著差异,在t检验P<0.05,VIP>1的条件下,牛樟芝子实体(ACFB)与液体培养14 d菌丝体(ACM-14)中有288个显著差异代谢物,其中主要差异氨基酸有15种;在ACFB与液体培养28 d菌丝体(ACM-28)中有332个显著差异代谢物,其中主要差异氨基酸有11种;ACM-14与ACM-28间存在283个显著差异代谢物,其中主要差异氨基酸有14种。牛樟芝子实体与菌丝体间氨基酸代谢差异大于菌丝体间,其中以L-精氨酸差异尤为显著。本研究为挖掘牛樟芝子实体、菌丝体氨基酸标记性代谢物和开发产品等提供理论参考。

基于LC/QTOF-MS/MS法鉴定兰考泡桐花化学成分

目的:初步鉴定兰考泡桐花中的化学成分,为该植物的药效物质基础研究提供数据支持。方法:运用液相色谱与四级杆飞行时间质谱联用技术(LC/QTOF-MS/MS),以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,在正离子模式下分析。结果:本研究从兰考泡桐花中共鉴定出12个化合物,其中通过与标准品的保留时间和化合物的特征碎片的比对,准确鉴定出5个化合物,分别为芦丁、野漆树苷、木犀草素、芹菜素和熊果酸。另外,通过标准品总结出的裂解规律及相关文献报道,初步鉴定出7个黄酮类成分。结论:本研究基于LC-QTOF/MS的方法对兰考泡桐花所含化学成分进行了表征,为泡桐属的同类植物的物质基础研究提供了有益参考。

基于LC-QTOF-MS代谢组学研究甲基苯丙胺临床戒毒分期

甲基苯丙胺的滥用已成为全球公共卫生安全的一大隐患。为了更加科学可靠的判断甲基苯丙胺成瘾和戒毒阶段,本研究采用液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱(LC-QTOF-MS)分析技术,对甲基苯丙胺成瘾者、戒毒康复者和健康人的血浆、血清和尿中的内源性代谢物进行分析。运用单变量和多变量统计分析处理数据,筛选符合条件的潜在生物标志物,将鉴定后的生物标志物进行代谢物富集分析,寻找代谢物与代谢途径之间的联系。多变量统计结果表明,甲基苯丙胺急性期组、康复期组和健康组3组聚类分离明显;在血清、血浆和尿液中分别鉴定出3,18和6个差异代谢物,提示甲基苯丙胺急性期组脂质代谢异常,康复期组脂肪酸代谢、硫酸盐/亚硫酸盐代谢和性激素代谢异常。本研究筛选出的潜在生物标志物,为甲基苯丙胺临床戒毒分期提供科学依据。

LC-QTOF MS/MS测定不同生长时期及不同初加工对裸花紫珠7种化学成分影响

探讨不同生长时期、初加工方式对裸花紫珠中木犀草素、芹菜素、槲皮素、齐墩果酸、熊果酸、原儿茶酸和咖啡酸的含量影响。选嫩叶、中叶、老叶、自然晒干、35℃、50℃和65℃烘干各裸花紫珠,超声70%甲醇提取,应用LC-QTOF MS/MS定量分析,SPSS 17差异分析。结果线性关系良好(R^2>0.99),嫩叶总含量最高(434.594 mg/kg),自然晒干总含量最高(436.62 mg/kg),P<0.05。

基于LC-QTOF的浓香型白酒蒸馏尾水成分研究

利用高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱联用(LC-QTOF)技术,主要分析尾水中的亲水性、难挥发性成分。将尾水样品经过简单的膜过滤处理,共解析出尾水样品中的65种成分。尾水中首次检出缬氨酸乙酯、亮氨酸乙酯、苯丙氨酸乙酯等氨基酸酯类化合物,同时检出具有生物活性的γ-氨基丁酸、环(脯氨酸-亮氨酸)、环(脯氨酸-苯丙氨酸)、四甲基吡嗪、阿魏酸等化合物,为尾水的应用价值提供了理论依据。

食品接触涂层中光引发剂迁移量测定方法研究

本研究比较了不同光引发剂在液相色谱-四极杆飞行时间质谱(LC-QTOF MS)和气相色谱-三重四极杆质谱(GC-MS/MS)中的响应灵敏度和稳定性,并依此建立了食品接触涂层中12种光引发剂迁移量的LC-QTOF MS测定方法和11种光引发剂迁移量的GC-MS/MS测定方法。对于LC-QTOF MS方法,采用酸化甲醇稀释样品后上机测试。采用Hypersil GOLD AQ色谱柱,以0.1%甲酸水-甲醇为流动相进行梯度洗脱,电喷雾离子源正离子(ESI+),多反应监测-高分辨(MRM HR)模式监测。方法检出限为0.002 5~0.01 mg/kg,回收率为60.9%~124%,相对标准偏差(RSD)为0.9%~11.6%。对于GC-MS/MS方法,采用正己烷萃取样品,萃取液上机测试。采用CD-5色谱柱,MRM模式监测。方法检出限为0.000 4~0.002 mg/kg,回收率为77.0%~128%,RSD为0.4%~8.1%。使用这2种方法检测13批次食品接触涂层样品的迁移液,其中在5份迁移液中检出光引发剂TPO和2,4-二乙基噻唑酮。本研究建立的方法前处理简单、灵敏度高,具有较好的准确性和精密度,适用于食品接触涂层制品中光引发剂的检测。

UPLC-MS/MS法分析固废中的二硝基甲苯磺酸盐

文章建立了液相色谱四级杆飞行时间质谱(LC-QTOF)进行高分辨质谱定性,并采用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)进行定量,对固废中的二硝基甲苯磺酸盐进行了分析检测。样品经过乙腈与水混合溶剂超声波辅助萃取,过滤后经过飞行时间质谱一级和二级质谱扫描定性,鉴定分子离子峰和主要碎片离子分别为260.9817、214.9882和123.0316。同时,采用UPLC-MS/MS进行定量分析,结果表明:在0.01~10μg·kg^(-1)范围内线性关系良好,方法检出限为0.06μg·kg^(-1),方法的加标回收率为83.6%~95.7%,样品相对标准偏差小于5.0%。结果显示,该方法的回收率与方法精密度良好,适用于固废中二硝基甲苯磺酸盐的定性与定量测定。

液相色谱-四极杆飞行时间质谱快速筛查洋葱中173种农药残留

应用液相色谱-四级杆飞行时间质谱(LC-QTOF/MS)建立了洋葱中173种农药的快速筛查方法。洋葱样品经含体积分数1%乙酸的乙腈溶液振荡提取,盐析离心,Carbon/NH2净化,在电喷雾全离子二级质谱扫描(All Ions MS/MS)正离子模式下采用LC-QTOF/MS进行检测。选择定性筛查时较为重要的离子个数选择模式,色谱共流出曲线相似度匹配得分(co-elution score)以及峰高阈值等参数进行了定性筛查方法的优化,最终确定了对采集结果进行分析的最佳筛查参数。同时,应用该方法对洋葱基质中173种农药的定性和定量方法学参数进行了考察。结果表明:167种农药的筛查限和定量限分别在0.001~0.005 mg/kg和0.001~0.01 mg/kg之间,其余6种的筛查限和定量限分别在0.01~0.025 mg/kg和0.02~0.05 mg/kg之间。所有化合物在测试浓度范围内线性关系良好。添加回收试验(n=5)结果显示,在1倍定量限(LOQ)、2倍LOQ和10倍LOQ 3个添加水平下,173种农药中分别有153、168和165种农药的平均回收率在70%~120%之间,相对标准偏差均在20%以内。将本研究建立的筛查方法应用于2020年欧盟组织的水果蔬菜中农药残留检测能力验证(EUPT-FV22),准确筛查出了组织方在洋葱样品中添加的农药,而且定量结果满意,表明本研究所建立的LC-QTOF/MS筛查方法准确、可靠,适用于洋葱中农药多残留快速筛查和准确定量。

超高压液相色谱—高分辨质谱联用仪检验血液中的米酵菌酸

本文建立了血液中米酵菌酸的LC-QTOF-MS检验方法。采用Kinetex C18(2.6μm,4.6X100mm)色谱柱,以水相A(0.1%(v/v)甲酸)和有机相B(乙腈)为流动相梯度洗脱,质谱采用电喷雾负离子全扫描模式,对血液中的米酵菌酸分析检验。方法回收率为87.06%~102%,线性回归方程为y=38.05x+35.219(R^(2)=0.9995),检出限为0.5ng·mL^(-1),定量限为5ng·mL^(-1)。

卡泊芬净及其杂质的LC-QTOF-MS定性分析

目的 采用LC-QTOF-MS分析醋酸卡泊芬净原料药及其强降解产物的杂质,研究卡泊芬净及其相关杂质(杂质A、B、C、D和E)的质谱特征。方法 采用WatersCORTECS^(■)C18^(+)(4.6 mm×150 mm,2.7μm)色谱柱,流动相A为0.1%甲酸-水溶液,流动相B为0.1%甲酸-乙腈,流速为0.6 mL·min^(–1),梯度洗脱;ESI-QTOF-MS正离子扫描检测。结果 在一级质谱中,除杂质D主要显示单电荷准分子离子峰外,卡泊芬净及其余4个杂质均以多电荷准分子离子峰的响应较高;在二级质谱中,卡泊芬净及其他含乙二胺结构的杂质均会丢失乙二胺及其所连基团产生碎片离子m/z 103 3;卡泊芬净及其相关杂质主要通过肽键的断裂生成一系列碎片离子,也可以通过丢失氨基酸残基中的羟基、酰基或氨基生成碎片离子;杂质A和杂质C分别显示高丰度的特征碎片离子m/z 137.070 8和m/z 77.071 1,可以与卡泊芬净及其他杂质区分。结论 卡泊芬净及其5个杂质均具有明显的质谱特征,研究结果可为卡泊芬净生产过程中可能出现的未知杂质的结构鉴定提供参考,以便及早发现生产工艺中的潜在问题,降低产品质量风险。

固相萃取-液相色谱-四极杆飞行时间质谱法快速筛查禽蛋及蛋制品中氟虫腈及其代谢物

建立了液相色谱-四极杆飞行时间质谱(LC-QTOF MS)测定禽蛋及蛋制品中氟虫腈及其代谢物的快速筛查方法。样品经酸性乙腈提取,PRiME HLB SPE柱净化,Poroshell 120 EC C18色谱柱(150 mm×3 mm,2.7μm)分离,以水-乙腈为流动相,梯度洗脱,负离子模式下测定,以乙虫腈为内标定量。实验中建立了一级精确质量和二级碎片离子质谱数据库,并且对4种禽蛋及蛋制品的基质效应进行了考察。结果表明,氟虫腈及其代谢物在0.1~5μg/L范围内线性关系良好,相关系数(r2)均大于0.99。方法的检出限(LOD,S/N>3)和定量限(LOQ,S/N>10)分别为0.2μg/kg和1μg/kg。在不同基质中,氟虫腈及其代谢物在1、2和5μg/kg的添加水平下平均加标回收率为82.6%~98.1%,相对标准偏差为3.8%~9.9%(n=6)。该方法有效消除了液相色谱-四极杆飞行时间质谱检测过程中的离子化抑制效应,灵敏度和准确度高,适用于鸡蛋、鸡蛋面、蛋糕和蛋黄酱中氟虫腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜和氟甲腈的快速筛查。

基于LC-QTOF MS/MS技术分析不同产地杜仲的差异化学成分

为了探讨生态环境对杜仲代谢物合成积累的影响,本文采用液相色谱-串联三重四级杆飞行时间高分辨质谱(LCQTOF MS/MS)结合多元统计分析技术对不同产地杜仲中化学成分差异性进行研究。通过二级串联质谱分析,对其质谱数据进行峰匹配、峰对齐、滤噪处理等,并进行特征峰提取;用主成分分析(PCA)和偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)进行数据处理;根据一级质谱精确质荷比和二级质谱碎片信息,结合软件数据库搜索、标准品比对及相关文献进行成分鉴定。结果显示,3个不同产地杜仲样品间的化学组成得到有效区分;初步鉴定出23个差异化学成分,其中14种共有差异化学成分呈现不同的变化规律。该结果为揭示生态环境对杜仲代谢物合成积累的影响规律提供基础资料。

在线二维液相色谱-四极杆飞行时间质谱法检测头孢噻吩钠的杂质谱

建立了在线二维液相色谱-四极杆飞行时间质谱检测头孢噻吩钠杂质谱的方法,有效地解决了流动相中含不挥发性磷酸盐的色谱系统不适合用于液相色谱-质谱快速鉴定杂质的难题。一维高效液相色谱(HPLC)以Symmetry C18为色谱柱,以磷酸盐缓冲液(pH 2.5)和乙腈梯度洗脱;二维以ACQUITY UPLC BEH C18为色谱柱,以0.1%(v/v)甲酸水溶液和0.1%(v/v)甲酸乙腈溶液梯度洗脱。以HLB C18为捕集柱,用0.1%(v/v)甲酸水溶液进行捕集和脱盐,采用正离子模式采集数据。对头孢噻吩钠中6个杂质进行了结构鉴定,对其来源进行了分析,并进一步确证了《中国药典》2010年版对头孢噻吩钠杂质A认定有误。采用本方法可以快速、简便、灵敏地对头孢噻吩钠杂质谱进行检测。

超高效液相色谱-飞行时间质谱联用分析清热凉血方中的化学成分

目的鉴定中药复方清热凉血方浸膏中成分,为其治疗银屑病的物质基础提供科学依据。方法采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用(LC-ESI-QTOF MS)仪分析。色谱柱:5 cm×2.1 mm,1.7μm BEH C18柱,流动相为0.1%的甲酸溶液(A)-0.1%乙腈溶液(B),流速为0.3 mL/min。采用负离子模式与方中主要的单味药对比判断色谱峰的来源药材,继而通过与来源药材化学成分进行精确分子量的对比鉴定化合物。结果样本中检测出30多种物质,共鉴定出22个中药成分,分别为柠檬酸/异柠檬酸(1)、没食子酸(2)、Mudanoside B(3)、儿茶素(6)、羟基芍药苷(7)、短叶苏木酚酸(8)、丹皮酚(10)、牡丹酚新苷(12)、白芍苷R1(13)、芍药苷(14)、鞣花酸(15)、没食子酰芍药苷(16)、五没食子酰葡萄糖苷(17)、Oldenlandoside I(18)、苯甲酰氧芍药苷(19)、牡丹皮苷C(20)、苯甲酰芍药苷(24)、三羟基-十八碳二烯酸(25)、Anguivioside B1/2(26)、三羟基-十八碳二烯酸/9-羟基十八烷二酸(29)、2-羟基-3-甲基蒽醌(30)。结论在清热凉血方主要化学成分中,丹皮酚、芍药苷、白芍苷R1与银屑病的发病机理相关,可能是其活性成分。

液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱和超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱用于检测牛肉中的刚果红

建立了牛肉中刚果红的检测方法。定性方法采用液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱对未知物进行质谱谱图库匹配,定量分析采用超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱。牛肉样品中的刚果红经液液萃取净化后,采用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18Rapid Resolution HD色谱柱(50mm×2.1mm,1.8μm)进行分离,流动相为95%(体积分数)甲醇,流速为0.2mL/min。AB 4000+三重四极杆质谱仪在电喷雾负离子化(ESI)及MRM模式下定量。结果显示,刚果红在0.03～1mg/L浓度范围内,线性关系良好(相关系数为0.999 8),精密度良好(RSD小于5%),回收率为88%～91%,检出限约为0.01mg/L。本方法快速简便,重现性好,可以为牛肉及其他肉制品中刚果红的定量提供良好的解决方案。

宠物饲料中药物及违禁添加物的分析研究

目前,市售的宠物饲料产品质量良莠不齐,一些生产商为追求经济利益,在宠物饲料生产过程中加入具有预防和治疗宠物疾病的兽药、违禁药物甚至人用药物等,以降低使用劣质产品原料以及不规范的生产加工过程中所引入的致病微生物等有害因子可能给宠物健康可能带来的风险,此外,还可能存在生产过程中使用的动物源性原料存在药物残留的风险。研究利用液相色谱-四级杆飞行时间质谱(LC-QTOF/MS)联用技术,建立了宠物饲料中227种药物及违禁添加物的筛查数据库,对市面上宠物饲料产品进行了筛查分析,并使用液相色谱-串联质谱对筛查到的药物进行了定量分析。结果发现,筛查的宠物饲料产品中有2批次存在药物,确定其种类和含量分别为恩诺沙星10μg/kg、土霉素10μg/kg。研究表明,目前宠物饲料存在一定的药物及违禁添加物非法使用风险。

基于LC-QTOF-MS/MS的西洋参皂苷类成分表征及其增强免疫力作用谱效关系研究

目的:研究西洋参皂苷类成分指纹图谱与其增强免疫力作用的谱效关系,确定药效物质。方法:采用LC-QTOF-MS/MS建立西洋参皂苷类成分指纹图谱,并进行定性、相对定量分析;以斑马鱼为模式生物测定西洋参增强免疫药效指标值;采用灰色关联度及偏最小二乘相关分析法分析指纹图谱共有峰与增强免疫活性间的谱效关系,确定药效物质。结果:在标定的22个共有峰中,有6个与增强免疫活性具有显著相关性,分别为F1(峰22)、GypenisideⅩⅦ(峰17)、Malonyl-Ra2(峰9)、Rd(峰13)、Rb3(峰11)、20(s)-Rg3(峰19)。结论:本研究借助中药谱效学初步阐释了西洋参皂苷类成分增强免疫作用的药效物质基础,为谱-效相关质量评价系统的建立提供技术支撑。

在线固相萃取-液相色谱-四极杆/飞行时间质谱法快速筛查水体中60种有机毒物

采用在线固相萃取-液相色谱-四极杆/飞行时间质谱(online SPE-LC-QTOF)对水体中农药、激素和抗生素等60种有机毒物进行快速筛查、定性识别和准确定量.样品经在线固相萃取小柱萃取吸附后,被流动相反冲出萃取小柱,进入C18色谱柱进行分离,正、负离子模式分别扫描测定.结果表明,60种化合物在一定浓度范围内呈良好的线性相关性,相关系数均大于0.998.各目标物的方法检出限为0.2—4.8 ng·L-1,在低、中、高的3个添加水平下,各化合物的平均回收率为70.5%—129%,相对标准偏差为1.4%—15.4%.该方法利用自建标准谱库检索,实现有机毒物的快速筛查,并使用二级特征碎片离子进行确证,具有快速高效等优点.太湖流域水体筛查结果阐明了太湖流域新型污染物的分布状况和污染规律.

基于液相色谱飞行时间质谱的炒川楝子化学成分分析

目的通过液相色谱飞行时间质谱(LC/QTOF MS)联用技术定性分析炒川楝子甲醇提取物中的主要化学成分。方法色谱分离采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以1%甲酸—乙腈为流动相梯度洗脱,流速:1.0 mL.min-1,质谱定性采用飞行时间质谱,正负离子模式扫描。结果通过正、负离子质谱信息及元素组成分析并结合相关文献数据对照,鉴定出炒川楝子甲醇提取物中的11个成分。结论建立了一种基于LC/QTOF MS技术对炒川楝子中的化学成分进行鉴别的方法,为中药饮片炒川楝子的质量控制奠定了基础并为其深入研究和应用提供了依据。

三叶木通果皮活性成分的研究

三叶木通果皮通过有机溶剂浸提,硅胶柱分离、Sephadex LH-20分子筛分离,制备色谱制备等前处理手段,再利用高效液相色谱四级杆飞行时间质谱(HPLC-QTOF)分析检测,以质荷比、二级碎片特征离子为依据,共推测出43种化学成分,包括酚酸、黄酮、三萜皂苷以及其他活性糖苷类化合物,为三叶木通果皮的应用研究提供了重要的依据。