LC3蛋白敲除A549细胞系的构建及其对流感病毒复制的影响

微管相关蛋白1轻链3(LC3)是一种在流感病毒感染过程中被病毒M2蛋白招募至细胞膜处聚集的宿主细胞自噬相关蛋白。为了解其在流感病毒感染过程中行使的功能,利用CRISPR/Cas9技术构建LC3蛋白缺失细胞系,用以观察病毒生长复制的差异。设计sgRNA并插入至核心载体LentiCRISPRv2中,与辅助质粒共同转染293T细胞行慢病毒的包装。包装完成后用以感染A549细胞并进行嘌呤霉素压力筛选,对存活细胞的LC3蛋白含量进行检测,结果显示具有嘌呤抗性的细胞中未检测到LC3蛋白条带,LC3敲除细胞系构建成功。运用核染色法对比敲除细胞和正常细胞的细胞活性,发现缺失LC3蛋白细胞活性小幅度下降。流感病毒感染两种细胞绘制生长曲线,缺少LC3蛋白的条件下病毒复制水平下降。本研究构建的LC3蛋白缺失细胞系能够为将来研究LC3蛋白在细胞自噬与病毒感染过程中发挥功能,以及分子机制的研究提供了良好的细胞模型。

抗衰延年方对D-半乳糖致衰老大鼠海马自噬相关蛋白LC3的影响

[目的]研究抗衰延年方对D-半乳糖所致衰老大鼠海马自噬相关蛋白微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)的影响。[方法]采用皮下注射D-半乳糖的方法制备大鼠衰老模型,再按随机数字表法将造模成功的21只大鼠分为模型组、抗衰延年方组、吡拉西坦组,每组7只,另将7只健康大鼠设置为正常对照组。抗衰延年方组予抗衰延年方水煎剂灌胃治疗,吡拉西坦组予吡拉西坦灌胃治疗,正常对照组和模型组不予其他干预性治疗。治疗21 d后,采用Morris水迷宫检测各组大鼠的学习和记忆功能,免疫组织化学法和Western blot法检测大鼠海马组织LC3蛋白的表达。[结果]模型组大鼠搜寻平台时间与正常对照组相比明显延长(P<0.05或P<0.01),吡拉西坦组、抗衰延年方组与模型组比较均明显缩短(P<0.05或P<0.01);与正常对照组相比,模型组大鼠穿越平台次数明显减少(P<0.01),吡拉西坦组、抗衰延年方组较模型组明显增加(P<0.05);模型组大鼠脑海马组织LC3蛋白表达较正常对照组升高(P<0.05),吡拉西坦组、抗衰延年方组较模型组降低(P<0.05)。[结论]抗衰延年方可通过降低脑组织LC3蛋白水平,从而达到延缓衰老的目的,其作用效果与吡拉西坦相当。

电针神庭、百会穴对脑缺血再灌注大鼠学习记忆能力及大鼠皮质和海马区LC3蛋白表达的影响

目的观察电针神庭、百会穴对缺血再灌注大鼠学习记忆能力的影响,以及对大鼠皮质区和海马区中LC3蛋白表达的变化分析。方法54只Sprague-Dawley大鼠随机数字法分为电针组(18只)、模型组(18只),假手术组(18只)。电针组及模型组行线栓法制备大脑中动脉缺血再灌注大鼠模型,假手术组行假手术。三组大鼠分别于造模后2h,5d,7d进行神经功能缺损评分。电针组于造模2h后取神庭、百会穴进行治疗,每次30min,每日1次。同时于针灸干预后第4～8d行Morris水迷宫实验观察大鼠的学习记忆能力;荧光定量PCR检测大鼠海马及皮质区LC3Ⅱ的含量及Western Blot法检测脑组织中细胞自噬相关蛋白LC3Ⅰ、LC3Ⅱ及LC3Ⅰ/Ⅱ比值。14d后处死3组大鼠,立即断头取脑,用TTC染色法观察大鼠脑梗死区域并计算脑梗死的体积。结果①神经功能学评分:与模型组相比较,电针组大鼠经针灸干预治疗后神经功能缺损评分明显降低(P<0.01);②Morris水迷宫实验:与模型组相比较,电针组大鼠穿越平台期的时间及路程明显缩短,逃避潜伏期明显缩短(P<0.001);③Western Blot法检测皮质及海马区检测LC3结果:与模型组相比较,电针组大鼠皮质及海马区LC3Ⅰ及LC3Ⅱ蛋白表达均明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);④荧光定量PCR检测大鼠海马及皮质区LC3Ⅱ结果:与假手术组相比较,电针组与模型组大鼠海马及皮质区LC3Ⅱ含量明显升高,差异具有统计学意义(P<0.001),与模型组相比较,电针组大鼠海马及皮质区LC3Ⅱ含量升高,差异具有统计学意义(P<0.001);⑤脑梗死体积计算:与模型组相比较,电针组脑梗死的区域和体积明显缩小(P<0.001)。结论电针神庭、百会穴可显著改善脑缺血再灌注损伤大鼠的学习及记忆能力。对自噬网络及其调控机制在脑卒中患者认知障碍的研究中起着至关重要的作用。

五味子乙素对顺铂诱导肾小管上皮细胞凋亡及自噬蛋白LC3的影响

目的探讨五味子乙素(Sch B)对顺铂(CDDP)诱导的小鼠急性肾损伤(AKI)肾小管上皮细胞凋亡与自噬的影响及作用机制。方法 30只BALB/c小鼠随机分为空白对照组、Sch B对照组、模型组以及Sch B干预(Sch B浓度分别为20 mg/kg、100 mg/kg)组,每组6只。采用腹腔注射CDDP法建立AKI模型,收集各组血及肾组织,检测血肌酐(SCr)水平,免疫组化检测各组肾组织中p53蛋白含量,蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测各组肾组织p53蛋白、自噬标志蛋白微管相关蛋白L轻链3(LC3)的表达,原位末端标记(TUNEL)法检测肾小管上皮细胞凋亡情况,光镜观察肾组织形态改变。结果 (1)与空白对照组比较,模型组SCr、肾小管上皮细胞凋亡数均升高(P<0.05),p53蛋白含量、p53蛋白表达、LC3蛋白表达均降低(P<0.01)。(2)与模型组比较,Sch B干预组SCr、肾小管上皮细胞凋亡数均下降(P<0.01);Sch B能上调p53蛋白、LC3蛋白表达(P<0.01),改善肾小管上皮细胞融合、空泡变性等病理改变,减轻肾小管损伤。结论 Sch B对顺铂所致小鼠AKI有保护作用,其机制可能与上调p53蛋白、LC3蛋白表达水平,改善细胞DNA损伤修复,增强肾组织的自噬有关。

微管相关蛋白LC3和组织蛋白酶D在子宫内膜样腺癌中的表达及意义

目的:探讨微管相关蛋白LC3、组织蛋白酶D在子宫内膜样腺癌组织中的表达及与临床病理参数之间的关系。方法:用免疫组织化学法检测12例正常增生期子宫内膜、12例子宫内膜增殖症以及51例子宫内膜样腺癌组织中LC3和组织蛋白酶D的表达并分析。结果:LC3在子宫内膜样腺癌组织的表达强度显著低于正常增生期内膜和子宫内膜增殖症(P＜0．001,P＜0．001) LC3在子宫内膜样腺癌中的表达强度与组织学分级以及手术病理分期呈明显的负相关(r=-0．390,P＜0．001;r=-0．312,P＜0．05)。组织蛋白酶D在子宫内膜样腺癌组织中的表达显著低于正常增生期内膜(P＜0．05)。结论:自噬活性相关的LC3、组织蛋白酶D在子宫内膜样腺癌中的表达下降,自噬活性的改变可能参与了子宫内膜样腺癌的发生和演进过程。

自噬基因Beclin-1和微管相关蛋白LC3在大鼠阿霉素心肌病中的表达及其意义

目的探讨自噬基因Beclin-1及微管相关蛋白LC3在大鼠阿霉素心肌病中的表达及其意义,初步证实自体吞噬(autophagy)参与了大鼠阿霉素心肌病的发病,并探讨其机制。方法雄性SD大鼠45只,随机分为3组,阿霉素(ADR)组、阿霉素(ADR)+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组和对照组。建立大鼠阿霉素心肌病模型,电镜观察自噬体形态及数量,检测心肌组织中Beclin-1含量及LC3含量。结果ADR组大鼠心肌组织自噬体的数量较对照组及ADR+3-MA组增多;ADR组心肌组织中Beclin-1水平及LC3含量均较对照组及ADR+3-MA组增高。结论自噬性程序性细胞死亡参与了阿霉素心肌病的发病。

伊班膦酸钠对膝骨关节炎大鼠自噬相关蛋白LC3 Ⅱ的影响

目的:研究伊班膦酸钠对膝骨关节炎大鼠自噬相关蛋白LC3 Ⅱ的表达变化,初步探讨软骨组织中自噬相关蛋白水平与骨关节炎(osteoarthritis, OA)发生发展的关系。方法:将30只3月龄雌性SD大鼠随机分为3组,每组10只:假手术组(Sham)、生理盐水治疗组(ACLT+NS)和伊班膦酸钠治疗组(ACLT+IB)。ACLT+NS组、ACLT+IB组行膝关节前交叉韧带切断术(ACLT)建立膝骨关节炎模型。术后1周ACLT+IB组予以伊班膦酸钠干预。检测指标:番红染色、Mankin’s评分;关节软骨下骨形态学检测;大鼠血I型胶原C端肽(CTX-I)、Ⅱ型胶原C端肽(CTX-Ⅱ)及IL-1、IL-6水平;基质金属蛋白酶-13(MMP-13)及自噬相关蛋白LC3 Ⅱ表达。结果:番红染色ACLT+NS组软骨结构破坏明显,Mankin’s评分显著高于Sham组和ACLT+IB组(P <0.001);ACLT+IB组相对骨体积(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)等均明显高于ACLT+NS组(P<0.001),骨小梁分离度(Tb.Sp)则显著低于ACLT+NS (P <0.001);ACLT+NS组血清CTX-I、CTX-Ⅱ、IL-1、IL-6水平高于Sham组和ACLT+IB组(P <0.05);相比较于Sham组和ACLT+IB组,ACLT+NS组的MMP-13表达水平增高(P <0.01),LC3 Ⅱ表达降低(P <0.01)。结论:伊班膦酸钠能够下调MMP-13蛋白表达,并减少炎性因子IL-1和IL-6分泌,进而保护关节软骨,改善软骨下骨小梁微观结构,可能与自噬相关蛋白LC3 Ⅱ表达增高有关。

类风湿性关节炎患者外周血单个核细胞微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达增强且与病情相关

目的检测类风湿性关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)中自噬标志性分子微管相关蛋白1轻链3(LC3)的mRNA及蛋白表达,探讨其与RA发病的关系。方法募集22例RA患者,同期纳入性别、年龄匹配的16例健康体检者为正常对照组。采用密度梯度离心法分离PBMC;采用实时荧光定量PCR检测PBMC中LC3在mRNA水平,Western blot法检测PBMC中LC3蛋白水平,采用免疫荧光细胞化学染色检测PBMC中LC3蛋白表达;采用Pearson方法分析LC3表达与RA患者临床指标的相关性。结果与正常对照组相比,RA患者组PBMC中LC3 mRNA和蛋白水平明显增加,PBMC中LC3表达明显增强,RA患者PBMC中LC3 mRNA水平与血沉(ESR)、28关节疾病活动度评分(DAS28)、C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)均呈明显正相关(r依次为0.7480、0.5016、0.6518、0.7232)。结论RA患者LC3表达上调,且与ESR、DAS28、CRP、RF相关。

自噬相关蛋白LC3和E-钙黏蛋白、波形蛋白在子宫内膜异位症中的表达

目的研究自噬相关蛋白(LC3)和E?钙黏蛋白(E?cadherin)、波形蛋白(Vimentin)在子宫内膜异位症病人中的表达情况,探讨其与子宫内膜异位症发生发展的相关性。方法选取2018年1—11月在武汉市第三医院行全子宫切除术的子宫内膜异位症41例,留取41例病人的异位子宫内膜(异位内膜组)及在位子宫内膜(在位内膜组),另外留取同期的38例因子宫肌瘤行全子宫或次全子宫切除术病人的正常子宫内膜(正常内膜组),采用免疫组化SP法检测留取标本中LC3,E?cadherin,Vimentin表达。结果异位内膜组中LC3的阳性表达率(78.049%)明显高于正常内膜组(21.053%)和在位内膜组(31.707%)(P<0.05),LC3的阳性表达率在正常内膜组和在位内膜组中差异无统计学意义(P>0.05),异位内膜组和在位内膜组中E?cadherin阳性表达率(19.512%、39.024%)均低于正常内膜组(73.684%)(P<0.05);异位内膜组和在位内膜组中Vimentin阳性表达率(73.171%、53.659%)均高于正常内膜组(18.421%)(P<0.05)。异位内膜组LC3与E?cadherin、Vimentin表达有相关性(P<0.05);在位内膜组LC3与E?cadherin、Vimentin表达无相关性(P>0.05);E?cadherin与Vimentin在异位内膜组和在位内膜组中表达呈负相关(P<0.05);正常子宫内膜中三者无相关性(P>0.05)。结论在异位子宫内膜组织中,自噬表达水平上调伴有EMT现象的发生,推测自噬可能参与EMT发生,导致异位病灶的形成发展。

平喘颗粒对哮喘大鼠肺组织Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达的影响

目的:通过测定Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达,探讨平喘颗粒对哮喘大鼠自噬的抑制机理。方法:随机将30只Wistar大鼠分为3组,正常组、模型组、平喘颗粒组,每组10只。在第2次致敏后第4天开始给予给与中药药液灌胃。平喘颗粒组按体质量给予平喘颗粒溶液1 mL/100 g灌胃,激发阶段则每次激发前1h灌胃;正常组与模型组均予等量生理盐水灌胃。各组均于末次激发24 h后处死,取肺组织,光镜下观察肺组织的病理学改变。采用免疫组化SP法检测肺组织Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达。结果:平喘颗粒组和模型组大鼠肺组织Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达均高于正常组,差异有统计学意义(P<0.01);平喘颗粒组Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白的表达较模型组明显受到抑制,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:平喘颗粒能减轻哮喘后的炎症反应,并且可抑制细胞自噬信号通路,从而保护肺部组织细胞,减轻哮喘发作。

基于mTOR/Beclin1/LC3信号轴探讨制萎扶胃丸对胃癌前病变大鼠胃窦组织自噬的影响

目的:探讨制萎扶胃丸(ZWFW)对胃癌前病变(PLGC)大鼠胃窦组织哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1)/微管相关蛋白1轻链3(LC3)信号轴关键分子表达的影响。方法:SPF级SD大鼠随机分为正常组,模型组,叶酸组,ZWFW低、中、高剂量组,除正常组常规饲养外,模型组、叶酸组、ZWFW低、中、高剂量组,采用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)联合饥饱失常、乙醇灌胃、氨水自由饮用以及雷尼替丁饲料喂养五因素复合造模法建立PLGC大鼠模型后,分别用生理盐水、叶酸片水溶液(0.002 g/kg)、ZWFW低、中、高剂量水溶液(0.42,0.84,1.67 g/kg)予以治疗4周后剖腹取胃。采用苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠胃窦组织病理学变化,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)及免疫组化检测大鼠胃窦组织mTOR、Beclin1、微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)的mRNA及蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠胃窦组织胀大,胃壁变薄,胃黏膜色泽苍白,皱襞萎缩浅平,走行紊乱,可见结节及赘生物;HE染色示:与正常组比较,模型组胃黏膜腺体排列拥挤、紊乱,细胞形态不一,可见大量杯状细胞,细胞浆嗜碱性,细胞核大、深染、不规则,黏膜肌层浸润破坏;与模型组比较,ZWFW显著改善了胃黏膜腺体结构排列紊乱和细胞异型性等病理表现。与正常组比较,模型组大鼠胃窦组织m TOR mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05),Beclin1和LC3B mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,ZWFW中、高剂量组胃窦组织mTOR mRNA和蛋白表达降低(P<0.05),ZWFW低剂量组胃窦组织Beclin1、LC3B蛋白表达升高(P<0.05),中、高剂量组胃窦组织Beclin1、LC3B mRNA和蛋白表达升高(P<0.05)。结论:ZWFW可显著改善PLGC模型大鼠胃黏膜异常组织病理学表现,其机制可能与下调mTOR表达,上调Beclin1、LC3B表达进而促进自噬相关。

自噬相关基因LC3和ATG5在胃癌中的表达及临床意义

目的探讨自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)和自噬相关基因-5(autophagy related gene-5,ATG5)在胃癌细胞发生发展不同阶段的表达情况并分析其临床意义。方法选取胃黏膜正常细胞、胃黏膜不典型增生细胞、胃癌细胞共58例,分别记为正常组(17例)、不典型组(19例)、胃癌组(22例),采用qRT-PCR、Western Blot、免疫组织化学法检测每组中自噬相关基因LC3和ATG5的mRNA及蛋白表达水平,应用SPSS 23.0软件分析正常组、不典型组、胃癌组3组间LC3和ATG5的mRNA及蛋白表达情况,并分析LC3和ATG5蛋白表达的相关性以及LC3和ATG5蛋白表达与胃癌患者临床病理学参数的关系。结果正常组、不典型组、胃癌组中LC3和ATG5 mRNA及蛋白表达水平逐渐升高,各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。LC3蛋白表达情况与性别、年龄、浸润深度、分化程度及淋巴结状态均不存在相关性。ATG5蛋白表达情况与浸润深度、分化程度及淋巴结状态均有相关性。LC3和ATG5蛋白在3组中均呈正相关(P<0.05)。结论细胞自噬可促进胃癌的发生发展,其机制可能与LC3、ATG5过度表达有关。LC3、ATG5在促进胃癌的发生发展中起相互协同的作用。

黄芩素抑制磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路并诱导MGC-803细胞自噬

目的研究黄芩素(BAI)对胃癌细胞系MGC-803细胞自噬的影响。方法使用(0、 5、 15、 25、 50)μmol/L BAI处理胃癌MGC-803细胞24、 48、 72 h,噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性,吖啶橙(AO)染色结合免疫荧光细胞化学染色观察微管相关蛋白1轻链3(LC3)和P62的表达确定MGC-803细胞的自噬情况, Western blot法检测细胞LC3、 P62、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化的PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、 p-AKT的蛋白水平。结果与对照组相比, BAI可显著抑制MGC-803细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖性;BAI处理的MGC-803细胞内酸性溶酶体显著增加, LC3表达增强;BAI处理后可显著降低PI3K和AKT蛋白的磷酸化, LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加、上调P62蛋白的表达。结论黄芩素抑制PI3K/AKT信号通路诱导MGC-803细胞发生自噬。

心衰宁合剂对慢性心力衰竭大鼠心肌自噬相关蛋白表达的影响

目的探讨心衰宁合剂(XSNM)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌自噬效应蛋白(Beclin1)、微管相关蛋白1轻链(LC)3-Ⅱ表达的影响。方法将SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照(卡托普利组,10 mg/kg),XSNM低、中、高剂量组(15.6、31.2、62.4 g/kg),采用阿霉素(ADR,2.5 mg/kg)腹腔注射复制CHF大鼠模型,空白组注射等量生理盐水,每周1次,造模6 w。模型复制结束后各组按剂量灌胃,空白组及模型组灌胃生理盐水,灌胃4 w。采用超声心动图检测大鼠心功能;苏木素-伊红(HE)及Masson染色观察大鼠心肌病理学变化情况;透射电镜观察大鼠心肌组织超微结构;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肌酸激酶同工酶(CK)-MB含量;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、Western印迹检测大鼠心肌Beclin1、LC3-Ⅱ基因及蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)均显著增加(P<0.01),左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短分率(LVFS)显著降低(P<0.01),血清CK-MB明显升高(P<0.01),Beclin1、LC3-Ⅱ基因及蛋白表达较空白组明显升高(P<0.01);与模型组比较,XSNM各剂量组和卡托普利组LVEDD、LVESD均降低,LVEF、LVFS均升高,除XSNM低剂量组LVEDD外,差异均有统计学意义(P<0.01),XSNM显著降低血清CK-MB水平(P<0.01),XSNM各剂量组均降低Beclin1、LC3-Ⅱ基因及蛋白表达水平(P<0.01)。电镜结果显示模型组亚细胞结构损伤较重,XSNM有一定的改善作用,自噬小体数量有减少。结论XSNM可以改善CHF大鼠心脏功能,降低血清CK-MB含量,其机制可能与调节心肌细胞自噬有关。

UCH-L1对急性低压低氧小鼠海马中α-突触核蛋白表达水平的调控作用

目的探讨急性低压低氧条件下UCH-L1基因敲除对小鼠海马中α-突触核蛋白(α-Syn)表达水平的影响及其机制,为治疗α-Syn蛋白相关的神经系统疾病提供依据。方法采用UCH-L1基因杂合子(UCH-L1^(+/-))小鼠雌雄交配的方式获得UCH-L1基因敲除纯合子(UCHL1^(-/-))小鼠和野生型小鼠(UCH-L1^(+/+)),PCR法鉴定小鼠的基因型。将UCH-L1^(+/+)小鼠和UCH-L1^(-/-)小鼠放入低压氧舱模拟海拔8000 m高度,持续低氧8 h,建立急性低压低氧模型。采用Western Blot法检测小鼠海马中UCH-L1、α-突触核蛋白及LC3蛋白表达水平的变化,观察UCH-L1基因敲除对α-突触核蛋白表达水平及其相关细胞自噬降解通路的影响。结果与对照组(0.702±0.121)相比,急性低压低氧可诱导野生型小鼠海马中α-突触核蛋白表达水平(1.310±0.096)显著升高(P<0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ的比值轻度升高,而对UCH-L1蛋白的表达水平没有影响。当敲除UCH-L1基因的小鼠经急性低压低氧处理后,小鼠海马中α-突触核蛋白表达水平(0.952±0.093)明显低于野生型对照组(1.490±0.074)(P<0.05),同时LC3Ⅱ/Ⅰ的比值也显著升高(P<0.05)。结论UCH-L1基因敲除降低了急性低压低氧诱导的α-突触核蛋白表达水平升高,其机制之一可能与小鼠在急性低压低氧时因敲除UCH-L1基因而进一步促进细胞自噬通路的活化有关。

α-酮酸联合极低蛋白饮食对2型糖尿病肾病的影响

目的研究α-酮酸联合极低蛋白饮食对2型糖尿病肾病患者肾功能、LC3蛋白及P62抗体阳性率的影响.方法选择2018年11月至2020年1月本院接诊的2型糖尿病肾病患者120例纳入研究,依据随机数表法分为对照组和观察组,每组各60例.对照组患者给予非严格控制低蛋白饮食+α-酮酸治疗,观察组患者给予α-酮酸联合极低蛋白饮食治疗.比较两组患者治疗前、治疗后3个月的24 h尿白蛋白排泄率(24 h UAER)、24 h尿蛋白定量(24 h Upro)、血清尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、肾小球滤过率、LC3蛋白以及P62抗体阳性率.结果治疗后3个月,两组患者的24 h UAER、24 h Upro、BUN、SCr指标均降低,且观察组比对照组低(P<0.05);两组肾小球滤过率水平均升高,且观察组高于对照组(P<0.05);LC3蛋白表达亦升高,观察组LC3蛋白表达高于对照组(P<0.05);则P62抗体阳性率降低,观察组阳性率低于对照组(P<0.05).结论α-酮酸联合极低蛋白饮食能够有效增加2型糖尿病肾病患者细胞自噬作用,降低尿蛋白流失,保护患者肾功能.

自噬标记蛋白在恶性肿瘤中临床意义的研究进展

自噬是生物细胞的一种死亡形式,参与多种生理、病理过程。近年研究发现,自噬标记蛋白如自噬效应蛋白(Beclin1)、泛素结合蛋白(p62)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、微管相关蛋白轻链3蛋白(LC3)等与恶性肿瘤的发生发展密切相关。自噬标记蛋白与甲状腺癌、乳腺癌、胰腺癌、肝癌、胃肠道肿瘤、肺癌的发病具有密切关系,自噬标记相关蛋白表达的差异对恶性肿瘤的早期诊断、治疗、预后均有重要作用,可能成为肿瘤精确诊断、治疗的新靶点。

自噬相关蛋白在2型糖尿病大鼠胰腺组织中的变化

目的通过动物实验探讨细胞自噬与糖尿病的可能相关性。方法将6只SPF级雄性SD大鼠适应性喂养3 d,随机分成正常组和模型组;正常组喂以常规饲料,模型组给予高糖高脂饲料,喂养4周;4周后隔夜空腹给予模型组大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)30 mg/kg,1周后再次腹腔注射30 mg/kg,正常组注射相应体积的生理盐水。模型组STZ注射4周后大鼠禁食,剪尾取血,测量空腹血糖(FBG),FBG>7.8 mmol/L为糖尿病诊断标准。模型构建成功后处死正常组和模型组,取胰腺组织采用蛋白免疫印迹法检测自噬基因微管相关蛋白1轻链3(LC3)、自噬相关蛋白7(Atg7)和自噬相关蛋白Beclin-1和P62蛋白(sequestosome-1蛋白)表达水平,采用免疫组织化学法检测LC3和Beclin-1蛋白表达量。结果与正常组相比,WB法检测提示模型组大鼠胰腺组织LC3、Atg7和Beclin-1表达量增加(t=-39.984,-39.049,-59.157,P均<0.01),P62蛋白表达水平较正常组明显降低(t=90.466,P<0.01),免疫组织化学法检测提示LC3和Beclin-1蛋白表达量均增加(t=14.561,7.342,P均<0.01)。结论细胞自噬功能的紊乱可能导致糖尿病的发生。

Toll样受体4激动剂LPS腹腔注射对大鼠心肌缺血再灌注损伤的预防作用及其作用机制

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)激动剂LPS腹腔注射对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的预防作用及其作用机制。方法 将60只大鼠根据随机数字表法分为LPS干预组(0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg,均为小剂量)、维拉帕米干预组、模型组、假手术组,每组15只。构建MIRI模型前7 d,LPS干预组给予0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg LPS腹腔注射,维拉帕米干预组给予2.5%维拉帕米(2 mg/kg)腹腔注射,假手术组与模型组给予等容量生理盐水腹腔注射;均每日1次。然后,除假手术组外,其余组大鼠进行缺血再灌注处理。处理后72 h,采用超声检测各组大鼠心功能,苏木精—伊红(HE)染色观察各组大鼠心肌组织病理学变化,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测算各组大鼠心肌梗死面积;采用Western blotting法检测大鼠心肌组织FoxO3a、pFoxO3aS253、Beclin-1及LC蛋白。结果 与假手术组比较,模型组大鼠左心室射血分数(LVEF)、短轴缩短率(LVFS)减小(P均<0.05);心肌损伤严重,心肌梗死面积百分比升高(P均<0.05);心肌组织中pFoxO3aS253蛋白相对表达量降低(P<0.05),FoxO3a、Beclin-1、LC蛋白相对表达量升高(P均<0.05)。与模型组比较,维拉帕米干预组及LPS干预组大鼠LVEF、LVFS增加(P均<0.05);0.1 mg/kg及0.5 mg/kg LPS干预组大鼠心肌病变改善不明显,维拉帕米干预组和1 mg/kg LPS干预组大鼠心肌纤维水肿、断裂、坏死及炎细胞浸润程度均减轻;维拉帕米干预组及LPS干预组大鼠心肌梗死面积百分比降低(P均<0.05),pFoxO3aS253蛋白相对表达量升高(P均<0.05),FoxO3a、Beclin-1、LC蛋白相对表达量下降(P均<0.05)。结论 小剂量TLR4激动剂LPS可预防大鼠MIRI,其作用机制可能与促使FoxO3a磷酸化及抑制Beclin-1、LC激活有关。

醒脑静注射液对蛛网膜下腔出血大鼠学习记忆能力及海马区自噬相关蛋白表达的影响

目的 探讨醒脑静注射液对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠学习记忆能力及海马区自噬相关蛋白表达的影响。方法 将36只大鼠随机分为假手术组、模型组、醒脑静组各12只。模型组、醒脑静组采用颈动脉穿刺法制作SAH大鼠模型,假手术组仅将纤芯沿血管穿入颅内但不刺破血管。造模成功后,醒脑静组给予醒脑静注射液2mL腹腔注射,1次/12h;假手术组和模型组给予等量生理盐水腹腔注射。术后24h进行穿梭箱实验,比较三组大鼠的逃避反应时间和逃避反应次数;处死大鼠,取海马组织,HE染色观察神经细胞形态,免疫组化法检测Beclin-1、LC3Ⅱ阳性神经细胞个数,Western blotting法检测海马组织中自噬特异性标志物Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组穿梭箱实验逃避反应时间延长,逃避反应次数减少(P均<0.05);与模型组比较,醒脑静组逃避反应时间缩短,逃避反应次数增加(P均<0.05)。假手术组海马神经细胞多数形态正常;模型组胞核梭形固缩、深染情况明显增多,并有核破碎现象;醒脑静组与模型组比较,胞核梭形固缩、深染、核破碎情况明显减少。模型组海马Beclin-1、LC3Ⅱ阳性神经细胞数较假手术组增多,醒脑静组较模型组增多(P均<0.05)。与假手术组比较,模型组海马组织中Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白表达升高(P均<0.05);与模型组比较,醒脑静组Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白表达升高(P均<0.05)。结论 醒脑静可改善SAH大鼠的学习记忆能力,保护脑神经功能,其机制可能与激活SAH大鼠海马区神经细胞自噬相关蛋白表达有关。