白果内酯调控LEF1-AS1/miR-23b-3p分子轴缓解肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞损伤

目的探讨白果内酯对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞损伤的保护作用及其对lncRNA LEF1-AS1/miR-23b-3p分子轴的调控作用。方法用肺炎链球菌诱导肺泡上皮细胞建立细胞损伤模型(感染组);分别转染si-NC、si-LEF1-AS1后,用肺炎链球菌感染细胞(感染+si-NC组和感染+si-LEF1-AS1组);pcDNA、pcDNA-LEF1-AS1分别转染至肺泡上皮细胞后用白果内酯与肺炎链球菌共同处理细胞(感染+白果内酯+pcDNA组和感染+白果内酯+pcDNA-LEF1-AS1组)。ELISA法检测TNF-α、IL-1β、IL-6的水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;qRT-PCR法检测LEF1-AS1、miR-23b-3p的表达量;双荧光素酶报告基因实验检测LEF1-AS1与miR-23b-3p的靶向关系;Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达量。结果白果内酯能够降低肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6的水平和LEF1-AS1的表达量(P<0.05),并可降低凋亡率和Bax蛋白水平(P<0.05),还可促进miR-23b-3p和Bcl-2表达(P<0.05),且呈剂量依赖性;LEF1-AS1可靶向调控miR-23b-3p;转染si-LEF1-AS1可降低TNF-α、IL-1β、IL-6的水平以及凋亡率和Bax蛋白水平(P<0.05),增加Bcl-2蛋白水平(P<0.05);转染pcDNA-LEF1-AS1能够逆转白果内酯对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞炎性因子及凋亡的作用。结论白果内酯可通过调控LEF1-AS1/miR-23b-3p分子轴抑制肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞炎性反应及凋亡,进而减轻细胞损伤。

长链非编码RNA LEF1-AS1在老年胃癌病人中的表达及其临床病理意义

目的探讨长链非编码RNA(Long noncoding RNA,LncRNA) LEF1-AS1在胃癌组织中的表达及其临床病理意义。方法应用qRT-PCR技术检测73例胃癌病人(年龄≥65岁)肿瘤组织及癌旁组织中的LncRNA LEF1-AS1表达情况,采用免疫组化法检测胃癌组织样本中PI3K/Akt蛋白表达情况。分析LncRNA LEF1-AS1表达情况与胃癌病人临床病理特征之间的关系及对预后的影响。结果胃癌组织中LncRNA LEF1-AS1的表达明显高于癌旁正常组织(P<0.01),其表达水平和病人的性别、淋巴结转移情况无关,与组织分化、肿瘤浸润深度(T分期)、TNM分期均有显著相关性(P<0.01)。LncRNA LEF1-AS1表达与胃癌组织中PI3K/Akt的表达呈正相关(P<0.01)。LncRNA LEF1-AS1高表达的胃癌病人无病生存期明显低于低表达组(P<0.05)。结论 LncRNA LEF1-AS1与胃癌的恶性生物学行为关系密切。检测LncRNA LEF1-AS1表达对判断老年胃癌病人预后具有潜在的价值。

敲低LEF1-AS1对胰腺癌细胞的影响

目的:探究淋巴增强因子1反义RNA1(LEF1-AS1)对胰腺癌(PC)细胞的影响及机制。方法:使用Gene Expression Profiling Interactive Analysis(GEPIA)网站分析来源于癌症基因组图谱(TCGA)数据库中PC组织和正常胰腺组织LEF1-AS1的表达;取对数生长期的正常人胰管上皮细胞株HPDE和PC细胞株Panc-1、Bxpc-3、As PC-1、Capan-1、CFPAC-1及MIA Pa Ca-2,采用q PCR检测LEF1-AS1在各细胞中的表达;选取q PCR检测后LEF1-AS1表达较高的PC细胞株Panc-1和MIA Pa Ca-2,用si LEF1-AS1与si Control分别转染后分为下调组和对照组,分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、平板克隆实验、划痕实验和Transwell实验检测敲低LEF1-AS1对各组PC细胞增殖、细胞侵袭及迁移能力的影响,采用Western blot实验检测敲低LEF1-AS1对各组PC细胞中B细胞白血病淋巴瘤2(Bcl-2)、B细胞白血病淋巴瘤相关蛋白(Bax)、钙黏附蛋白E(E-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)表达的影响。结果:PC组织中LEF1-AS1的表达高于正常组织(P<0.05),Panc-1、Bxpc-3、As PC-1、Capan-1、CFPAC-1及MIA Pa Ca-2细胞中LEF1-AS1表达水平较HPDE细胞上调(P<0.05);下调组Panc-1和MIA Pa Ca-2细胞24 h、48 h和72 h时OD值均较对照组下降,下调组细胞集落形成数较对照组降低(P<0.05);下调组Panc-1和MIA PaCa-2细胞迁移和侵袭能力较对照组细胞降低(P<0.05);敲低LEF1-AS1表达后,下调组Panc-1和MIA Pa Ca-2细胞Bcl-2和Vimentin蛋白的表达量均较与对照组下降,Bax和E-cadherin蛋白的表达量均较与对照组升高(P<0.05)。结论:敲低LEF1-AS1表达后抑制PC细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与促进PC细胞的凋亡和抑制上皮细胞-间充质转化进程有关。

lncRNA LEF1-AS1通过靶向miR-612调控皮肤鳞状细胞癌细胞株增殖、凋亡、迁移侵袭的体外实验研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)LEF1-AS1对皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其机制。方法通过干扰皮肤鳞状细胞癌SCC13细胞LEF1-AS1的表达和过表达、抑制miR-612的表达,将SCC13细胞分为转染LEF1-AS1干扰序列、无义序列的干扰LEF1-AS1组、干扰对照组,转染miR-612过表达序列、无义序列的miR-612过表达组、过表达对照组,以及转染LEF1-AS1干扰序列与miR-612抑制序列的干扰抑制组,和转染LEF1-AS1干扰序列与miR-612抑制无义序列的干扰抑制对照组。采用qRT-PCR法检测各组细胞miR-612的相对表达,CCK8法检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞的凋亡情况,Transwell试验检测细胞的迁移、侵袭能力,Western印迹检测细胞周期蛋白依赖激酶1(cyclinD1)、细胞周期蛋白依靠性激酶抑制剂(p21)、Bcl-2家族蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达。用LncBase Predicted v.2在线预测网站预测lncRNA LEF1-AS1与miR-612之间的互补序列,将互补/非互补序列用于构建荧光素酶报告基因质粒,分别与miR-612过表达及过表达对照基因共转染SCC13细胞,验证lncRNA LEF1-AS1与miR-612的结合能力。两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果miR-612过表达组细胞增殖能力、迁移及侵袭细胞数均低于过表达对照组(均P<0.05),凋亡率高于过表达对照组(P<0.05)。干扰LEF1-AS1组、干扰对照组、干扰抑制组、干扰抑制对照组miR-612的相对表达差异有统计学意义(F=150.78,P<0.001),24、48、72 h时的增殖能力差异有统计学意义(均P<0.05),凋亡率、迁移及侵袭细胞数差异均有统计学意义(均P<0.05)。干扰LEF1-AS1组细胞中miR-612表达、凋亡率高于干扰对照组,48、72 h细胞增殖能力、迁移细胞数和侵袭细胞数低于干扰对照组(均P<0.05),而干扰抑制组细胞中miR-612表达、细胞凋亡率低于干扰抑制对照组,48、72 h细胞增殖能力、迁移细胞数和侵袭细胞数高于干扰抑制对照组(均P<0.05)。Western印迹显示,4组细胞cyclinD1、p21、Bcl-2、Bax、MMP-2、MMP-9蛋白相对水平差异均有统计学意义(均P<0.001),干扰LEF1-AS1组cyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白相对水平均高于干扰对照组,p21、Bax蛋白相对水平低于干扰对照组(均P<0.05);而干扰抑制组cyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白相对水平均高于干扰抑制对照组,p21、Bax蛋白相对水平低于干扰抑制对照组(均P<0.05)。共转染互补序列后,miR-612过表达组细胞荧光活性低于过表达对照组(t=21.19,P<0.001);而共转染非互补序列后,miR-612组细胞荧光活性与过表达对照组差异无统计学意义(t=0.28,P=0.78)。结论lncRNA LEF1-AS1调控皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭,机制与靶向miR-612相关。

LEF1-AS1靶向miR-339-5p对MPP^(+)诱导的SK-N-SH损伤的影响

目的探讨长链非编码RNA(Long noncoding RNA,LncRNA)LEF1反义RNA1(LEF1 antisense RNA 1,LEF1-AS1)是否通过靶向微小RNA-339-5p(MicroRNA-339-5p, miR-339-5p)来影响1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenyl-pyridinium, MPP^(+))诱导的人神经母细胞瘤(SK-N-SH)细胞损伤。方法定量逆转录聚合酶链反应(Quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测LEF1-AS1和miR-339-5p在帕金森病患者中的表达水平;将SK-N-SH细胞分为con(对照)组、MPP^(+)组(0.3 mmol/L MPP^(+))、MPP^(+)+小干扰RNA对照(Small interfering RNA-NC,si-NC)组(MPP^(+)处理前转染si-NC)、MPP^(+)+si-LEF1-AS1组(MPP^(+)处理前转染si-LEF1-AS1)、MPP^(+)+微小RNA对照(MicroRNA-NC,miR-NC)组(MPP^(+)处理前转染miR-NC)、MPP^(+)+miR-339-5p组(MPP^(+)处理前转染miR-339-5p)、MPP^(+)+si-LEF1-AS1+抗微小RNA对照(anti-MicroRNA-NC,anti-miR-NC)组(MPP^(+)处理前共转染si-LEF1-AS1和anti-miR-NC)、MPP^(+)+si-LEF1-AS1+anti-miR-339-5p组(MPP^(+)处理前共转染si-LEF1-AS1和anti-miR-339-5p);运用噻唑基蓝四唑溴化物(Thiazolyl blue tetrazolium bromide, MTT)法、比色法、流式细胞仪和Western Blotting检测细胞活力、丙二醛(Malondialdehyde, MDA)水平、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)活性、细胞凋亡和B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2)相关X蛋白(Bcl-2 related X protein, Bax)、Bcl-2蛋白表达水平;荧光素酶测定分析LEF1-AS1和miR-339-5p之间的靶向结合。结果与正常人比较,帕金森病患者中LEF1-AS1表达水平升高,miR-339-5p表达水平降低(P<0.05);MPP^(+)诱导SK-N-SH细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平、LEF1-AS1表达水平和MDA水平增高,Bcl-2蛋白表达水平、细胞活性(48、72 h)、miR-339-5p表达水平、SOD活性降低(P<0.05);干扰LEF1-AS1或过表达miR-339-5p后MPP^(+)诱导的SK-N-SH细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平、MDA水平降低,Bcl-2蛋白表达水平、细胞活性(48、72 h)、miR-339-5p表达水平和SOD活性升高(P<0.05);LEF1-AS1靶向调控miR-339-5p的表达;抑制miR-339-5p可逆转干扰LEF1-AS1对MPP^(+)诱导的SK-N-SH细胞损伤和氧化应激的影响。结论干扰LEF1-AS1通过靶向miR-339-5p来减轻MPP^(+)诱导的SK-N-SH细胞损伤。

长链非编码RNA LEF1-AS1对宫颈癌细胞增殖与细胞周期和转移的影响及作用机制

目的研究长链非编码RNA淋巴增强因子结合因子1反义RNA 1(lymphoid enhancer-binding factor 1 antisense RNA 1,lnc RNA LEF1-AS1)对宫颈癌细胞增殖、细胞周期和转移的影响,并探讨其发挥作用的机制。方法采用q RT-PCR检测lnc RNA LEF1-AS1宫颈癌和正常宫颈组织中的表达水平;分析lnc RNA LEF1-AS1的表达水平与宫颈癌患者临床病理参数的关系;常规培养宫颈癌细胞系HeLa,转染lnc RNALEF1-AS1小干扰RNA(si RNA),分为对照组si-NC和实验组si-LEF1-AS1-1组、si-LEF1-AS1-2组。q RT-PCR检测各组细胞中lnc RNA LEF1-AS1的表达水平;MTS实验检测各组细胞的增殖能力;流式细胞术检测各组细胞周期;Transwell检测各组细胞转移能力;Western blotting检测lncRNA LEF1-AS1对Hippo信号通路的影响。结果q RT-PCR结果显示lncRNALEF1-AS1在宫颈癌中的表达高于正常宫颈组织,且lncRNALEF1-AS1表达水平与宫颈癌患者浸润深度及淋巴结转移相关。与对照组si-NC相比,实验组si-LEF1-AS1-1组、si-LEF1-AS1-2组细胞中lnc RNALEF1-AS1的表达降低(P<0.05),细胞增殖能力降低,细胞周期阻滞在G0/G1期及细胞转移能力降低;与对照组si-NC相比,实验组si-LEF1-AS1-1组、si-LEF1-AS1-2组细胞中Mst1、Mst2和pYAP蛋白表达升高,YAP1蛋白表达降低。结论lnc RNA LEF1-AS1在宫颈癌组织中表达增加,可能通过抑制Hippo信号通路调控宫颈癌细胞的增殖、细胞周期和转移。lnc RNA LEF1-AS1可能是治疗宫颈癌的潜在靶点。