LDL受体基因cDNA的RT－PCR分离、克隆及其在RFLP中的应用

利用ＲＴ－ＰＣＲ技术分离低密度脂蛋白受体基因ｃＤＮＡ，将长为２６０５ｂｐ的ｃＤＮＡ插入质粒ｐＪＮ６，并经全序列测定证实，该序列与已报道序列相比，存在两个变异碱基，即第７５４位Ｃ→Ｔ，和１６５４位的Ｇ→Ａ，这两个变异碱基并不改变编码的氨基酸，利用ＬＤＬ受体基因ｃＤＮＡ中的ＣｌａⅠ片段作为探针，检测到ＬＤＬ受体基因上外显子８的ＳｔｕⅠ位点是个限制性片段长度多态性位点。所克隆的ｃＤＮＡ含有可译框架的全部密码，因此可作为基因表达材料。

利用Dynabeads固相单链分离法直接测定PCR产物序列

用PCR方法扩增了低密度脂蛋白(LDL)受体基因外显子11-内含子11-外显子12片段,长约0.8kb。利用Dynabeads固相分离单链法测定了PCR产物序列,其中有105个碱基系第一次报道,结果证明:Dynabeads固相分离单链法是一种简便、可靠、快速的PCR产物测序法。

LDL受体基因内含子15结构分析及其在家族性高胆固醇血症基因诊断中的应用

为了解人类 ＬＤＬ受体基因内含子 １５的遗传背景，利用长链 ＰＣＲ和锚定 ＰＣＲ分离了 ＬＤＬ受体基因外显子１５－内含子１５－外显子１６和内含于１５的３’末端片段。利用Ｄｙｎａｌｂｅａｄｓ 固相单链分离ＰＣＲ产物直接测序法测定了内含子１５ ３’末端１２２２个碱基序列。序列显示：３’ 末端含有由１６个碱基组成的典型３’末端剪接位点；３’端上游第３１个碱基处含有经典分支位 点。除了经典分支位点外，在３’末端上游第２０个碱基处，还含有一个可能的隐蔽分支位点。 序列还显示了被认为与血清胆固醇水平相关的ＰｖｕⅡ酶切多态性的碱基变异性质，即碱基由 Ｃ－Ｔ的改变同时利用所测的序列，设计了相应的引物，建立了ＰＣＲ检测ＬＤＬ受体基因内含 子 １５ ＰｖｕⅡ多态性技术，并证实此技术可以快速、简便地应用到家族性高胆固醇血症的基因 诊断上。

宫颈癌组织表皮生长因子受体对TKI敏感性相关的基因突变研究

目的研究宫颈癌组织表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因中是否存在与EGFR酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)药物敏感性相关的18、19及21外显子突变,为本地区宫颈癌的靶向治疗提供依据。方法收集70例宫颈癌患者的新鲜癌组织标本,提取DNA,以特异性引物PCR扩增EGFR基因外显子18、19及21,进行DNA测序并分析序列相似性。结果 70例宫颈癌组织提取质量良好的DNA中,均未检测到EGFR基因18、19及21外显子突变。结论宫颈癌组织EGFR基因外显子18、19及21突变罕见。