丙泊酚对高糖诱导的人肾小球系膜细胞氧化应激和炎症反应的影响

目的探讨丙泊酚对高糖诱导的人肾小球系膜细胞损伤的影响。方法该研究于2021年3月至2022年3月进行。体外培养人肾小球系膜细胞,采用30 mol/L葡萄糖诱导建立人肾小球系膜细胞细胞损伤模型,用丙泊酚浓度10、20、40μmol/L处理细胞,细胞分为对照组、高糖组、高糖+低、中、高剂量丙泊酚组。酶联免疫吸附测定(ELISA)检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛、活性氧、白细胞介素(IL)-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)IL-1β表达;蛋白质印迹法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、IL-10、TNF-α、IL-1β蛋白表达。结果高糖组的丙二醛[(16.7±1.7)mmol/L比(3.8±0.4)mmol/L]、活性氧[(9.6±0.9)μg/L比(3.5±0.3)μg/L]、IL-10[(65.3±6.9)ng/L比(26.9±3.2)ng/L]、TNF-α[(105.6±10.9)ng/L比(42.8±4.8)ng/L]和IL-1β[(79.7±8.2)ng/L比(31.2±3.6)ng/L]明显高于对照组;iNOS、ICAM-1、MCP-1、IL-10、TNF-α、IL-1β蛋白表达明显高于对照组;SOD、GSH-Px明显低于对照组,均P<0.05。高糖+低剂量丙泊酚组、高糖+中剂量丙泊酚组、高糖+高剂量丙泊酚组的丙二醛、活性氧、IL-10、TNF-α和IL-1β明显低于高糖组;iNOS、ICAM-1、MCP-1、IL-10、TNF-α、IL-1β蛋白表达明显低于高糖组,均P<0.05;SOD、GSH-Px明显高于高糖组,均P<0.05。结论丙泊酚能减轻高糖诱导的人肾小球系膜细胞氧化应激和炎症反应,发挥保护肾脏的作用。

甘草酸对高糖诱导的肾小球系膜细胞炎性因子及纤维化因子的影响

目的探讨甘草酸(GA)对高糖诱导的肾小球系膜细胞(SV40 MES13)炎性因子及纤维化因子的影响。方法将培养的小鼠肾小球系膜细胞(SV40 MES13)分为对照(NG)组(5.6 mmol/L葡萄糖)、高糖(HG)组(30 mmol/L葡萄糖)及HG+GA组(30 mmol/L葡萄糖+200μmol/L GA)。采用Western blotting检测各组细胞炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6、IL-8及纤维化因子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平,免疫荧光检测各组IL-1β、TNF-α、α-SMA在细胞内的荧光表达强度,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组细胞培养上清中IL-1β、TNF-α、IL-6及IL-8的表达水平。结果Western blotting检测结果显示,与NG组比较,HG组IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8及α-SMA蛋白的表达水平明显升高(P<0.01);与HG组比较,HG+GA组IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8和α-SMA蛋白表达量降低(P<0.05)。细胞免疫荧光结果显示,与NG组比较,HG组细胞内IL-1β、TNF-α和α-SMA因子的荧光强度明显增强(P<0.05);与HG组相比,HG+GA组细胞内IL-1β、TNF-α和α-SMA因子荧光强度明显降低(P<0.05)。ELISA检测结果显示,与NG组比较,HG组细胞培养上清中IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-8蛋白表达水平升高(P<0.01);与HG组比较,HG+GA组IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8表达水平明显降低(P<0.05)。结论甘草酸对高糖诱导的肾小球系膜细胞的炎性因子及纤维化因子的表达均具有不同程度的抑制作用,可能在糖尿病肾病的预防方面发挥重要作用。

低密度脂蛋白对人肾小球系膜细胞产生炎性介质的影响

目的：探讨脂蛋白在肾小球损伤中的作用，观察人低密度脂蛋白（ＬＤＬ）对体外培养的人肾小球系膜细胞（ＧＭＣ）产生活性氧（ＲＯＳ）、血小板活化因子（ＰＡＦ）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）和乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）的影响，并与经ＬＤＬ刺激后ＧＭＣ的增殖水平相比较。方法：将ＧＭＣ加或不加ＬＤＬ刺激，分别收集３０ｍｉｎ、１８ｈ或４８ｈ后的上清，测定其Ｈ２Ｏ２、Ｏ－２、ＴＮＦ、ＰＡＦ和ＬＤＨ的水平，以四唑蓝（ＭＴＴ）摄入试验，测定刺激４８ｈ后细胞于波长５７０ｎｍ的吸光度。结果：经ＬＤＬ刺激３０ｍｉｎ，细胞上清中Ｈ２Ｏ２和Ｏ－２的含量均高于对照，在浓度＜１００ｍｇ／Ｌ时，增高更为明显。刺激１８ｈ，上清中ＰＡＦ的水平亦有类似变化。刺激４８ｈ时，上清中ＬＤＨ的水平较１８ｈ时有所增加，且在ＬＤＬ１００ｍｇ／Ｌ时高达对照的３倍以上；细胞的吸光度亦增加，大于２００ｍｇ／Ｌ时则低于对照。ＬＤＬ刺激１８和４８ｈ的细胞上清对ＴＮＦ敏感株的杀伤率虽有增加，但均未达５０％。结论：ＬＤＬ可增加体外培养的人ＧＭＣ上清中活性氧、ＰＡＦ和ＬＤＨ，或ＴＮＦ等水平，因而可通过多种途径介导肾小球损伤，包括刺激ＧＭＣ产生或释放炎性介质和影响系膜细胞增殖。

肾小球系膜细胞转化生长因子-β_1基因启动子中氧化低密度脂蛋白应答元件的研究

目的 :了解在氧化低密度脂蛋白 (Ox LDL)刺激下 ,转化生长因子 β1(TGF β1)基因启动子中顺式作用元件的应答情况。研究在大鼠肾系膜细胞中 ,Ox LDL对TGF β1基因启动子转录活性的影响作用。 方法 :用聚合酶链反应 (PCR)、酶切和亚克隆的方法 ,构建出 5个TGF β1启动子缺失体—虫荧光素酶 (luciferase)报告基因 ,利用其瞬时转染系膜细胞并检测luciferase相对活性。 结果 :在Ox LDL(10 0mg/L)刺激下 ,luciferase的活性 12h即出现 ,并于 36h达到平台期。对Ox LDL刺激的应答 ,TGF β1启动子 15 5 0到 845之间可能存在着增强子 , 6 2 9到 4 2 2之间则可能有抑制子。计算机软件分析表明 ,前者内有一转录激活蛋白 1(AP 1)精确识别位点。 结论 :在大鼠肾系膜细胞TGF β1基因启动子中 ,AP 1结合序列 (TGAGTCA)可能是应答Ox LDL的顺式作用元件。Ox LDL上调TGF β1的表达至少部分是通过AP 1蛋白来介导的 ,且Ox LDL可能通过蛋白激酶C(PKC)信号通路激活AP 1从而正调控TGF β1基因的转录过程。

miR-143-3p靶向TREM1基因对狼疮性肾炎小鼠肾小球系膜细胞炎性因子分泌及凋亡的调控机制

目的:探讨miR-143-3p靶向髓细胞触发受体1(TREM1)基因对狼疮性肾炎(LN)小鼠肾小球系膜细胞炎性因子分泌及细胞凋亡的影响。方法:免疫组化检测模型及正常小鼠肾组织中TREM1的表达。双荧光素酶报告系统结合Western blot验证miR-143-3p与TREM1的靶向关系。分离纯化模型小鼠肾小球系膜细胞,Western blot检测各组处理后肾小球系膜细胞中NF-κB p65、TNF-α、IL-1β和MCP-1的蛋白表达;CCK8法测定处理后的肾小球系膜细胞活力;流式细胞术检测各组细胞周期及细胞凋亡情况。结果:组织实验显示:与正常小鼠相比,狼疮性肾炎小鼠肾组织中TREM1高表达。同时,miR-143-3p靶向下调TREM1表达。细胞实验显示:与各自的阴性对照相比,sh-TREM1组和miR-143-3p mimic组中NF-κB p65、TNF-α、IL-1β和MCP-1蛋白表达显著下调,系膜细胞活力明显降低,更多细胞停滞在G0/G1期,但凋亡情况无显著变化。结论:miR-143-3p能下调TREM1表达从而抑制LN小鼠肾小球系膜细胞炎性因子生成以及细胞活力的增强,但对其凋亡无显著影响。

玉米须多糖对高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖及炎症因子表达的影响

目的探讨玉米须多糖(Stigma Maydis polysaccharide,SMP)对高糖刺激下大鼠HBZY-1细胞增殖、炎症因子MCP-1、IL-6在基因及蛋白水平表达的影响.方法将实验细胞分为正常对照组(NG)、高糖组(HG)、高糖加不同浓度SMP组(SMP35组、SMP70组)4组,以35、70μg/mL两个质量浓度的SMP干预高糖刺激下的大鼠HBZY-1细胞,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)光吸收法观察细胞增殖情况;应用RT-qPCR法检测HBZY-1细胞中MCP-1、IL-6 mRNA表达;应用Western Blot法检测HBZY-1细胞中MCP-1、IL-6蛋白表达.结果与NG组比较,HG组HBZY-1增殖加快(P<0.01),MCP-1、IL-6两指标的mRNA和蛋白表达均显著增加(P<0.01);与HG组比较,各质量浓度的SMP均可抑制高糖对大鼠HBZY-1细胞的增殖(P<0.01),mRNA和蛋白水平可下调MCP-1、IL-6的表达(P<0.01),且呈剂量依赖效应.结论SMP可能通过下调炎症因子MCP-1、IL-6表达,抑制高糖诱导的大鼠HBZY-1增殖,从而达到延缓糖尿病肾病发生、发展的作用.

两色金鸡菊提取物抑制高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞炎症反应及相关机制研究

目的探讨两色金鸡菊乙酸乙酯提取物对高糖诱导大鼠肾小球系膜糖尿病肾病(DN)细胞模型的影响及其作用机理。方法通过高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞建立体外DN细胞模型,应用两色金鸡菊乙酸乙酯提取物不同浓度对细胞模型进行干预后,分为正常组、高糖组及高糖+两色金鸡菊乙酸乙酯提取物不同剂量(25、50、100、150μg/mL)组共6组。采用Real time-PCR法、Western blot法,从转录水平及蛋白表达水平检测其对细胞中炎性因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)以及对NF-κB信号通路中p-65表达的影响。结果两色金鸡菊乙酸乙酯提取物能明显抑制高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞中炎症因子MCP-1mRNA和蛋白表达水平,以及ICAM-1的mRNA表达水平。两色金鸡菊乙酸乙酯提取物能明显抑制高糖诱导大鼠肾小球细胞中p-65蛋白的表达。结论两色金鸡菊乙酸乙酯提取物可能通过NF-κB信号通路抑制DN细胞模型的炎症反应。

氧化低密度脂蛋白诱导Zucker肥胖大鼠肾小球系膜细胞AP-1活性的变化

目的 :研究氧化低密度脂蛋白 (oxidizedlow densitylipoprotein ,Ox LDL)对体外培养的Zucker大鼠肾小球系膜细胞 (glomerularmesangialcell,GMC)中核转录因子激活蛋白 1(activatorprotein 1,AP 1)活化的影响 ,以及观察Ox LDL诱导的AP 1活性的变化与Zucker大鼠鼠龄以及基因型的相关性。 方法 :①采用Zucker肥胖大鼠 (3月龄和 10月龄 )及Zucker瘦型大鼠 (3月龄和 10月龄 )的 4种GMC株 (O3m,O10m,L3m,L10m)进行传代培养。②利用凝胶迁移率实验 (EMSA)和超迁移率实验检测不同浓度及不同时相Ox LDL对Zucker大鼠GMCAP 1活性的影响 ,以及AP 1二聚体中c jun和c fos成分的变化。 结果 :①经Ox LDL诱导后 ,4个组GMC内AP 1活性均较对照组明显增强 (F =177 84 ,P <0 0 1) ;②随着Ox LDL刺激浓度增加和时间的延长 ,GMC内AP 1活性相应增强 ,5 0mg/L的Ox LDL刺激 8h时 ,AP 1活性强度达最高峰 ;③Ox LDL主要激活AP 1二聚体成分中的c jun ;④O10m组AP 1的活性显著高于O3m组 (P <0 0 1) ,L10m组AP 1的活性显著高于L3m组 (P <0 0 1) ,O10m组显著高于L10m组 (P <0 0 1) ,O3m组显著高于L3m组 (P <0 0 1)。 结论 :Ox LDL可诱导Zucker大鼠GMC内AP 1活化 ,其活化方式呈时间和剂量依赖 ;活化强度与大鼠的基因型及鼠龄?

LOX-1在D-葡萄糖培育人肾小球系膜细胞的表达

目的研究血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)在D-葡萄糖培养人肾小球系膜细胞(HGMC)的表达,探讨糖尿病肾脏损伤的机制。方法体外培养HGMC,用RT-PCR法检测LOX-1 mRNA的表达,用Western blot法检测p38MAPK蛋白质的相对含量。结果D-葡萄糖以时间和浓度依赖的方式增加LOX-1 mRNA的表达,该作用可被LOX-1特异性阻滞剂JTX92部分抑制;D-葡萄糖以时间和浓度依赖的方式上调p38MAPK蛋白的表达,该作用也可被LOX-1特异性阻滞剂JTX92部分抑制。结论D-葡萄糖能以时间和浓度依赖的方式增加LOX-1的表达。高浓度D-葡萄糖可能通过上调LOX-1 mRNA表达,激活细胞内的p38MAPK信号传递途径,参与糖尿病肾病的发生发展。

霉酚酸酯对狼疮性肾炎小鼠肾小球系膜细胞增殖、炎性反应的影响及分子机制研究

目的:探究霉酚酸酯(MMF)抑制狼疮性肾炎(LN)肾小球系膜细胞(GMC)增殖及炎性反应的分子机制。方法:分离、培养LN细胞,将细胞分为:对照组,LN组,0.01μmol/L MMF组,0.1μmol/L MMF组,1.0μmol/L MMF组,转染miR-NC+LN组,转染miR-455-3p+LN组,转染anti-miR-NC+0.1μmol/L MMF组,转染anti-miR-455-3p+0.1μmol/L MMF组。用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中miR-455-3p的相对表达水平;用CCK-8法、流式细胞术、酶联免疫法(ELISA)、蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测各组细胞的增殖、凋亡率及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)水平,活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,LN组miR-455-3p相对表达水平、细胞凋亡率以及Cleaved caspase-3蛋白表达水平显著降低(均P<0.05),细胞增殖,TNF-α、IL-1β表达水平显著升高(均P<0.05);与LN组比较,0.01μmol/L MMF组、0.1μmol/L MMF组以及1.0μmol/L MMF组细胞增殖和炎症因子表达水平降低(均P<0.05),miR-455-3p、细胞凋亡率以及Cleaved caspase-3蛋白表达水平升高(均P<0.05),miR-455-3p+LN组与miR-NC+LN比较,细胞增殖和炎症因子表达水平降低(均P<0.05),miR-455-3p表达,凋亡率以及Cleaved caspase-3蛋白水平显著升高(均P<0.05);与anti-miR-NC+0.1μmol/L MMF组比较,anti-miR-455-3p+0.1μmol/L MMF组miR-455-3p表达,凋亡率及Cleaved caspase-3蛋白表达显著降低,细胞增殖和炎症因子表达水平显著升高(均P<0.05)。结论:MMF能够抑制LN肾小球系膜细胞的增殖和炎性反应、促进凋亡、改善LN,这一作用与miR-455-3p的表达调控有关。

基于自噬途径探讨黄芪甲苷抑制糖尿病肾病系膜细胞NLRP3炎症小体活化通路及机制

目的:观察黄芪甲苷对高糖刺激的小鼠肾小球系膜细胞(SV40)核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体活化通路的抑制作用,并基于线粒体自噬途径探究其作用机制。方法:小鼠SV40细胞分别在含有0~80μmol/L黄芪甲苷的DMEM培养基中体外培养48 h,通过细胞活力测试筛选出适宜的黄芪甲苷浓度进行后续实验。实验分为正常对照组(葡萄糖5.6 mmol/L)、高糖组(葡萄糖30 mmol/L)、黄芪甲苷低剂量组(葡萄糖30 mmol/L+黄芪甲苷10μmol/L)、黄芪甲苷中剂量组(葡萄糖30 mmol/L+黄芪甲苷20μmol/L)、黄芪甲苷高剂量组(葡萄糖30 mmol/L+黄芪甲苷40μmol/L),观察黄芪甲苷对小鼠SV40细胞的影响。结果:CCK-8检测结果提示黄芪甲苷浓度达到80μmol/L时小鼠SV40细胞活力明显下降,故本次研究分别选用10、20、40μmol/L作为低、中、高剂量黄芪甲苷进行后续实验。与正常对照组比较,高糖会降低小鼠SV40细胞活力并促进细胞凋亡,并可增加活性氧(ROS)与炎症因子水平,扩大炎症与氧化应激反应,LC3、Beclin1表达水平明显下调,自噬受到抑制。与高糖组比较,黄芪甲苷中、高剂量组细胞凋亡、炎症因子、ROS水平和NLRP3、Caspase-1表达水平均降低(P<0.05或P<0.01),细胞活力、LC3、Beclin-1表达水平均升高(P<0.05或P<0.01)。透射电镜观察发现高糖会减少自噬体产生,黄芪甲苷组自噬体的数目明显多于高糖组。结论:高糖可导致小鼠SV40细胞处于微炎症状态,扩大氧化应激反应并激活NLRP3炎症小体,黄芪甲苷可以抑制NLRP3表达,并提高线粒体自噬,起到减缓DN疾病进展的作用。

甘草酸通过下调缺氧诱导因子-1α抑制小鼠肾小球系膜细胞炎症因子的表达

背景甘草酸(glycyrrhizic acid,GA)在糖尿病肾病保护领域取得了很大进展。缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)与糖尿病肾病的发生密切相关,甘草酸与HIF-1α在糖尿病肾病中的作用机制仍有待探索。目的探讨甘草酸是否可通过影响HIF-1α的表达而抑制高糖条件下肾小球系膜细胞(SV40 MES13)炎症因子水平,为糖尿病肾病的治疗提供实验依据。方法培养小鼠肾小球系膜细胞(SV40 MES13),分为正常组(NG 5.6 mmol/L)、高糖组(HG 30 mmol/L)、高糖+甘草酸组(HG 30 mmol/L+GA 200μmol/L)。Western blot方法检测各分组细胞HIF-1α、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白因子的表达水平,免疫荧光方法检测各分组HIF-1α、VEGF在细胞内的表达。将细胞按照正常组(NG 5.6 mmol/L)、高糖组(HG 30 mmol/L)、高糖+甘草酸组(HG 30 mmol/L+GA 200μmol/L)、高糖+KC7F2组(HG 30 mmol/L+KC7F27.5μmol/L)、高糖+甘草酸+KC7F2组(HG 30 mmol/L+GA 200μmol/L+KC7F27.5μmol/L)、高糖+DMOG组(HG 30 mmol/L+DMOG 25μmol/L)、高糖+甘草酸+DMOG组(HG 30 mmol/L+GA 200μmol/L+DMOG 25μmol/L)进行培养(48 h),CCK-8检测细胞增殖水平,Western blot和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测不同分组细胞白细胞介素(interleukin,IL)-1β、TNF-α、IL-6、IL-8的表达。结果Western blot、免疫荧光方法实验结果表明,甘草酸能够抑制高糖条件下小鼠肾小球系膜细胞(SV40 MES13)HIF-1α、VEGF蛋白因子的表达。CCK-8实验表明,HIF-1α的上调促进了小鼠肾小球细胞的增殖,甘草酸能够进一步抑制激活剂DMOG所诱导的细胞增殖水平,并且也能够协同抑制剂KC7F2进一步抑制肾小球系膜细胞的增殖。Western blot实验结果表明,甘草酸能显著抑制DMOG诱导的HIF-1α、VEGF、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8蛋白因子的高表达(P<0.05),也能够联合KC7F2抑制HIF-1α、VEGF、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8的表达(P<0.05),酶联免疫吸附实验(ELISA)得到同样的结果。结论甘草酸通过下调HIF-1α的表达而抑制高糖条件下肾小球系膜细胞(SV40 MES13)炎症因子的表达。

微小RNA-302c在高糖下对人肾小球系膜细胞的影响

目的探讨微小RNA-302c(miR-302c)在高糖环境下对人肾小球系膜细胞功能的影响。方法采用双荧光素酶报告实验验证miR-302c是否参与TIMP3表达的调控;在高糖环境下培养人肾小球系膜细胞,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测细胞miR-302c以及TIMP3 mRNA相对表达量,检测肾小球系膜细胞的存活数,采用qRT-PCR方法检测细胞炎症因子IL-6以及IL-8 mRNA的表达。结果经双荧光素酶报告基因实验证实TIMP3是miR-302c的直接靶基因;在不同糖浓度下培养人肾小球系膜细胞,结果发现,与正常糖培养相比较,高糖处理下的人肾小球系膜细胞的miR-302c表达显著性增加,TIMP3 mRNA表达显著性下降,同时存活细胞的数量显著性减少。与正常糖培养相比较,高糖培养下人肾小球系膜细胞的炎症因子IL-6以及IL-8 mRNA的表达显著性增高。结论高糖环境下miR-302c的表达上调,并靶向下调TIMP3的表达,可能促使炎症因子分泌增加、参与高糖环境下对人肾小球系膜细胞的损伤作用。

白花丹提取物对高糖诱导的肾小球系膜细胞分泌炎症因子及细胞外基质的影响

目的探讨白花丹提取物对高糖诱导的肾小球系膜细胞分泌炎症因子及细胞外基质的影响。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,随机分为对照组,模型组,白花丹提取物低剂量(1 mg/L)、中剂量(2 mg/L)、高剂量(4 mg/L)组,甘露醇(24.5 mmol/L)组,收集各组细胞及细胞培养基,以酶联免疫吸附法检测各组细胞上清液中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)水平;检测各组细胞超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平;以实时荧光定量法检测各组细胞miR-155、SOCS1 mRNA水平;采用蛋白免疫印迹法检测各组细胞纤维连结蛋白(fibronectin,FN)、Ⅳ型胶原蛋白(collagen IV,Col IV)、细胞因子信号传导抑制蛋白1(cytokine signal transduction inhibitor 1,SOCS1)蛋白表达。结果与对照组相比,模型组、甘露醇组细胞上清液中TNF-α、IL-6及TGF-β1水平升高,细胞MDA、miR-155、FN及Col IV表达升高(P<0.05),细胞SOD水平、SOCS1 mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05)。与模型组相比,白花丹提取物低、中、高剂量组细胞上清液中TNF-α、IL-6及TGF-β1水平降低,细胞MDA、miR-155、FN及Col IV表达降低(P<0.05),细胞SOD水平、SOCS1 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05),且各项变化均对白花丹提取物呈剂量依赖性(P<0.05)。结论白花丹提取物可抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞分泌炎症因子及细胞外基质,下调miR-155表达、上调SOCS1表达可能是其作用机制。

circ_0010729靶向miR-654-3p介导高糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡及炎症反应

目的:探讨circ_0010729对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的影响。方法:将人肾小球系膜细胞HMCL分为对照组、高糖(high glucose,HG)组、HG+si-NC组、HG+si-circ_0010729组、H G+m i R-N C组、 HG+miR-654-3p组、HG+si-circ_0010729+anti-miR-NC组、HG+si-circ_0010729+anti-miR-654-3p组。Real-time PCR检测circ_0010729和miR-654-3p的表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA检测白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;双荧光素酶报告实验验证circ_0010729和miR-654-3p的靶向关系。结果:与对照组比较,HG组circ_0010729表达水平升高,miR-654-3p表达水平降低,细胞凋亡率升高,TNF-α、IL-6水平升高(P<0.05)。抑制circ_0010729表达或过表达miR-654-3p后,高糖诱导的人肾小球系膜细胞中细胞凋亡率降低,TNF-α、IL-6水平降低(P<0.05)。circ_0010729靶向调控miR-654-3p;干扰miR-654-3p表达逆转了抑制circ_0010729表达对高糖诱导的人肾小球系膜细胞凋亡及炎症反应的作用。结论:抑制circ_0010729表达可能通过靶向上调miR-654-3p表达抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡及炎症反应。

桑叶中1-脱氧野尻霉素的提取和对高糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡和炎性因子的影响

目的:对桑叶中1-脱氧野尻霉素的提取条件进行优化后研究其对高糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡和炎性因子的影响。方法:建立1-脱氧野尻霉素的定量检测方法,探讨桑叶中1-脱氧野尻霉素的最佳提取条件。培养小鼠肾小球系膜(SV40 MES 13)细胞,并分为四组:正常对照组(PBS)、高糖组(30 mmoL/L葡萄糖)和1-脱氧野尻霉素组(2、50μM),给药结束后采用CCK-8法测定SV40 MES 13细胞的存活率,ELISA测定炎性因子单核细胞趋化蛋白1(Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)和白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6)的水平。最后用Western blotting法检测细胞增殖蛋白Cyclin D1和PCNA的表达水平。结果:桑叶中1-脱氧野尻霉素的提取条件最终优化为料液比1∶15 g/mL、pH值3.0和提取时间30 min。1-脱氧野尻霉素明显提高SV40 MES 13细胞的存活率,并下调炎性因子IL-6的表达水平,且高剂量的1-脱氧野尻霉素显著降低Cyclin D1和PCNA的表达。结论:选择合适的料液比、pH值和提取时间可优化桑叶中1-脱氧野尻霉素的提取工艺,此外,1-脱氧野尻霉素具有改善高糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡的作用,其作用机制与调控炎性因子及相关增值蛋白的表达有关。

雷帕霉素对炎性反应状态下肾小球系膜细胞内脂质稳态的影响

目的研究雷帕霉素对炎性反应状态下肾小球系膜细胞内脂质稳态的影响及探讨其可能机制。方法体外培养肾小球系膜细胞株（HMCL）,分成对照组、不同浓度雷帕霉素组、IL-1β组及IL-1β＋不同浓度雷帕霉素组。用油红O染色（定性）及高效液相色谱法（HPLC,定量）检测HMCL细胞内脂质水平。实时荧光定量PCR法检测HMCL的低密度脂蛋白受体（LDLR）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）、肝X受体α（LXRα）、ATP结合匣转运子A1（ABCA1）mRNA表达。Western印迹法检测HMCL的LDLR、ABCA1蛋白表达。结果雷帕霉素对基础状态HMCL内总胆固醇（TC）含量无显著影响。IL-1β能引起细胞内TC含量增加（为对照组的143%,P〈0.05）,10、50及100μg/L雷帕霉素能显著抑制其作用（分别为对照组的87%、116%、96%,P均〈0.05）。雷帕霉素能剂量依赖性地下调IL-1β引起的HMCL LDLR mRNA及蛋白表达的增多（P〈0.01）;剂量依赖性地上调IL-1β引起的HMCL ABCA1 mRNA及蛋白表达的减少（P〈0.01）;雷帕霉素对IL-1β引起的HMCL PPARγ、LXRαmRNA表达的减少也具有剂量依赖性的上调作用（P〈0.01）。结论雷帕霉素可能通过减少胆固醇流入细胞及增加胆固醇流出细胞而改善炎性反应状态下肾小球系膜细胞内的脂质稳态。

circTLK1通过调控miR-374a-5p表达对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的影响

为探讨circTLK1对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的影响及分子机制,该研究将人肾小球系膜细胞HMCL分为对照(Con)组、高糖(HG)组、HG+si-NC组、HG+si-circTLK1组、HG+miR-NC组、HG+miR-374a-5p组、HG+si-circTLK1+anti-miR-NC组、HG+si-circTLK1+anti-miR-374a-5p组。采用RT-qPCR检测circTLK1和miR-374a-5p的表达水平;ELISA检测TNF-α、IL-6水平;MTT检测细胞增殖活性;Western blot法检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证circTLK1和miR-374a-5p的靶向关系。结果显示,高糖诱导的肾小球系膜细胞中circTLK1、TNF-α、IL-6、CyclinD1表达水平及细胞活性升高,miR-374a-5p、p21表达水平降低(P<0.05)。下调circTLK1表达或过表达miR-374a-5p,高糖诱导的肾小球系膜细胞中TNF-α、IL-6、CyclinD1表达水平和细胞活性降低,p21表达水平升高(P<0.05)。circTLK1靶向调控miR-374a-5p;抑制miR-374a-5p表达逆转了下调circTLK1表达对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的作用。该研究得出,下调circTLK1表达可能通过上调miR-374a-5p抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤。

吡非尼酮在治疗糖尿病肾病小鼠肾纤维化中的作用及机制

目的观察吡非尼酮对db／db小鼠糖尿病肾病模型的疗效，并探讨其作用的分子机制。方法（1）以野生型小鼠为正常对照组，db／db小鼠分为模型组和吡非尼酮组，每组各6只。吡非尼酮组给予250mg·kg^-1·d^-1吡非尼酮连续灌胃18周，其他两组以0．5％羧甲基纤维素钠灌胃。测定血糖、24h尿白蛋白量；PAS染色、PASM染色、Masson染色、天狼星红染色评估肾组织病理改变；免疫组化检测肾组织Ⅳ型胶原表达。（2）以小鼠肾小球系膜细胞（SV40MES-13细胞）为体外研究对象。细胞分为对照组、高渗组、高糖组，及50、100、200、400、800、1600mg／L吡非尼酮＋高糖组，BrdU细胞增殖检测评估细胞增殖率。细胞分为对照组、高渗组、高糖组和吡非尼酮＋高糖组，实时荧光定量PCR检测α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原、转化生长因子β1（TGF—β1）、白细胞介素（IL）-1β、IL-6及单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）mRNA的表达。结果（1）与正常对照组比较，模型组小鼠体重增加，血糖升高，伴有大量蛋白尿，并出现肾小球肥大、系膜区扩张、小管间质纤维化等病理改变，肾组织Ⅳ型胶原合成增加（均P〈0．05）。与模型组比较，吡非尼酮组db／db小鼠24h尿蛋白量降低，肾小球肥大、系膜区扩张及小管间质纤维化减轻，肾组织Ⅳ型胶原的表达减少（均P〈0．05）。（2）与高糖组比较，100、200、400、800、1600mg／L吡非尼酮＋高糖组MES-13细胞增殖率均降低（均P〈0．05），400mg／L吡非尼酮＋高糖组α—SMA、Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原、TGF—β1、IL-β、IL-6、MCP-1mRNA表达均减少（均P〈0．05）。结论吡非尼酮可抑酮鼠肾小球系膜细胞增殖及活化，下调TGF-β1及促炎因子的表达，减少胶原的合成，从而改善db／db小鼠肾纤维化。

己酮可可碱联合骨髓间充质干细胞对高糖诱导的肾小球系膜细胞炎症因子及NF-κB信号通路的影响

目的探讨己酮可可碱(pentoxifylline,PTX)联合骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对高糖作用下肾小球系膜细胞炎症因子及NF-κB信号通路的影响。方法体外高糖培养小鼠肾小球系膜细胞,分为6组:对照组、糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)组、MSCs组、MSCs+PTX 0.1 mmol·L^−1组、MSCs+PTX 0.3 mmol·L^−1组和MSCs+PTX 1 mmol·L^−1组。采用ELISA检测各组系膜细胞IL-6和TNF-α含量,采用Western blotting检测各组系膜细胞中NF-κB p65,IKKα及IKKβ蛋白的表达。结果与对照组相比,DN组系膜细胞的IL-6和TNF-α含量显著增高(P<0.05),NF-κB p65、IKKα及IKKβ蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。与DN组相比,MSCs组及MSCs组联合不同浓度PTX干预组的系膜细胞分泌的IL-6及TNF-α含量出现明显降低(P<0.05),NF-κB p65、IKKα及IKKβ蛋白表达量显著降低(P<0.05)。与MSCs组比较,MSCs+PTX 0.1 mmol·L^−1组、MSCs+PTX 0.3 mmol·L^−1组及MSCs+PTX 1 mmol·L^−1组的IL-6和TNF-α含量显著下降(P<0.05),NF-κB p65、IKKα和IKKβ的蛋白相对表达量明显降低(P<0.05),且呈现PTX浓度依赖性。结论PTX联合MSCs通过抑制高糖诱导下肾小球系膜细胞中NF-κB信号通路的表达及炎症因子水平对DN具有一定的治疗作用。