转基因大豆插入位点分析及特异性PCR检测方法的建立

采用TAIL-PCR方法研究转基因大豆外源基因LEC1插入位点序列特征,并根据此特征建立了LEC1转化事件特异性检测方法。依据正义表达载体上T-DNA区段侧翼序列设计特异性引物和简并引物,获得4个同源序列。对获得的序列进行Blastn分析发现,p69、p148、p225均为载体T-DNA区段一部分,未见大豆基因组序列;P217插入片段的序列分析表明,该序列长863 bp,其中T-DNA左边界序列长143 bp,720 bp为大豆基因组片段,与大豆光系统II类囊体膜蛋白(Thylakoid membrane proteins)的206-926区段同源性为99%,这表明,外源DNA插入了大豆基因组中类囊体膜蛋白编码区的206位。根据分离的序列建立事件特异性定性检测方法,扩增片段大小为277 bp。该事件特异性检测方法具有高度的特异性和良好的灵敏性,为转基因大豆品种LEC1的身份识别提供了有效的方法。

骨科护理门诊高级护理实践现况调查分析

目的了解骨科护理门诊高级护理实践的现状,为完善专科护理门诊质量控制体系和提高护理服务质量提供参考。方法采用参与观察法、访谈法和问卷调查法对骨科护理门诊的工作状况、医护感受和患者满意度进行调查。结果骨科护理门诊护理专家和助手各1名于每周三下午开诊,工作内容主要包括肢体功能评估、功能康复指导和健康宣教等15项;患者满意度总分92.13±4.87。半结构访谈护理人员认为开展骨科护理门诊使护士具有专业成就感,但质量控制体系有待完善;医生认为骨科护理门诊有利于医护合作,但接诊护士知识技能有待提高。结论骨科护理门诊是骨科医疗的有效补充与深化,但出诊护士资质有待提高,需进一步完善专科护理门诊质量控制体系,以提高骨科护理门诊质量。

CrLEC1基因调控莱茵衣藻油脂合成的功能解析

[目的]通过解析转录因子LEC1(Leafy cotyledon 1)在微藻油脂生物合成中的调控功能,为建立利用基因工程培育高含油量和高生物量微藻的育种策略提供基础。[方法]采用无缝克隆法构建含CrLEC1基因的过表达载体;采用玻璃珠转化法进行莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)CC849转化;采用尼罗红荧光法测定转基因藻株的油脂含量。[结果]成功构建了pCam1304::LEC1::GFP载体,获得137个阳性转化的藻株,经检测有16个为转基因藻株。发现转基因藻株6-15的生长不受氮胁迫的影响,且在缺氮或含氮培养条件下其生长状况均较野生型藻株好;在缺氮培养条件下,转基因藻株6-15、6-9、5-22、5-25、5-34的油脂含量均显著高于野生型藻株。[结论]CrLEC1基因正调控莱茵衣藻的油脂合成。