凋亡抑制蛋白抑制剂LCL161促进人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的机制

目的:探讨LCL161促进人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的机制,为LCL161针对三阴性乳腺癌的治疗提供理论依据。方法:通过线粒体膜电位检测法,确定LCL161是否能够促进人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡,免疫印迹法(western-blot)检测凋亡相关基因的蛋白表达情况。结果:随着LCL161的浓度逐渐增强,Bax(Bcl-2 associated x protein)蛋白表达呈递增趋势,而Bcl-2(B cell lymphomal 2),Mcl-1(Myeloid cell leukemia 1)蛋白的表达呈递减趋势;随着药物作用时间的延长,cIAP1(Cellular inhibitor of apoptosis protein 1)的蛋白的表达呈逐渐减少的趋势;但cIAP2(Cellular inhibitor of apoptosis protein 2)、XIAP(X-linked inhibitor of apoptosis)的蛋白表达变化不明显。结论:LCL161能够促进人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡,其促进凋亡的机制可能是通过下调cIAP1、Bcl-2、Mcl-1的表达。

Smac类似物LCL161对肝癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨SmaC类似物lCl161对肝癌hep g2,SmmC7721细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法:mTT法检测lCl161对肝癌细胞增殖的影响,克隆形成实验观察低浓度lCl161对肝癌细胞增殖的影响,pi染色流式细胞术检测细胞凋亡,jC-1染色检测线粒体膜电位的变化,WeSTern印迹检测聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly(adp-riboSe)polymeraSe,parp],磷酸化蛋白激酶B(phoSphorylaTed proTein kinaSe B,p-akT)、细胞凋亡抑制蛋白1(Cellular inhibiTor of apopToSiS proTein 1,C iap1)、X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(X-linked inhibiTor of apopToSiS proTein,Xiap)的蛋白表达。结果:lCl161在1~16μmol/l浓度范围内对肝癌hep g2,SmmC7721细胞具有显著的增殖抑制作用(p<0.01),48 h的iC50值分别为4.3,4.9μmol/l。低浓度的lCl161能明显抑制肝癌细胞克隆的形成。lCl161可诱导肝癌细胞发生明显的细胞凋亡(p<0.01),2,4,8μmol/l的lCl161作用于hep g2细胞48 h的凋亡率分别为(15.2±2.8)%,(28.7±3.0)%,(34.6±2.3)%,对照组的细胞凋亡率为(1.5±0.8)%;作用于SmmC7721细胞的凋亡率分别为(12.2±2.4)%,(22.4±2.7)%,(30.2±2.4)%,对照组的细胞凋亡率为(1.8±0.6)%。jC-1染色结果表明,lCl161作用后hep g2和SmmC7721细胞的线粒体膜电位降低。lCl161处理肝癌细胞后促进parp的剪切,下调p-akT的蛋白表达以及降解C iap1。结论:lCl161对肝癌细胞hep g2,SmmC7721具有显著的增殖抑制及凋亡诱导作用,其机制可能与降低线粒体膜电位、下调p-akT的蛋白表达以及降解C iap1相关。

Smac类似物LCL161对非小细胞肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响及其机制

目的探讨Smac类似物LCL161对非小细胞肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响及其机制。方法将处于对数生长期的A549细胞分为对照组(0.1%二甲基亚砜)及5、10、20 mmol/L LCL161组,分别采用相应药物干预24 h、48 h、72 h后,用四甲基偶氮唑盐法检测各组细胞的增殖情况,药物干预48 h后用Hoechst荧光染色法计数凋亡细胞。取对照组及5、10 mmol/L LCL161组培养48 h后的细胞,用免疫印迹法检测X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)的蛋白表达情况。结果各时点,对照组、5 mmol/L LCL161组、10 mmol/L LCL161组、20 mmol/L LCL161组A549细胞A_(490)值依次降低(均P<0.05);5 mmol/L LCL161组、20 mmol/L LCL161组A549细胞A_(490)值随时间延长而降低(均P<0.05),10 mmol/L LCL161组A549细胞72 h A_(490)值均低于24 h、48 h(均P<0.05)。对照组、5 mmol/L LCL161组、10 mmol/L LCL161组、20 mmol/L LCL161组A549细胞凋亡数依次增高(均P<0.05)。对照组、5 mmol/L LCL161组、10 mmol/L LCL161组XIAP蛋白表达水平依次降低,而Bax和Caspase-3蛋白表达水平依次升高(均P<0.05)。结论 LCL161对肺癌A549细胞具有增殖抑制及凋亡诱导作用,其机制可能与下调XIAP、上调Bax和Caspase-3相关。

LCL161联合多西他赛对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖、凋亡的影响及机制

目的观察LCL161联合多西他赛对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖及凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 CCK-8法测算1～5μmol/L浓度的LCL161作用于MCF-7细胞24 h后的细胞存活率,选取对细胞增殖无明显抑制作用、细胞毒性较小的2μmol/L浓度的LCL161用于后续实验。将MCF-7细胞分为4组,LCL161组加入2μmol/L的LCL161,多西他赛组加入0. 6 mg/L的多西他赛,LCL161联用多西他赛组加入0. 6 mg/L的多西他赛和2μmol/L的LCL161,对照组加入不含药物的培养液。采用CCK-8法测算各组细胞存活率,采用细胞集落克隆实验检测各组细胞集落克隆能力;采用Hoechst33258染色法观察各组细胞晚期凋亡情况,采用流式细胞术测算各组细胞凋亡率,采用Western blotting法检测各组细胞凋亡抑制蛋白c IAP1、c IAP2及程序性坏死蛋白RIP1。结果LCL161组、多西他赛组、LCL161联用多西他赛组、对照组的细胞存活率分别为86. 84%±3. 83%、81. 29%±6. 71%、46. 91%±4. 76%和92. 77%±2. 18%,集落数目分别为(117±14)、(95±9)、(61±12)、(132±7)个,LCL161组与对照组相比,P> 0. 05;其余组间两两相比,P均<0. 05。LCL161组细胞膜通透性增加,染色质固缩,部分细胞发生了核碎裂;多西他赛组和对照组的细胞核均匀淡染,细胞核形态呈椭圆形,细胞膜相对完整; LCL161联用多西他赛组细胞数量明显减少,细胞核碎裂,部分发生了核解体。LCL161组、多西他赛组、LCL161联用多西他赛组、对照组细胞凋亡率分别为15. 16%±2. 26%、21. 42%±1. 17%、34. 38%±3. 27%、5. 18%±0. 89%,LCL161组与对照组相比,P> 0. 05;其余组间两两相比,P均<0. 05。LCL161组、多西他赛组、LCL161联用多西他赛组、对照组c IAP1蛋白的相对表达量分别为0. 41±0. 09、0. 29±0. 11、0. 11±0. 04、0. 62±0. 17,c IAP2蛋白的相对表达量分别为0. 86±0. 11、0. 77±0. 15、0. 51±0. 12、0. 98±0. 01,LCL161组与对照组相比,P> 0. 05;其余组间两两相比,P均<0. 05。LCL161组、多西他赛组、LCL161联用多西他赛组、对照组RIP1蛋白的相对表达量分别为1. 97±0. 22、1. 84±0. 19、3. 17±0. 26、1. 00±0. 07,LCL161组与多西他赛组相比,P> 0. 05;其余组间两两相比,P均<0. 05。结论LCL161联合多西他赛可抑制乳腺癌细胞的增殖,促进其凋亡; LCL161联合多西他赛可通过下调凋亡抑制蛋白、上调程序性坏死蛋白的表达,诱导乳腺癌细胞的凋亡及程序性坏死来发挥抗肿瘤作用。

凋亡抑制蛋白抑制剂LCL161对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响

目的探讨凋亡抑制蛋白抑制剂LCL161对人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖的影响。方法 (1)体外实验:将乳腺癌MDA-MB-231细胞分为6组,对照组不接受任何药物处理,其余5组分别给予1、10、100 nmol/L和1、10μmol/L LCL161溶液处理。用MTT法检测LCL161对乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖能力的影响,分别于24、48、72 h在酶标仪上检测490 nm波长下吸光度值,每组重复5次;(2)体内实验:建立人乳腺癌裸鼠种植瘤模型,用随机数字表法分为3组:对照组、LCL161组、多柔比星组,每组10只。对照组每只予以灌胃法注射醋酸钠溶液0.2 ml及腹腔注射0.9%Na Cl溶液0.2 ml,LCL161组每只予以灌胃法注射LCL161 30 mg/kg及腹腔注射0.9%Na Cl溶液0.2 ml,多柔比星组每只予以灌胃法注射醋酸钠溶液0.2 ml及腹腔注射多柔比星20 mg/kg。灌胃法注射每周2次,腹腔注射每2日1次。2周后停止给药。分别于停药后第5、8、11、14、17、20天检测各组裸鼠种植瘤的体积。之后处死裸鼠,皮下剥离肿瘤,称取各组肿瘤质量。各组吸光度值、种植瘤体积及质量用x珋±s表示,样本间均数比较采用重复测量因素的方差分析和单因素方差分析。结果 (1)体外实验显示不同药物浓度组吸光值差异有统计学意义(F=928.69,P<0.001)。3个时间点吸光度值之间差异有统计学意义(F=34.77,P<0.001)。药物浓度与时间之间有交互作用(F=98.50,P<0.001)。(2)体内实验各组小鼠种植瘤体积,各组间比较差异有统计学意义(F=257.38,P<0.001)。不同时间点小鼠种植瘤体积之间比较差异有统计学意义(F=1907.00,P<0.001)。分组与时间之间存在交互作用(F=103.63,P<0.001)。对照组、多柔比星组及LCL161组小鼠种植瘤的平均体质量分别为(1.83±0.23)、(0.85±0.06)、(0.70±0.10)g,差异有统计学意义(F=174.82,P<0.001)。结论 LCL161能抑制MDA-MB-231细胞的增殖,对活体裸鼠体内MDA-MB-231种植瘤的生长具有抑制作用,有望成为治疗三阴性乳腺癌的新靶点药物。