接触2-乙氧基乙醇对LDH-C4活性影响与精子毒性的关系

为研究ＥＥ精子毒性及生物效应标志物，对ＰＳ版作业男工ＬＤＨ－Ｃ４活性／精子毒性进行调查，同时对小鼠附睾组织匀浆ＬＤＨ－Ｃ４活性测定。结果表明接触ＥＥ在７７ｍｇ／ｍ３以上男工精液ＬＤＨ－Ｃ４活性受到抑制。随着接触水平增加，ＬＤＨ－Ｃ４活性下降越明显，呈明显的剂量－反应关系。在２４３ｍｇ／ｋｇ剂量以上，小鼠ＬＤＨ－Ｃ４活性也显著下降，亦有相同的规律，提示ＬＤＨ－Ｃ４活性降低可以作为精子毒效应评价指标。

定量ELISA检测小鼠血清中抗LDH-C4IgG2b抗体的水平

用定量ELISA的方法检测背部携带分泌抗LDH -C4IgG2b抗体杂交瘤小鼠的血清中IgG2b抗体浓度 ,结果表明 :本法稳定 ,批间变异系数为 7 0 4%～ 13 30 % ,批内变异系数为 3 6 1%～ 10 2 0 % ;标准曲线相关性良好 ,相关系数从 0 96 2 884～ 0 996 795 ;灵敏度较高 ,最低检出浓度为 0 0 1mg/L ;

人精子特异性乳酸脱氢酶-C4潜在B细胞抗原表位预测

应用生物软件和互联网服务器对人乳酸脱氢酶-C4（1actate dehydrogenase C4，LDH—C4）的二级结构、可塑性、亲水性、表面可及性及抗原指数等参数进行综合分析，预测其B细胞抗原表位分布．人LDH-C4存在多个潜在的B细胞抗原表位，可能位于第13—22、97—107、216—227位氨基酸区域．运用生物信息学方法确定了人LDH—C4可能存在3个B细胞抗原表位，对进一步研究人LDH—C4的抗原性和研发表位避孕疫苗具有重要意义．

乳酸脱氢酶C4的精子免疫荧光定位特性

用１４个抗小鼠ＬＤＨ－Ｃ４的单克隆抗体对小鼠、树鼯和人精子的ＬＤＨ－Ｃ４进行了间接免疫荧光定 位。结果显示：不同的单抗可以结合到小鼠精子表面不同的位置，其中ＰＡ１（Ｋ０２１）在尾部，ＰＡ２ （Ｋ０２２）、ＰＡ４和ＰＡ５（Ｋ０２３）在中段和尾部， ＳＭ１、 ＳＭ２和ＰＧ２在中段， ＳＭ３和ＳＭ４在顶体， ＳＭ５ 在顶体和赤道板。人和树鼯精子表面的ＬＤＨ－Ｃ４也呈现类似的情况。这些研究表明精子表面的 ＬＤＨ－Ｃ４呈现多位点分区分布，精子的不同部位暴露的ＬＤＨ－Ｃ４的抗原决定簇不同。在被检动物中， ＬＤＨ－Ｃ４显示明显的同源性。

精子特异性乳酸脱氢酶-C4的研究进展

LDH C4是避孕疫苗研制中最有特征性的精子特异性抗原之一。LDH C基因在生精细胞激活而在体细胞受抑制 ,存在LDH C启动子、多种转录因子、CpG岛甲基化等多种因素在转录水平上发挥基因调节作用。针对LDH C4的高水平抗体能有效阻断受精 ,而天然LDH C4经过化学修饰后显示高度免疫原性 ,能诱导同种异体免疫性不孕。

大鼠精子特异的LDH-C_4的提纯及其免疫性质分析

采用硫酸铵盐析、N^6-(6氨己基)-5′-AMP-Sepharose亲和层析和DEAE-Cellulose离子交换层析,从大鼠睾丸中纯化了LDH-C_4。比活性为16.3 IU/mg,纯化1087倍,产率32.5％。纯化的LDH-C_4经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定为一条酶带。将纯化的LDH-C_4免疫兔制备了效价为1:64的抗血清。BA-ELISA检测抗血清与大鼠心脏、肌肉和人、小鼠睾丸提取液之间的交叉反应,结果表明抗血清与大鼠心脏、肌肉提取液间存在微弱的交叉反应,而双向免疫扩散未形成沉淀线;抗血清与小鼠睾丸提取液之间存在很强的交叉反应,但与人睾丸提取液之间的交叉反应却很弱,双向免疫扩散显示它们的抗原决定簇部分相同,提示不同种属的LDH-C_4之间抗原性存在差异。

不明原因男性不育人群中睾丸特异性乳酸脱氢酶基因突变的发现及其意义

为了研究睾丸特异性乳酸脱氢酶,即乳酸脱氢酶C4(LDH-C4)基因突变在男性不育发病中的作用,利用LDH-C4特异性底物对100名不明原因男性不育症患者的精子LDH-C4进行活性显色,用变性高效液相色谱(DHPLC)技术对LDH-C4活性低下的患者进行LDHC基因PCR产物的突变筛查,对DHPLC峰形异常的PCR产物进行序列测定.筛选到一组精子LDH-C4活性明显下降的患者,其中1名患者的LDHC基因PCR产物在DHPLC中呈异常洗脱峰.对这一PCR产物进行序列测定,发现患者LDHC基因第5外显子的115位碱基发生了T→A的杂合改变(GenBank登录号GU479375),该突变使LDHC基因的178位密码子由原来的TTG(编码亮氨酸)变为TAG(终止密码子),形成截短的C亚基.T克隆-测序进一步证实了该无义突变的杂合状态.这是在人类LDHC基因上发现的第一个突变,提示LDHC基因突变可能是男性不育发病的原因之一.

乳酸脱氢酶C_4在早期邪毒壅盛证荷瘤小鼠肿瘤组织中的表达及意义

目的探讨乳酸脱氢酶C4(LDH-C4)在邪毒壅盛证荷瘤小鼠肿瘤组织的表达水平及其意义。方法采用Affy-metrix Gene Chip Mouse Exon 1.0 ST Array及其方法检测乳酸转运和氧化相关基因在H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛、早期气虚、中期阳气虚及中晚期气阴阳虚证肿瘤组织基因表达的差异,芯片重复两次;并采用实时荧光定量PCR对两种高乳酸亲和力的脱氢酶基因Ldhb和Ldhc在各种证候中的表达量进行检测。结果乳酸转运相关基因的表达要高于氧化相关基因,尤其以H22接种后早期最明显;Ldhb基因的表达在H22接种后早期、中期和晚期变化不明显,而Ldhc基因在H22接种后早期气虚、中期和晚期的表达也不明显,且与Ldhb表达量相近,但它在早期邪毒壅盛证荷瘤小鼠肿瘤组织中表达量显著升高。结论在荷瘤小鼠肿瘤组织中,尤其是H22接种后早期,肿瘤细胞产生的乳酸作用不仅在于氧化产能;LDH-C4可能代替LDH-B4参与了早期邪毒壅盛证荷瘤小鼠肿瘤组织缺氧肿瘤细胞的代谢拯救途径。

高原鼠兔血清中N-isopropyl oxamate的RP-HPLC检测方法的建立

目的：探索N-isopropyl oxamate和血清蛋白结合水平,建立高原鼠兔血液中精子型乳酸脱氢酶（LDH-C4）特异性抑制剂N-isopropyl oxamate的高效液相色谱（HPLC）检测方法。方法：取体重150-200 g高原鼠兔20只,随机分为对照组和抑制剂组（n=10）。通过外源性加入不同浓度的N-isopropyl oxamate,检测其与血清蛋白的结合水平。采用将血清先用胰蛋白酶酶解,再加入三氯乙酸的前处理法进行HPLC检测。结果：当空白高原鼠兔血清加入抑制剂标准品达到血清中浓度为0.05 mmol/L、0.1 mmol/L、1 mmol/L、10 mmol/L、16.7 mmol/L、33.3 mmol/L、100 mmol/L时,抑制剂与血清蛋白的结合率分别为100%、100%、100%、86.84%、54.11%、40.10%、20.18%。在本文建立的方法下,回收率、精密度、稳定性均良好。N-isopropyl oxamate在0.0125-0.25 mmol/L内浓度与峰面积线性关系好。空白血清加入标准品达到终浓度为0.15 mmol/L、0.3 mmol/L和1 mmol/L时,平均回收率分别为98.05%、98.98%、98.12%;精密度相对标准偏差（RSD）分别为1.17%、0.92%、0.83%;稳定性RSD分别为1.38%、1.40%、0.88%。方法的重复性RSD为1.76%,最低定量限为0.0125 mmol/L。结论：N-isopropyl oxamate与高原鼠兔血清具有很强的亲和力,直接用三氯乙酸沉淀蛋白的前处理方法无法准确检测其浓度,而先用胰蛋白酶消化血清,再用三氯乙酸沉淀蛋白的方法可实现血液中HPLC的精确检测。

精子特异性乳酸脱氢酶的免疫学特性及其应用

精子特异性乳酸脱氢酶特异地存在于鸟类和哺乳类动物的成熟睾丸和精子中 ,为精子的运动和存活提供能量。它是一种自身抗原 ,其天然抗体不与体细胞LDH同工酶发生交叉反应。用LDH C4免疫小鼠或兔等能够诱导免疫应答 ,导致生育率的降低 ,因此在人类避孕和鼠害控制方面将有较好的应用前景。

Isolation and Purification of Rat Testicular Lactate Dehydrogenase C_4

The lactate dehydrogenase isoenzyme C4 ofrat testicle was purified with a yield of 1 2.3% anda raise of specific activity to 784-fold.The purified product was PAGE homogeneous and migrated afterLDH3 during electrophoresis.

Further Analysis of El Tor Vibrio Cholerae Strains 1d:Comparison of Two Typing Methods

The lactate dehydrogenase isoenzyme C4 ofrat testicle was purified with a yield of 1 2.3% anda raise of specific activity to 784-fold.The purified product was PAGE homogeneous and migrated afterLDH3 during electrophoresis.

Effects of Multiglycoside of Tripterygium Wilfordii(GTW)on Spermatogenic Cells and Enzymatic Activities in Male Rats

This study was undertaken to observe consecutively the morphology of testis andepididymis and the changes of enzymatic activities of AKP, ACP,3β-HSD andLDH-C4 in male rats treated with GTW 30 to 80 days.In addition,male antifertility effect and its possible reversibility were also observed.The results showed that GTW is apotential testicular toxicant in the animals.It can cause damage of the sperm cells withclose relation to the treated time and dosage.Sloughing of sperm cells and manymultinucleated giant cells in the seminiferous tubules were found on day 40 and 50 afterthe treatment.The lubules were hyperatrophic and the sperm cells were almost absent atthe end of the study(80days).No obvious morphological alteration was observed in theopididymal epithelial tissue.But changes of quality and number of the spermatozoa inepididymides were found prior to those of lestes.Reduced number and abnormal caudasperm were observed 30 days after the treatment.The ACP activity of Serloli cells increased slightly,whereas foe activities of ACP and LDH-C4 decreased gradually as thetreated lime prolonged.The 3β-HSD Of Leydik.cells was changed or subtle by m-Phaseor treatment and dramatically decreased at the end of treatment.The infertility caused byGTW was reversible 8 weeks after cessation of the treatment.

乳酸脱氢酶-C_4在大鼠不同成熟期生精细胞中的定位

用ABC免疫组织化学法观察乳酸脱氢酶C_4(LDH-C_4)在性成熟后的Wistar大鼠生精上皮细胞中的定位。结果表明:LDH-C_4定位于粗线期初级精母细胞以后的各级生精细胞中,精原细胞中缺如。显微分光光度分析表明,随着精子的发生,LDH-C_4的相对含量逐渐增加,精母细胞中为0.55±0.09,精子细胞中为0.86±0.13,精子中为0.94±0.04,三者之间有显著性差异(P<0.01)。ABC免疫电镜显示LDH-C_4在大鼠精子的细胞质、线粒体及部分细胞膜上均有分布。免疫荧光显示LDH-G_4在精子表面主要定位于尾部的主段和末段,少量分布于精子头冠部。作者对LDH-C_4细胞定位的生理意义作了讨论。

鼠兔睾丸特异乳酸脱氢酶抑制物的筛选

乳酸脱氢酶C4(lactate dehydrogenase C4,LDH-C4)被认为是研发节育药物的一个很好的靶蛋白。本研究进行了对鼠兔LDH-C4蛋白有抑制作用的小分子化合物的虚拟筛选和体外酶动力学筛选。筛选出了4个IC_(50)小于100μm的小分子化合物,其ZINC数据库编号分别为ZINC05328871(5μm)、ZINC01699287(36μm)、ZINC17995347(53μm)、ZINC05390471(87μm)。这4个化合物和已报道的LDH-C4抑制物的结构均不相同,属于新的结构支架,可以作为靶向鼠兔LDH-C4的节育药物先导化合物进行进一步的研究。