伊立替康、紫杉醇联合顺铂治疗对宫颈癌CYFRA21-1、VEGF-C及LC3-Ⅱ水平的影响

目的:分析伊立替康、紫杉醇联合顺铂治疗对宫颈癌的治疗效果及对细胞角蛋白19片段抗原21-1(Cytokeratin 19 fragment 21-1,CYFRA21-1)、血管内皮生长因子C(Vascular endothelial growth factor C,VEGF-C)及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(Microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3-Ⅱ)水平的影响.方法:回顾性分析本院2020年3月至2023年4月收治的122例宫颈癌患者的临床资料,根据治疗方案不同将患者分为IP组(伊立替康+顺铂治疗,60例)和TP组(紫杉醇+顺铂治疗,62例).分析对比两组的临床疗效、CYFRA21-1、VEGF-C及LC3-Ⅱ水平以及毒副反应.结果:IP组与TP组总疗效率分别为56.67%、79.03%,TP组总疗效率显著高于IP组(P<0.05).两组治疗后的CYFRA21-1、VEGF-C及LC3-Ⅱ水平均显著下降,且TP组CYFRA21-1、VEGF-C及LC3-Ⅱ水平均显著低于IP组(P<0.05).TP组0度、Ⅰ度例数占比显著高于IP组,Ⅲ度例数占比显著低于IP组(P<0.05).结论:与伊立替康联合顺铂比较,紫杉醇联合顺铂治疗宫颈癌临床疗效更为理想,可有效降低CYFRA21-1、VEGF-C及LC3-Ⅱ水平,且安全性高.

NIX和LC3-Ⅱ在成年牦牛不同脑组织中的表达与定位分析

为了探讨牦牛(Bos grunniens)脑组织低氧适应性,选择成年(3~5岁)牦牛脑组织,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、免疫组织化学技术及免疫荧光技术检测低氧诱导因子2α(HIF2α)与促凋亡BNIP3L蛋白(BNIP3L/NIX)和微管相关蛋白轻链3(LC3-Ⅱ)在大脑皮质、海马、丘脑、延髓和小脑中的表达与定位情况,并用半胱氨酸天冬氨酸酶3(Caspase-3)检测脑组织中细胞的凋亡水平。qRT-PCR和免疫组织化学光密度分析结果显示,成年牦牛大脑皮质和海马的HIF2α、NIX、LC3-ⅡmRNA和蛋白水平显著高于丘脑、延髓及小脑(P<0.05),另外Caspase-3 mRNA和蛋白水平在五个部位之间无显著差异。免疫组化镜下观察发现HIF2α阳性反应表达于神经元胞核及胞质,而NIX、LC3-Ⅱ和Caspase-3阳性反应均集中在细胞质,且上述四个因子主要分布于大脑皮质的多形细胞层和海马的CA区锥体细胞层,另外,在丘脑、延髓和小脑神经元中均有表达。免疫荧光结果显示,HIF2α、NIX、LC3-Ⅱ与神经元核抗原抗体NeuN在上述各部位神经元细胞共定位,Caspase-3荧光强度较弱。以上结果表明,海马和大脑皮质可能更容易受到低氧刺激;另外,HIF2α的表达可能促进NIX和LC3-Ⅱ的表达,降低Caspase-3表达水平,从而使牦牛大脑和海马适应高原环境。本试验为深入研究牦牛中枢神经系统的低氧适应机制提供了基础数据。

Salubrinal对大鼠脑缺血再灌注模型LC3-Ⅱ mRNA及LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA的影响

目的探讨Salubrinal对大鼠脑缺血再灌注模型LC3-ⅡmRNA及LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA表达的影响。方法用线栓法建立大鼠大脑中动脉脑缺血(MCAO)缺血再灌注模型。大鼠随机分为假手术组、模型组、Salubrinal组(Sal组),各组又分为再灌6、12、24、72 h 4个亚组。各组于再灌相应时间点行神经功能缺损评分,并断头取脑行HE染色及Real time-PCR检测。结果神经功能缺损:与假手术组比较,模型组、Sal组各时间点均有神经功能缺损(P<0.01);与模型组比较,再灌24、72 h Sal组神经功能缺损评分降低(P<0.05)。HE染色:模型组神经元减少、缺失,细胞肿胀,部分破裂,细胞核固缩、偏移、深染,胶质细胞增生,经Salubrinal干预后,再灌各时间点神经元增多,胞膜较完整,核固缩现象较轻,水肿轻微。Real time-PCR检测:与假手术组比较,模型组、Sal组各指标于再灌各时间点均增高(P<0.01)。与模型组比,Sal组LC3-ⅡmRNA表达于再灌12、24、72 h下降明显(P<0.05);Sal组LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA于再灌后各时间点下降均明显(P<0.01)。结论 Salubrinal通过下调LC3-ⅡmRNA及LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA比值,对大鼠脑缺血再灌注损伤起保护作用。

大负荷运动诱导大鼠骨骼肌损伤对其自噬超微结构及Beclin1和LC3-Ⅱ/Ⅰ的影响

目的:观察大负荷离心运动对大鼠骨骼肌自噬超微结构及自噬相关蛋白Beclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ的影响。方法:48只SD雄性大鼠适应性训练后随机分成对照组(C,n=8)和大负荷离心运动组(E,n=40)。E组于跑台进行90 min下坡跑,运动后0 h、12 h、24 h、48 h和72 h取比目鱼肌,透射电镜观察其自噬体超微结构变化;Western blot检测Beclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达;免疫荧光观测LC3的定位及含量变化。结果:E组比目鱼肌自噬体数量在运动后0 h、12 h和24 h均有增加,并伴LC3自噬荧光明显增强(P<0.01),同时运动后48 h自噬荧光仍有显著性升高(P<0.05);Beclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ在大负荷离心干预后表达升高(P<0.05),运动后12 h^24 h达到峰值(P<0.01),直至运动后72 h完全恢复。结论:大负荷离心运动可诱导骨骼肌自噬超微结构变化,自噬蛋白表达增强,以上可能是运动损伤的骨骼肌功能下降的原因之一。

五味温通除痹胶囊对佐剂性关节炎大鼠自噬蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响

目的明确五味温通除痹胶囊(桂枝、茯苓、淫羊藿,等)对佐剂性关节炎大鼠自噬蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响,探讨其防治类风湿关节炎的可能机制。方法雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、五味温通除痹胶囊(0.80、1.60、3.20 g/kg)组、阳性药雷公藤多苷片(40 mg/kg)组,每组10只。除正常组外,采用弗氏完全佐剂诱导佐剂性关节炎大鼠模型。致炎后第12天灌胃给药,连续12 d。实验结束后,取非致炎侧踝关节,HE染色观察病理学改变,实时定量荧光PCR测定滑膜组织中Beclin-1、LC3-ⅡmRNA的表达,免疫荧光组织化学染色和Western blot法检测滑膜组织中Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白的表达。结果与模型组相比,五味温通除痹胶囊(1.60、3.20 g/kg)不仅可减轻佐剂性关节炎大鼠关节病理损伤程度,还可显著升高Beclin-1、LC3-ⅡmRNA和蛋白的表达水平。结论五味温通除痹胶囊对佐剂性关节炎大鼠具有一定的治疗作用,其机制可能与促进细胞自噬,减少滑膜细胞的过度增殖,从而减轻关节软骨损伤有关。

Beclin-1、LC3-Ⅱ在缺血后处理大鼠再灌注中的表达及意义

目的研究自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ在缺血后处理大鼠脑缺血再灌注海马中的表达及意义。方法根据Zea-Longa线栓法制作大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,将实验动物随机分为3组:假手术组、缺血再灌注组、缺血后处理组,缺血后处理组再按不同缺血后处理时间分为15 s、30 s、1 min 3个亚组。缺血2 h再灌注24h后用免疫组织化学法检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达情况,透射电镜观察神经细胞中自噬和溶酶体的激活以及细胞超微结构的变化。结果与缺血再灌注组相比,缺血后处理组神经行为学评分明显降低(P<0.05),脑梗死体积明显减小(P<0.01),Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达细胞数明显增加(P<0.01),自噬体形成和溶酶体激活量增加;缺血30 s亚组相比较15 s和1 min亚组上述指标(神经行为学评分除外)(P>0.05),差异亦有显著性(P<0.01)。结论脑缺血后处理的抗缺血再灌注损伤作用可能与上调自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达有关。

自噬相关蛋白LC3-Ⅱ在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

目的本研究检测微管轻链Ⅰ蛋白3-Ⅱ型(LC3-Ⅱ)在不同卵巢肿瘤组织中的表达情况,探讨其与浆液性卵巢癌及粘液性卵巢癌发生、发展的相关性和意义。方法选取204例上皮性卵巢肿瘤标本,其中,卵巢浆液性囊腺瘤46例,交界性浆液性肿瘤28例,浆液性囊腺癌40例,黏液性囊腺瘤32例,交界性黏液性囊腺瘤30例,黏液性囊腺癌28例,另选取正常卵巢上皮组织28例作为对照。使用SP法检测正常卵巢上皮组织、上皮性卵巢肿瘤组织中LC3-Ⅱ的表达,并结合浆液性癌、黏液性癌临床病理因素进行分析。结果1正常卵巢上皮中LC3-Ⅱ无表达,卵巢良性浆液性囊腺瘤、交界性浆液性肿瘤及浆液性癌中LC3-Ⅱ的阳性率分别为4.5%、71.0%、95.0%,交界性浆液性肿瘤和浆液性癌中LC3-Ⅱ的表达明显高于良性浆液性囊腺瘤,差异有统计学意义(P<0.01)。卵巢良性黏液性囊腺瘤、交界性黏液性肿瘤及黏液性癌中LC3-Ⅱ的阳性率分别为6.7%、66.7%、92.9%,交界性浆液性肿瘤和浆液性癌中LC3-Ⅱ的表达明显高于良性浆液性囊腺瘤,差异有统计学意义(P<0.01);2在40例卵巢浆液性癌、28例卵巢黏液性癌中,LC3-Ⅱ表达与患者年龄、FIGO分期及病理学分级等临床病理特征均无关。结论 LC3-Ⅱ在卵巢上皮性交界性肿瘤、癌中表达增高,自噬活性增强,可能与卵巢上皮性恶性肿瘤的进展有关。

自噬相关基因Atg4B及LC3-Ⅱ在肌萎缩侧索硬化症转基因鼠海马中的表达及意义

目的观察自噬相关基因Atg4B及LC3-Ⅱ在肌萎缩侧索硬化症(ALS)转基因鼠海马组织中的表达变化,探讨细胞自噬机制在ALS发病中的作用及意义。方法选择SOD1-G93A转基因鼠进行试验,分别于发病早、中、晚期,通过RT-PCR、免疫荧光检测小鼠海马组织中Atg4B、LC3-Ⅱ在m RNA、蛋白水平的表达及变化。结果与野生型鼠相比较,转基因鼠的Atg4B在m RNA及蛋白水平表达均下调;LC3-Ⅱ在蛋白水平表达上调,在m RNA水平变化不明显。结论自噬相关基因Atg4B及LC3-Ⅱ参与了ALS发病,ALS海马组织的病变与自噬异常有关。

Beclin-1、LC3-Ⅱ在宫颈病变组织中的表达及意义

目的检测Beclin-1、LC3-Ⅱ在宫颈病变组织及HPV感染中的表达,并探讨其临床意义。方法选取昆明医科大学第二附属医院妇科2014年10月至2016年6月的行宫颈癌筛查(HPV、TCT)的患者,筛查结果任意一项异常患者均行宫颈活检,最终选取病检结果为正常的宫颈组织40例(其中HPV感染20例,无HPV感染20例);CINⅠ30例;CINⅡ/Ⅲ30例;年龄范围为25～55岁;妊娠及已行宫颈治疗过的患者不纳入研究范围。用Western Blot法检测正常宫颈组织、CINⅠ及CINⅡ/Ⅲ组织中Beclin-1、LC3-Ⅱ相对表达量。结果 (1)Beclin-1在正常的宫颈组织、CINⅠ及CINⅡ/Ⅲ组织中的相对表达量分别为(0.561±0.041)、(0.421±0.018)、(0.351±0.016);LC3-Ⅱ在正常宫颈组织、CINⅠ及CINⅡ/Ⅲ组织中的相对表达量为(0.683±0.027)、(0.435±0.029)、(0.325±0.017);Beclin-1、LC3-Ⅱ在3组间的相对表达量差异有统计学意义(P <0.001);Beclin 1,LC3-Ⅱexist in the relative expression between the 3 group were statistically significant (P <0.001)(2)病检结果为正常的宫颈组织中HPV感染组中Beclin-1和LC3-Ⅱ的相对表达量均显著低于无HPV感染组(P <0.05)。结论随着宫颈病变级别的增加,自噬相关基因Beclin-1、LC3-Ⅱ的相对表达量呈下降趋势,提示自噬基因活性下降或缺失可能参与宫颈癌的进展。

针刺百会穴对阿尔茨海默病模型大鼠自噬相关蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ的影响

目的:观察针刺百会穴对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马区自噬相关蛋白1(Beclin1)和微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(microtubule-associated protein light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)的影响,探讨针刺治疗AD的可能作用机制。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、针刺组,每组10只,空白组常规喂养,不给予任何干预,假手术组在双侧脑室注射人工脑脊液,模型组、针刺组以链脲佐菌素(STZ)双侧脑室注射诱导阿尔茨海默病模型,并确认造模成功。针刺组选取百会穴进行针刺治疗,造模成功后第2天针刺,连续干预28 d。28 d后利用水迷宫检测大鼠学习记忆能力,免疫印迹法(WB)观察脑组织内自噬相关蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达。结果:假手术组逃避潜伏期以及跨越平台次数与空白组比较,差异无统计学意义(P>0.05);与空白组比较,模型组逃避潜伏期延长、跨越平台次数减少,差异有统计学意义(P<0.01),大鼠出现明显的学习记忆障碍;与模型组比较,针刺组逃避潜伏期明显降低、跨越平台次数增加(P<0.05)。假手术组Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达与空白组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);模型组海马组织中Beclin-11、LC3-Ⅱ蛋白表达均低于空白组(P<0.05);针刺组Beclin-11、LC3-Ⅱ蛋白表达高于模型组(P<0.01)。结论:针刺百会穴可提高阿尔茨海默病大鼠海马区Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达,改善大鼠学习记忆能力;针刺百会穴治疗AD的机制之一可能是调控自噬相关蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达。

风湿性瓣膜病患者主动脉瓣组织Beclin1及LC3-Ⅱ的表达及意义

目的:探讨自噬相关蛋白Beclin1及微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)在风湿性瓣膜病组织中的表达及意义。方法:选取2015年10月至2017年10月广西医科大学第一附属医院收治的风湿性心瓣膜病主动脉瓣狭窄或风湿性心脏病联合瓣膜病变主动脉瓣狭窄病例为实验组,同期选取A型主动脉夹层需行Bentall手术或Bentall+Suns手术健康主动脉瓣病例为对照组;主动脉根部切开,灌注心脏停搏液,心脏停跳后即刻切取主动脉瓣;采用免疫组化染色及western blotting检测瓣膜组织中Beclin1和LC3-Ⅱ蛋白的定位及表达差异。结果:实验组的主动脉瓣膜组织中Beclin1和LC3-Ⅱ蛋白表达含量高于对照组(P<0.05)。结论:风湿性瓣膜病存在自噬现象,自噬因素可能参与风湿性瓣膜病的发病。

补肾活血方对人胚肺成纤维细胞IL-17A、LC3-Ⅱ影响的实验研究

目的 探讨补肾活血方对人胚肺成纤维细胞的作用机制。方法 首先,观察不同浓度的含药血清对人胚肺成纤维细胞的抑制情况及细胞内的胶原蛋白的含量,确定出实验用含药血清的最佳血药浓度;其次,应用TGF-β1诱导人胚肺成纤维细胞,将实验细胞分为空白对照组,TGF-β1处理组,TGF-β1处理+最佳浓度含药血清干预1 h组(含药血清组),TGF-β1处理+基因敲除阴性对照组(sh-NC组),TGF-β1处理+IL-7A基因敲减组(sh-IL-17A组),TGF-β1处理+最佳浓度含药血清干预1 h+过表达质粒阴性对照组(Vector组),TGF-β1处理+最佳浓度含药血清干预1 h+IL-17A过表达质粒组(IL-17AOE组),进行相应药物培养后,检测各组细胞的增值率、胶原蛋白及IL-17A表达量的变化。结果 TGF-β1处理组中人胚肺成纤维细胞的增值率、胶原蛋白、IL-17A蛋白含量及IL-17A mRNA表达量较空白对照组明显增多(P<0.05);含药血清组细胞的增值率、胶原蛋白、IL-17A蛋白含量及IL-17A mRNA表达量较TGF-β1处理组明显较少,而自噬小体的数量较TGF-β1处理组明显增多;sh-IL-17A组细胞的增值率、胶原蛋白、IL-17A蛋白含量及IL-17A mRNA表达量较sh-NC组明显较少,而自噬小体的数量较sh-NC组明显增多;IL-17AOE组细胞的增值率、胶原蛋白及IL-17A mRNA等各项指标较Vector组明显增多,而自噬小体的数量较Vector组明显减少。结论 补肾活血方可以对MRC-5细胞中的胶原显著降解。这一作用与抑制IL-17A介导的通路,激活细胞自噬,进一步降解胶原蛋白有关。

电针对脑缺血再灌注大鼠自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1表达的影响

目的观察电针对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的改善程度及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1表达的影响。方法根据随机数字表法,将72只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和电针组,每组24只。采用Longa线栓法建立改良的急性局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,并在缺血1 h后进行再灌注。参照改良的Zea Longa 8级神经功能缺损评分法对3组大鼠脑神经功能损伤程度进行评估。电针组于造模成功后5 min和16 h进行电针干预。于再灌注后24 h取材。TTC染色法观察各组大鼠脑梗死体积;HE染色法观察大鼠脑组织病理学变化;Western blot检测大鼠右侧纹状体脑组织中LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达,qPCR检测Beclin1 mRNA表达。结果对照组无行为学改变,模型组神经功能缺损评分显著高于对照组(P<0.05);与模型组比较,电针组神经功能缺损评分明显低于模型组(P<0.05)。电针组脑梗死体积较模型组明显减少(P<0.05)。与模型组比较,电针组LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达明显增加(P<0.05),Beclin1 mRNA的表达亦明显增加(P<0.05)。结论电针治疗可能通过促进自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1的表达,调控自噬的发生,减小大鼠脑梗死体积,改善神经功能缺损,实现对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护效应。

基于“肾脑相济”理论的电针疗法对SAMP8小鼠海马内线粒体自噬相关蛋白LC3-Ⅱ及Bnip3表达的影响

目的:研究以"肾脑相济"理论为指导的电针疗法对阿尔茨海默病小鼠(SAMP8)海马内线粒体自噬相关蛋白LC3-Ⅱ及Bnip3的影响,探究以"肾脑相济"为治疗原则的电针疗法对阿尔茨海默病的治疗机制。方法:6只SAMR1小鼠作为对照组,18只SAMP8小鼠随机分为模型组,西药组及电针组。西药组采用美金刚灌胃,电针组采用电针刺激"百会""肾俞""太溪"。连续8周;运用免疫组化染色观察比较海马CA1区蛋白LC3-Ⅱ及Bnip3的形态学变化,Western Blot检测海马LC3-Ⅱ及Bnip3的蛋白表达水平。结果:免疫组化结果显示,模型组小鼠海马CA1区细胞质染色较深,呈棕褐色,与模型组相比,西药组,电针组大鼠海马CA1区细胞的细胞质染色较浅,细胞层细胞数量多,排列整齐,神经元结构完整,胞质染色均匀,清晰。Western Blot检测显示,与模型组相比,电针组和西药组LC3-Ⅱ及Bnip3的蛋白含量低于模型组(P<0.05)。结论:以"肾脑相济"理论为指导的电针疗法,能够通过降低阿尔茨海默病小鼠脑内海马CA1区神经元内线粒体自噬的发生,进而有助于神经元的再生与修复。

自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和p62在不明原因复发性流产患者绒毛组织中的表达和临床意义

目的探讨自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和p62在不明原因复发性流产(URSA)患者绒毛组织中的表达和临床意义。方法选取2020年3-7月在该院妇产科行清宫术的URSA患者及行人工流产术的正常妊娠者分别作为URSA组和对照组,每组10例。采用HE染色观察两组绒毛组织形态学差异,采用Western blot检测两组绒毛组织中LC3-Ⅱ、p62蛋白的表达水平,并通过免疫组化实验观察两组患者绒毛组织中LC3-Ⅱ、p62的定位和表达情况。结果HE染色结果显示,URSA组绒毛组织内部细胞出现皱缩,颜色暗红,细胞之间出现断离,绒毛组织有破损。Western blot检测结果显示,与对照组比较,URSA组中LC3-Ⅱ蛋白表达量上调、p62的表达量下调,差异均有统计学意义(P<0.01)。免疫组化试验结果显示,LC3、p62蛋白主要定位于细胞质,表达情况与Western blot检测结果一致。结论URSA患者绒毛组织中LC3-Ⅱ蛋白表达上调,p62蛋白表达下调,提示细胞自噬可能参与URSA的发生。

HBV-ACLF患者血清Beclin1、LC3-Ⅱ的表达水平及其临床意义

目的探究乙型肝炎相关性慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)患者血清自噬相关蛋白(Beclin1)、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)的表达水平及其与HBV-DNA载量、肝病严重程度及预后的关系。方法回顾性分析2016年1月至2019年1月本院诊治的102例HBV-ACLF患者(研究组)和同期入院健康体检的志愿者68名(对照组)的临床资料,酶联免疫吸附法检测血清Beclin1、LC3-Ⅱ表达水平,比较两组血清Beclin1、LC3-Ⅱ的表达水平,并分析研究组不同预后的患者血清Beclin1、LC3-Ⅱ表达水平、HBV-DNA载量、肝病严重程度[终末期肝病模型(MELD)评估],分析血清Beclin1、LC3-Ⅱ的表达水平及其与HBV-DNA载量、肝病严重程度的关系。结果研究组血清Beclin1、LC3-Ⅱ表达水平明显高于对照组(P<0.05),研究组存活者血清Beclin1、LC3-Ⅱ表达水平、HBV-DNA载量、MELD评分、Tbil与死亡者比较明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);二元Logistic回归分析显示Beclin1、LC3-Ⅱ表达水平、HBV-DNA载量、肝脏严重程度是HBV-ACLF患者预后的影响因素(P<0.05)。偏相关分析提示血清Beclin1、LC3-Ⅱ水平与HBV-DNA载量、MELD评分均呈明显的正相关(P<0.05)。结论HBV-ACLF患者血清Beclin1、LC3-Ⅱ的表达水平呈明显升高趋势,且Beclin1、LC3-Ⅱ的表达水平与HBV-DNA载量、肝脏严重程度呈明显的正相关,积极监测HBV-ACLF患者Beclin1、LC3-Ⅱ水平或可为疾病预后评估提供参考。

平喘颗粒对哮喘大鼠肺组织Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达的影响

目的:通过测定Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达,探讨平喘颗粒对哮喘大鼠自噬的抑制机理。方法:随机将30只Wistar大鼠分为3组,正常组、模型组、平喘颗粒组,每组10只。在第2次致敏后第4天开始给予给与中药药液灌胃。平喘颗粒组按体质量给予平喘颗粒溶液1 mL/100 g灌胃,激发阶段则每次激发前1h灌胃;正常组与模型组均予等量生理盐水灌胃。各组均于末次激发24 h后处死,取肺组织,光镜下观察肺组织的病理学改变。采用免疫组化SP法检测肺组织Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达。结果:平喘颗粒组和模型组大鼠肺组织Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达均高于正常组,差异有统计学意义(P<0.01);平喘颗粒组Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白的表达较模型组明显受到抑制,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:平喘颗粒能减轻哮喘后的炎症反应,并且可抑制细胞自噬信号通路,从而保护肺部组织细胞,减轻哮喘发作。

自噬相关蛋白mTOR、LC3-Ⅱ及HIF-1α与PM/DM的相关性

目的检测自噬相关蛋白m TOR和LC3-Ⅱ及HIF-1α在PM/DM患者肌肉组织中的表达水平,进一步探讨自噬相关蛋白m TOR、LC3-Ⅱ及HIF-1α在PM/DM发病机制中的作用及意义。方法应用免疫组化法测定PM/DM患者肌肉组织中m TOR、LC3-Ⅱ、HIF-1α的表达水平,并行相关研究。结果 PM和DM组肌肉组织中m TOR蛋白的阳性表达水平均低于Control组(P<0.05); PM和DM组肌肉组织中LC3-Ⅱ蛋白的阳性表达水平均高于Control组(P<0.05); PM组和DM组中m TOR与LC3-Ⅱ蛋白的表达水平均呈负相关(P<0.05); DM组中HIF-1α蛋白的阳性表达水平高于PM组和Control组(P<0.05); PM和DM组MDAAT+VAS评分与LC3-Ⅱ蛋白表达水平均呈正相关(P<0.05)。差异均有统计学意义。结论自噬相关蛋白m TOR、LC3-Ⅱ可能参与了PM/DM的发病,LC3-Ⅱ与疾病的活动度有关; HIF-1α参与了DM的发病。

LC3-Ⅱ和Beclin1在糖尿病脑缺血后处理大鼠海马CA1区表达及意义

目的糖尿病会使毒性物质在脑内蓄积、内源性保护性物质生成减少以及重要蛋白表达或活性改变。探讨糖尿病对脑缺血后处理脑保护作用的影响及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1在其中所发挥的作用。方法将80只雄性SD大鼠随机数字表法分为假手术组、全脑缺血再灌注组、脑缺血后处理组、糖尿病脑缺血后处理组,每组20只。脑缺血后处理组大鼠即采用改良Pulsinelli 4血管阻断(4-VO)法制作全脑缺血再灌注大鼠模型,恢复再灌注前即刻给予再灌注15 s/缺血15 s,重复3次。糖尿病脑缺血后处理组组大鼠即采用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型,剩余同脑缺血后处理模型。造模成功后1、6、24、48、72 h光镜下观察海马CA1区神经元细胞形态变化,免疫组化法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1表达的变化。比较脑缺血后处理对血糖正常大鼠与糖尿病大鼠海马CA1区LC3-Ⅱ、Beclin1表达的影响。结果 HE染色结果显示,与假手术组比较,其他3组大鼠海马CA1区神经元细胞结构破坏,各时间点存活神经元细胞数量下降(P<0.05);与脑缺血再灌注组比较,脑缺血后处理组、糖尿病脑缺血后处理组大鼠海马CA1区神经元细胞结构损伤减轻,各时间点存活神经元细胞数量明显增多(P<0.05);与脑缺血后处理组比较,糖尿病脑缺血后处理组大鼠海马CA1区神经元细胞结构损伤加重,缺血再灌注1、6、24、48、72 h存活神经元细胞数量明显下降[(124.24±2.63)/HP vs(104.27±2.18)/HP,(117.80±3.37)/HP vs(95.13±4.22)/HP,(106.28±2.15)/HP vs(82.84±3.31)/HP,(92.20±4.61)/HP vs(68.11±2.45)/HP,(71.14±3.94)/HP vs(60.99±2.11)/HP,P<0.05]。免疫组化染色结果显示,与假手术组比较,其他3组大鼠各时间点海马CA1区LC3-Ⅱ、Beclin1表达增加(表达变化为1、6、24 h表达量逐渐上升,24 h表达到高峰,48、72 h表达量逐渐下降),与脑缺血再灌注组比较,脑缺血后处理组、糖尿病脑缺血后处理组大鼠各时间点海马CA1区LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达明显增加(P<0.05);与脑缺血后处理组比较,糖尿病脑缺血后处理组大鼠组缺血再灌注1、6、24、48、72 h海马CA1区LC3-Ⅱ表达明显下降[(16.45±0.24)/HP vs(12.33±0.16)/HP,(24.88±0.45)/HP vs(19.70±0.61)/HP,(36.40±0.47)/HP vs(30.93±0.78)/HP,(31.36±0.59)/HP vs(25.78±0.80)/HP,(27.59±0.65)/HP vs(22.21±0.21)/HP,P<0.05]、Beclin1蛋白表达明显下降[(14.60±0.43)/HP vs(9.42±0.34)/HP,(20.28±0.45)/HP vs(15.70±0.61)/HP,(30.40±0.47)/HP vs(24.93±0.78)/HP,(26.56±0.69)/HP vs(21.78±0.80)/HP,(23.89±0.38)/HP vs(18.21±0.21)/HP,P<0.05]。结论糖尿病弱化了脑缺血后处理的脑保护效应,其机制可能与下调LC3-Ⅱ、Beclin1表达有关。

扶脾柔肝方对肝纤维化大鼠自噬相关蛋白Beclin-1及LC3-Ⅱ表达的影响

目的探讨扶脾柔肝方(FRF)对肝纤维化大鼠肝组织自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响。方法将70只SD大鼠随机分为正常组,模型组,FRF高、中、低剂量组(17.08、8.54、4.27g·kg^-1),秋水仙碱组(0.2mg·kg^-1),扶正化瘀组(0.415g·kg^-1)。采用大鼠腹腔注射50%CCl4橄榄油溶液(1.5mL·kg^-1)联合灌胃30%乙醇(10mL·kg^-1)制备肝纤维化模型,连续造模8周;其后灌胃相应药物(10mL·kg^-1),每日1次,连续4周,正常组、模型组给予等体积生理盐水。检测大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)、γ-谷氨酰基转移酶(γ-GGT)及总胆红素(TBIL)水平;Masson染色法观察大鼠肝纤维化程度;透射电镜观察大鼠肝组织超微结构;免疫组化法检测肝组织中平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;qRT-PCR以及WesternBlot法检测大鼠肝组织Beclin-1、LC3-ⅡmRNA及蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠血清ALT、AST、γ-GGT、TBIL含量显著增高(P<0.05,P<0.01),ALB含量显著降低(P<0.01),肝组织α-SMA蛋白及Beclin-1和LC3-ⅡmRNA、蛋白表达上调(P<0.01)。与模型组比较,FRF中、高剂量组的γ-GGT显著下降(P<0.05,P<0.01),FRF各剂量组的大鼠血清ALT、AST、TBIL明显降低(P<0.05,P<0.01),ALB升高(P<0.05,P<0.01),肝组织α-SMA蛋白及Beclin-1、LC3-ⅡmRNA、蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论FRF能干预纤维组织增生,改善肝功能,其抗肝纤维化机制可能与下调Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白的表达,抑制细胞自噬功能相关。