高脂饮食诱导APOE和LDLR基因敲除鼠AS斑块形成的分子病理学特征

目的观察在高脂饮食条件下,载脂蛋白E(ApoE)和低度密度脂蛋白受体(LDLR)基因敲除小鼠动脉粥样硬化(AS)斑块形成的病理学特征与基质金属蛋白酶(MMP-2,9)和Mac-3表达水平。方法用C57BL/6J小鼠普通饮食作对照,用ApoE基因敲除和LDLR基因敲除两种小鼠,每种分为普通饮食和高脂饮食两组,8只/组。连续喂养120d后,分离获得各组小鼠主动脉,用Masson染色,油红O染色法观察小鼠动脉粥样斑块病理形态学变化,用免疫组织化学检测AS斑块内炎症以及基质金属蛋白酶(MMP-2,9)表达水平,用免疫双荧光抗体法分析AS斑块巨噬细胞和平滑肌细胞内MMP-9表达的差异。结果与普通饮食的基因敲除鼠比,高脂饮食的ApoE和LDLR基因敲除鼠的动脉粥样硬化斑块显著增大,炎性细胞增多,纤维帽中基质纤维成分减少,纤维帽形状变薄和大量中性脂滴沉积。其中,以ApoE基因敲除鼠的最为严重。AS斑块形成大小与Mac-3表达水平和炎症细胞增加呈正相关。斑块内MMP-9表达在巨噬细胞内占50%～70%,在平滑肌细胞内占30%。结论高脂饮食可加重ApoE和LDLR基因敲除小鼠AS斑块形成和Mac-3表达及炎症细胞增加,MMPs水平亦相应增加,其病变呈现出不稳定性斑块特征。

302例海南黎族LDLR基因PvuⅡ多态性与血脂水平关系的研究

目的探讨海南地区黎族人群低密度脂蛋白受体(LDLR)基因PvuⅡ位点的多态性及其对血脂及载脂蛋白的影响。方法采用分层随机整群抽样方法选取694例样本(观察组:黎族302例,对照组:汉族392例),抽取空腹静脉血检测血脂水平,运用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测LDLR基因PvuⅡ多态性。结果观察组与对照组LDLR基因PvuⅡ3种基因型P1P1、P1P2、P2P2频率(66.89%vs.76.53%、27.81%vs.20.41%、5.30%vs.3.06%)比较,差异有统计学意义(P<0.05);观察组等位基因P2频率19.20%显著高于对照组13.26%(P<0.01)。观察组脂蛋白(a)[Lp(a)]、载脂蛋白B(apoB)水平显著低于对照组(P<0.01),观察组高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白AI(apoAI)水平和apoAI/apoB比值显著高于对照组(P<0.01)。两组对象LDLR基因PvuⅡ各基因型与临床血脂水平指标[总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、HDL-C、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、apoAI、apoB、Lp(a)]差异无统计学意义(P>0.05)。结论海南黎族人群LDLR基因存在PvuⅡ多态性,LDLR基因PvuⅡ多态性与血脂各项指标水平无相关性,P2等位基因不影响血脂代谢。

LDLR基因P505S位点突变与不稳定型心绞痛的关系

目的探讨LDLR基因P505S突变与不稳定型心绞痛（UAP）的遗传易感性的关系。方法确诊的UAP患者562例（男325例,女237例）作为观察组,同一时期正常体检者563例（男342例,女221例）作为对照组,利用聚合酶链-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）并联合DNA直接测序技术,对两组的EDTA抗凝血LDLR基因P505S位点突变进行分型,按该位点等位基因C和T的出现分为CC、CT、TT基因型。采用多变量logistic回归分析统计该多态位点与UAP易感性的关系。检测所有研究对象的血脂水平。结果观察组血脂指标中TC、TG、LDL-C水平明显高于对照组,而HDL-C则明显低于对照组;观察组的吸烟、饮酒及阳性家族史的比例均高于对照组（P〈0.05）。CC、CT、TT基因型在观察组中的分布频率分别为65.7%、23.8%和10.5%,在对照组中分别是77.8%、19.2%和3.0%,两组间基因型频率分布差异有统计学意义（2=18.453,P〈0.01）。多因素分析显示,LDLR基因P505S突变位点T等位基因与UAP的遗传易感性明显相关（OR=7.48,95%CI 4.59-25.17,P〈0.01）。结论 LDLR基因P505S突变位点与UAP患者遗传易感有关。

用降解的DNA PCR扩增LDLR基因片段的观察

用降解的ＤＮＡＰＣＲ扩增ＬＤＬＲ基因片段的观察浙江省绍兴市妇幼保健院遗传室（３１２０００）俞信忠上海第六人民医院遗传室吴松华随着分子生物学研究的进展，基因诊断技术得到了越来越广泛的应用，特别是ＰＣＲ技术，以其快速、高灵敏度及简便地检测目的ＤＮＡ特异序...

LDLR基因多态性与突发性耳聋易感性的关联性分析

目的探索LDLR基因多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点与突聋易感性相关性。方法采集139份突聋散发病例和139例无耳疾(听力正常)个体血样,检测血清甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白A1、载脂蛋白B水平,提取血液基因组DNA,采用荧光多重酶连接反应技术(improved multiplex ligation detection reaction,iMLDR)及ABI 3730XL测序仪对LDLR基因3个SNPs进行分型。比较两组基因型频率和等位基因型频率的差异,并通过构建基因模型,检验SNPs与突聋易感性的关联性;并比较不同基因型突聋患者的血脂水平。结果突聋组甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平较对照组显著增高,差异具有统计学意义(P<0.05);突聋组LDLR基因rs5929(Exton10)位点的T等位基因频率(P=0.022<0.05,OR=1.529,95%CI=1.063-2.198)、rs2738464(Exton18)位点的G等位基因频率(P=0.016<0.05,OR=1.572,95%CI=1.088-2.272)和rs1433099(Exton18)位点的T等位基因频率(P=0.015<0.05,OR=1.578,95%CI=1.090-2.283)显著高于对照组。LDLR基因rs5929位点rs2738464位点及rs1433099位点与突聋易感性有关联。rs5929、rs2738464和rs1433099位点不同基因型患者的血脂水平无统计学差异(P>0.05)。结论甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平升高可能是突聋发病的危险因素,LDLR基因第10外显子区rs5929位点及第18外显子区rs2738464、rs1433099位点与突聋易感性相关;rs5929位点T等位基因、rs2738464位点G等位基因、rs1433099位点T等位基因可能是突聋发病的易感基因,提示携带这三种等位基因的个体可能是突聋发病的高危人群。未发现LDLR基因rs5929、rs2738464、rs1433099位点的不同基因型与血脂水平相关。

LDLR基因AvaⅡ位点多态性与高甘油三酯血症的相关性

研究了LDLR基因外显子13中AvaⅡ位点多态性在宁夏回族自治区正常回、汉族人群及高甘油三酯血症患者中的分布频率,分析探讨了该位点多态性是否存在于宁夏回、汉族居民中,以及基因型与甘油三酯含量之间的相关性.应用聚合酶链式反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法,对214例健康样本(回族102例,汉族112例)和212例高甘油三酯血症患者样本(回族88例,汉族124例)的低密度脂蛋白受体(LDLR)基因的多态性进行了检测.结果发现,在宁夏地区回、汉族人群中存在着AvaⅡ多态性位点,回、汉族居民间存在着明显差异,健康人群与高甘油三酯血症人群之间该位点基因型存在着显著差异.由此说明,AvaⅡ多态性位点可以作为宁夏回、汉族的遗传标记,而且该位点与高甘油三酯血症有相关性.

LDLR基因敲除小鼠皮下腹股沟脂肪基因表达谱研究

目的探究LDLR基因敲除(LDLR^-/-)小鼠皮下腹股沟脂肪基因表达谱的变化及差异基因涉及的生物过程和信号通路。方法采用高脂饲料喂养LDLR基因敲除小鼠的肥胖模型,利用基因芯片技术分析正常C57BL/6J小鼠与肥胖模型小鼠皮下腹股沟脂肪组织中基因表达谱的差异及差异基因涉及的信号通路。结果与正常C57BL/6J小鼠比较,LDLR基因敲除小鼠皮下腹股沟脂肪组织中差异表达基因有602个,其中上调基因有394个,下调基因308个。GO富集和Pathways分析结果显示,这些差异基因的生物过程主要有炎症反应、免疫系统过程、及T细胞增殖的正向调控;信号通路主要有B细胞受体信号通路、自然杀伤细胞介导的细胞毒性、Toll样受体信号通路和趋化因子信号通路。结论B细胞受体信号通路、自然杀伤细胞介导的细胞毒性、Toll样受体信号通路和趋化因子信号通路中的差异基因可能涉及肥胖发病的机制,为肥胖及相关代谢疾病药物的研发提供依据。

家族性甲状腺功能亢进症合并高胆固醇血症家系LDLR基因突变筛查探析

目的筛查并分析家族性甲状腺功能亢进症合并高胆固醇血症LDLR基因突变情况。方法抽取患者及其家属的外周血DNA,行PCR核酸扩增,并行LDLR基因以及载脂蛋白B100(ApoB100)基因测序分析。结果该家系3例患者呈常染色体显性遗传,存在LDLR基因突变,无ApoB100基因突变。结论 LDLR基因第13外显子核苷酸序列的第1 864位G变为T,发生碱基置换,导致天冬氨酸变为酪氨酸,是家族性甲状腺功能亢进症合并高胆固醇血症的基因突变的主要类型,该家族性疾病的发生与ApoB100基因无相关性。

LDLR基因位点的RFLPs检测及其与FH的相关性

低密度脂蛋白 (LDL)是引起动脉粥状硬化的主要脂蛋白 .LDL受体基因突变及其与家族性高胆固醇血症 (FH)的关系是一个研究的热点 .用PCR -RFLP方法检测LDL受体基因多态性 。

LDLR基因变异所致家族性高胆固醇血症患者1例的遗传学分析

目的探讨1例家族性高胆固醇血症(FH)患者LDLR基因的变异特点,为其临床诊断与遗传咨询提供依据。方法选取2020年6月于安徽医科大学第一附属医院生殖中心就诊的1例FH患者为研究对象。收集患者的临床资料,应用全外显子组测序(WES)对患者进行基因检测,应用Sanger测序对候选变异进行家系验证,查阅UCSC数据库进行变异位点保守性分析。结果患者的临床表现为血清总胆固醇水平升高,其中低密度脂蛋白胆固醇显著升高。WES结果显示患者LDLR基因存在c.2344A>T(p.Lys782*)杂合变异,既往未见报道。Sanger测序验证该变异为父源性,患者父亲LDLR基因存在c.2344A>T(p.Lys782*)杂合变异,患者母亲该位点为野生型。查询UCSC数据库提示该变异位点高度保守。结论LDLR基因c.2344A>T杂合变异可能为该FH患者的遗传学病因。本研究为该家系的遗传咨询和产前诊断提供了依据。

高胆固醇血症与LDLR基因的相关性分析

目的通过对兰州地区100例高胆固醇血症患者的LDLR基因的测序分析,寻找高胆固醇血症的致病位点,以期为该病的预防和治疗提供理论依据。方法收集兰州地区100例高胆固醇血症患者的外周血标本,提取DNA后对目的基因进行PCR扩增并测序,结果在BLAST进行比对分析。结果 100例高胆固醇血症患者中,共发现9个突变位点,有5个同义突变,3个错义突变(p.R406Q、p.D622Y、p.P661T),1个终止突变(p.E714X),其中3个突变(p.R406Q、p.P661T、p.E714X)未见文献报道。结论通过对兰州地区高胆固醇血症LDLR基因突变位点的研究,了解该地区基因突变特点,为高胆固醇血症的早期预防、诊断及治疗提供理论依据。

LDLR基因C660X位点突变与不稳定型心绞痛的关系及意义

目的探讨低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDLR)基因C660X突变与不稳定型心绞痛的遗传易感性的关系。方法确诊的不稳定型心绞痛患者846例作为病例组,同一时期正常体检者835例作为对照组,利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术及DNA直接测序技术,对两组的EDTA抗凝血LDLR基因C660X位点突变进行分型。采用因素回归分析统计该多态位点与不稳定型心绞痛易感性的关系。检测所有研究对象的血脂水平。结果不稳定型心绞痛患者组血脂指标中TC、TG、LDL-C与对照组比较明显升高(t=9.446,P<0.001;t=11.644,P<0.001;t=15.050,P<0.001),而HDL-C则明显低于对照组(t=-10.614,P<0.001);不稳定型心绞痛组患者的饮酒及阳性家族史的比例均高于对照组,差异有统计学意义(χ2=6.273,P=0.012;χ2=29.683,P<0.001)。CC、CA、AA基因型在不稳定型心绞痛组中的分布频率分别为74.2%、17.4%和8.4%,在对照组中分别是94.6%、3.5%和1.9%,两组间基因型频率分布差异有统计学意义(χ2=22.09,P<0.01)。多因素Logistic回归分析显示,LDLR基因C660X突变位点A/A变异等位基因是不稳定型心绞痛的独立危险因素(OR=3.21,95%CI=1.948-8.635,P<0.01)。结论 LDLR基因C660X(C/A)突变位点与不稳定型心绞痛患者遗传易感有关。

九例家族性高胆固醇血症患者的LDLR基因突变检测

目的检测9例家族性高胆固醇血症(familial hypercholesterolemia,FH)患者的LDLR基因突变情况,为临床诊断与遗传咨询提供依据。方法PCR扩增LDLR基因的全部编码及侧翼序列,对扩增产物进行直接测序。对携带纯合突变以及复合杂合突变的患者,通过父母样本测序或T克隆测序明确突变的双等位基因来源。结果在7例患者中检出了8个LDLR基因突变,分别为c.259T>G、c.513delC、c.530C>T、c.682G>T、c.763C>T、c.1187-10G>A、c.1948delG、c.1730G>A。4例患者携带杂合突变,2例患者携带纯合突变,1例患者携带复合杂合突变,携带双等位基因突变的患者较杂合突变的患者症状更加严重。结论9例FH患者中7例检出LDLR基因突变,同时新突变位点的检出丰富了LDLR基因突变谱。

两例家族性高胆固醇血症患者的临床表型及LDLR基因变异分析

目的:探讨两例家族性高胆固醇血症(familial hypercholesterolemia,FH)患者的临床表型与致病变异的关系。方法:对先证者1和先证者2进行全外显子组测序并重点分析血脂异常相关的基因变异,用Sanger测序对候选变异进行家系验证。结果:全外显子组测序提示先证者1携带LDLR基因c.1360G>A(p.D454N)和c.292G>A(p.G98S)杂合变异,先证者2携带LDLR基因c.321T>G(p.C107W)杂合变异。根据美国医学遗传学与基因组学学会相关指南,判断c.1360G>A(p.D454N)为疑似致病变异(PM1+PM2+PP2+PP3+PP4+PP5),c.292G>A(p.G98S)为意义未明变异(PM1+PP2+PP3),c.321T>G(p.C107W)为疑似致病变异(PM1+PM2+PP2+PP4+PP5)。先证者1采用PCSK9抑制剂治疗效果显著,先证者2则无明显疗效。结论:两名先证者分别携带LDLR基因复合杂合变异和杂合变异,其基因型的差别可能与临床表型以及对PCSK9抑制剂治疗的反应的差别有关。基因检测能够为临床诊断和遗传咨询提供依据,并有望指导对于药物的选择。

ApoE/LDLR双基因突变小鼠肝脏差异表达蛋白组研究

目的:分析脂代谢相关双基因突变(apoE-/-/LDLR-/-)小鼠肝脏蛋白质表达特点,研究差异表达蛋白与基因突变小鼠血脂代谢紊乱和动脉粥样硬化的关系。方法:应用双向电泳及质谱技术对5周龄双基因突变和野生型小鼠肝组织差异蛋白进行比较研究。结果:双基因突变和野生型小鼠肝脏中分别检测到(928±15)和(1 017±50)个蛋白点(n=3),两者之间的平均匹配率分别为78.7%和83.2%。双基因突变小鼠有108个蛋白点未能与野生型小鼠匹配,相差5倍以上的上调点和下调点分别为10个和45个,取其中6个点做质谱分析,鉴定为endoplasmin precursor,acidic leucin-rich nuclear phosphoprotein 32 family member A,serotransferrin precursor,stress-70 protein precursor,fibronectin precursor,complement C3 precursor,fibrinogen gamma polypeptide 7种蛋白质。结论:双基因突变小鼠与野生型小鼠的肝脏蛋白表达谱有明显差异,推测这些蛋白在脂代谢相关双基因突变引发的小鼠血脂代谢紊乱在动脉粥样硬化的发生发展中可能发挥重要作用。

动脉粥样硬化病人LDL受体基因启动子序列的高甲基化改变

探讨动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)病人LDLR基因启动子区12个CpG二核苷酸结构甲基化的改变。改进并联合应用巢式、Touchdown-PCR,甲基化敏感单链构象分析法(methvlation- sensitive-single-strand conformation analvsis,MS-SSCA),对61例AS病人及28例健康对照者的LDLR基因启动子区CpG岛的甲基化状态进行检测。在AS患者中发现三种不同的甲基化模式,即完全甲基化、部分甲基化和非甲基化。61例AS患者中有2例完全甲基化,13例部分甲基化,其余为非甲基化,甲基化率为24.59%;28例正常对照者中仅1例发生部分甲基化,甲基化率为3.57%。两组甲基化率差异有显著性(P<0.05)。AS病人LDLR基因启动子区甲基化程度增高,在LDLR基因调控区的高甲基化修饰可能参与了AS的发病。同时,改进并联合应用的巢式PCR、T0uchdown- PCR,MS-SSCA法降低了对DNA模板严格度的要求,提高了灵敏度和特异性,在检测基因甲基化中具有方便、经济、效率高的优点,有良好的应用前景。

家族性高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体基因热点突变Taqman MGB探针检测方法的建立及应用

目的:建立Taqman MGB探针实时荧光定量PCR检测家族性高胆固醇血症(FH)患者低密度脂蛋白受体(LDLR)基因热点突变的简便方法。方法:1入选94例临床确诊FH患者为研究对象,30例健康人作为阴性对照及明确存在LDLR基因热点突变W462X、A606T和D601Y的FH患者各1例作为阳性对照,分别提取外周血DNA;2应用Primer Premier v3.0软件设计3个热点突变的特异性引物和Taqman MGB探针;3运用Taqman探针实时荧光定量PCR方法,对3例阳性对照及30例健康对照进行检测,检验方法的准确性;4同法检测94例确诊FH患者的基因组DNA;5运用Touch-down PCR方法对发现突变患者进行一代测序验证。结果:13例阳性对照均检测到相应突变,30例健康对照均未检测到突变,证实此方法能够准确检测到基因突变位点;294例确诊FH患者中发现13例W462X、3例A606T、1例D601Y,初步计算3个热点突变约占全部FH患者的18.1%;3对发现突变的17例患者进行一代测序验证,结果完全一致。结论:成功建立Taqman MGB探针实时荧光定量PCR方法,为FH患者LDLR基因热点突变的检测提供了快速可靠的技术手段。