补骨脂素通过PCSK9/LDLR信号通路抗高脂饮食诱导的高脂血症研究

目的基于前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)探讨补骨脂素对高脂血症的影响及作用机制。方法首先使用分子对接法对补骨脂素与PCSK9蛋白结合能力进行预测。随后分别采用高脂饮食诱导的高脂血症小鼠模型和HepG2细胞红色荧光标记低密度脂蛋白(Dil-LDL)摄取法考察补骨脂素对模型小鼠血脂水平和HepG2细胞Dil-LDL摄取的影响。C57BL/6J 50只小鼠适应性喂养1周,未造模小鼠作为正常组,造模后的高脂血症小鼠随机分为模型组和20、40、80 mg/kg补骨脂素组,每组10只。全自动生化仪检测丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)水平,以及总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high densit lipoprotein cholesterol,HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)水平。20μg/mL Dil-LDL观察补骨脂素对HepG2细胞脂质摄取的影响,分为对照组和10、20、40、80μmol/L补骨脂素组。酶标仪检测各组荧光强度;Real-time PCR和Western blot法检测补骨脂素对PCSK9和低密度脂蛋白受体(low-density lipoprotein receptor,LDLR)基因和蛋白表达的影响。结果分子对接结果显示补骨脂素与PCSK9对接结合能为-6.04 kcal/mol,提示补骨脂素可能与PCSK9结合。进一步在在体动物模型验证中发现,与高脂饮食诱导的模型组相比,20 mg/kg补骨脂素可显著降低高脂血症小鼠血清中ALT、TC和LDL-C水平(P<0.05),40 mg/kg补骨脂素显著降低高脂血症小鼠血清ALT、AST、TC、TG和LDL-C水平(P<0.05或P<0.01)。细胞实验结果显示,与对照组相比,10μmol/L、20μmol/L和40μmol/L补骨脂素可显著增强HepG2细胞Dil-LDL摄取能力(P<0.01)。与对照组相比,40μmol/L…补骨脂素可显著提高LDLR mRNA和蛋白表达(P<0.05),并降低PCSK9 mRNA和蛋白表达水平(P<0.01)。…结论补骨脂素具有抗高脂饮食导致的高脂血症作用,机制可能与下调PCSK9/LDLR信号通路有关。