虎杖苷对高脂喂养的中年LDLr-/-小鼠非酒精性脂肪肝炎的作用及机制研究

目的探讨虎杖苷对高脂喂养的中年低密度脂蛋白受体基因敲除(low-density lipoprotein receptor knockout,LDLr-/-)小鼠非酒精性脂肪肝炎的保护作用及机制。方法12月龄雄性LDLr-/-小鼠随机分为对照组、模型组、白藜芦醇(200 mg/kg)组和虎杖苷低、高剂量(100、200 mg/kg)组,对照组给予常规饲料喂养,其余各组给予高脂饲料喂养;同时给予虎杖苷和白藜芦醇干预12周后,检测各组小鼠血清代谢参数;采用油红O染色、苏木素-伊红(HE)染色和Masson染色考察各组小鼠肝脏组织病理变化;采用试剂盒检测各组小鼠肝脏中三酰甘油(triglycerides,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)、丙二醛(malonaldehyde,MDA)、羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)水平及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathion peroxidase,GSH)活性;采用免疫共沉淀法检测各组小鼠肝脏组织中乙酰化肝激酶B1(liver kinase Bl,LKB1)表达情况;采用Western blotting法检测各组小鼠肝脏组织中氧化应激、纤维化及sirtuin l(SIRT1)信号通路相关蛋白表达情况。结果虎杖苷显著改善高脂喂养的中年LDLr-/小鼠代谢基础特征(P<0.05),抑制肝脏脂肪变性和肝纤维化;显著降低肝脏组织中TC、TG、TNF-α、IL-6、MDA和HYP水平(P<0.05);显著升高SOD、GSH和CAT活性(P<0.05);显著降低肝脏中脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FASN)、硬脂酰辅酶A去饱和酶1(stearoyl-CoA desaturase 1,SCD1)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)和α-平滑肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)蛋白表达水平(P<0.05),显著升高过氧化物酶体增殖激活受体α(peroxisome proliferator-activated receptorα,PPARα)和肉毒碱棕榈酰基转移酶1α(carnitine palmitoyltransferasela,CPT1α)蛋白表达水平(P<0.05);显著增加核因子E2相关因子(nuclear factor E2-:related factor2,Nrf2)入核表达(P<0.05);显著升高SIRT1蛋白表达水平(P<0.05),降低SIRT1靶蛋白肝激酶B1(liver kinase B1,LKB1乙酰化水平(P<0.05);显著升高p-LKB1/LKB1和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(phosphorylated AMP-activated protein kinase,p-AMPK)/AMPK蛋白表达水平(P<0.05),显著降低p65乙酰化水平和p65入核表达(P<0.05)。结论虎杖苷对高脂喂养的中年LDLr-/-小鼠非酒精性脂肪肝炎具有保护作用,且与SIRT1的激活有关。

实验性小鼠动脉粥样硬化斑块易损指数计算方法的优化

目的通过对Shiomi等提出的以脂质堆积为核心的斑块易损指数计算方法进行优化,以期更全面、客观地对实验性动脉粥样硬化斑块不稳定性进行评估。方法实验分为对照组（C57BL/6小鼠）和模型组（LDLR-/-和ApoE-/-小鼠）,每组6只动物。对照组给予正常饲料,模型组给予高脂饲料,25周后处死动物,分离主动脉根部和主动脉弓,经OCT包埋后连续切片,分别进行H＆E、苦味酸-天狼猩红、油红O、阿利新蓝染色,内皮细胞及平滑肌细胞免疫荧光染色、基质金属蛋白酶及巨噬细胞免疫组织化学染色。对Shiomi等提出的斑块易损指数公式进行改良,在计算公式分子中增加影响斑块不稳定性因素,同时在分母中增加影响斑块稳定性指标,优化动脉粥样硬化斑块易损指数计算公式。通过对比两个公式对LDLR-/-小鼠主动脉根部和无名动脉斑块稳定性的判断,考察评估优化后计算公式的可靠性。之后采用优化公式对高脂饮食ApoE-/-小鼠和LDLR-/-小鼠主动脉不同部位斑块稳定性进行评价,对比两种小鼠动脉粥样硬化进展的差异。结果模型组小鼠主动脉不同部位斑块破损面积,脂质沉积,胶原蛋白、蛋白多糖和基质金属蛋白酶分布,巨噬细胞浸润,纤维帽内皮细胞覆盖率和平滑肌细胞覆盖率与对照组相比发生明显改变。在此基础上优化了基于多指标病理染色的斑块不稳定性计算公式。通过计算发现,ApoE-/-小鼠和LDLR-/-小鼠无名动脉斑块易损指数明显大于主动脉根部;而在相同部位,ApoE-/-小鼠斑块易损指数明显高于LDLR-/-小鼠。结论本研究所优化的基于多指标组织病理学染色的斑块易损指数计算公式,涵盖多种影响斑块不稳定性的重要因素,可对斑块不稳定性进行准确评估。该方法简单、全面、可靠,具有较大实用价值。

phiC31整合酶介导的低密度脂蛋白受体基因治疗对小鼠动脉粥样硬化病变的影响

目的 phiC31整合酶可以介导携带含有attB序列的外源DNA与基因组特定的位点重组,文章分析该phiC31整合酶所介导的外源LDLR表达对家族性高胆固醇血症模型小鼠(LDLR-/-)血脂代谢及动脉粥样硬化病变的影响。方法 雄性小鼠进行高脂饲料喂养诱导病变后,通过尾静脉共注射表达整合酶的pCMV-int和带有attB序列的pcDNA3.1-TBG-LDLR-attB的靶向整合载体,同时设置共注射pCMV-int和非靶向无attB序列pcDNA3.1-TBG-LDLR的LDLR表达载体小鼠作为对照。结果 LDLR在phiC31整合酶的介导下,在小鼠肝细胞系中高效、持久表达;体内检测还发现LDLR在肝脏特异甲状腺结合球蛋白启动子的作用下在肝细胞内特异表达,而且该表达明显改善血脂代谢状况,与非靶向小鼠相比,携带attB靶向整合的LDLR可以使血浆低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）低35%左右,主动脉斑块/管腔总面积比减小了19%。结论 位点特异性整合的LDLR的表达,降低LDLR-/-小鼠血浆胆固醇、改善动脉粥样硬化病变。

绝经后脂质代谢紊乱诱导小鼠抑郁症状的形成

目的 初步探讨绝经后脂质代谢紊乱是否参与抑郁症状的形成。方法 24只LDLR-/-和16只WT C57BL/6J雌鼠,分为5组(n=8),分别为:WT+普通饮食组(WT)、WT+高脂饮食组(WT-H)、LDLR-/-去卵巢+普通饮食组(LDLR-/-)、LDLR-/-去卵巢+高脂饮食组(LDLR-/--H)、LDLR-/-去卵巢+高脂饮食+辛伐他汀组(XF),连续喂养3个月。LDLR-/-雌鼠双侧卵巢摘除联合高脂饮食建立绝经后脂质代谢紊乱模型。检测小鼠体重、脑总胆固醇(TC)及海马ERα、ERβ水平、抑郁行为、脑内5-HT水平;对脑TC水平和抑郁相关指标进行相关性分析。结果 (1)LDLR-/--H组可复制绝经后脂质代谢紊乱特征,表现为小鼠体重显著增加、脑TC水平显著升高、海马ERβ表达明显下降;(2)LDLR-/--H组小鼠水平和垂直运动均显著降低,TST静止时间显著增加,脑5-HT水平显著降低;(3)XF组小鼠脑TC水平显著下降、抑郁行为明显改善、5-HT水平明显提高;(4)小鼠脑TC水平与5-HT水平及抑郁样行为显著相关。结论 绝经后脂质代谢紊乱能诱导抑郁症状发生,通过调节脂质代谢可以显著改善抑郁症状。

PSGL-1缺失对动脉粥样硬化LDLR^(-/-)鼠巨噬细胞脂质吞噬及代谢组的影响

目的采用病理学及代谢组学方法研究PSGL-1缺失对巨噬细胞脂质吞噬能力及代谢组的影响。方法提取小鼠原代腹腔巨噬细胞,进行油红O染色,采集样本的~1H NMR谱并运用多变量分析方法进行代谢特征的分析。结果 PSGL-1^(-/-);LDLR^(-/-)小鼠的腹腔巨噬细胞中脂质面积减少;与LDLR^(-/-)鼠比较,PSGL-1^(-/-);LDLR^(-/-)小鼠巨噬细胞代谢物中牛磺酸和三甲胺的含量上调,而脂质、乳酸、丙氨酸和琥珀酸盐含量降低。结论 PSGL-1缺失影响腹腔巨噬细胞吞噬脂质的功能,而且能够调控LDLR^(-/-)小鼠巨噬细胞的代谢状态。

丹酚酸B通过STAT3/NF-κB信号通路改善动脉粥样硬化小鼠及RAW264.7细胞炎症反应

目的:观察丹酚酸B对动脉粥样硬化模型小鼠及脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法:将32只雄性LDLR-/-小鼠随机分为对照组、模型组、丹酚酸B组、阿托伐他汀组,每组8只。除对照组外,其余3组给予高脂饲料喂养12周。而后每组每日以相应药物腹腔注射或灌胃,持续12周。采用生化检测方法检测小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平。油红O染色法观察小鼠主动脉粥样硬化斑块相对管腔面积比。RAW264.7细胞用LPS 100μg/mL诱导24 h,同时给予含有丹酚酸B低、中、高剂量(1.25、2.5、5μg/mL)的培养基。RT-PCR、ELISA法检测小鼠及细胞白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA及含量,免疫荧光法观察细胞TNF-α荧光强度,Western Blot法测定小鼠主动脉及细胞STAT3、IκB、NF-κB蛋白磷酸化水平。结果:与模型组比较,丹酚酸B组、阿托伐他汀组小鼠血清TC、TG、LDL-C水平及IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著降低(P<0.01),小鼠主动脉粥样硬化斑块相对管腔面积比显著减少(P<0.01),主动脉组织IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达及STAT3、IκB、NF-κB蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.01)。与LPS诱导组比较,丹酚酸B低、中、高剂量组RAW264.7细胞IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达及RAW264.7细胞培养上清IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著降低(P<0.01,P<0.05),TNF-α荧光强度显著减少(P<0.01);丹酚酸B高剂量组RAW264.7细胞STAT3、IκB、NF-κB蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.05)。结论:丹酚酸B改善LDLR-/-小鼠动脉粥样硬化,减轻LDLR-/-小鼠及LPS诱导的RAW264.7细胞炎症,该作用可能与其抑制STAT3/NF-κB信号通路磷酸化相关。