建立同时检测大鼠组织中真武汤有效成分的LESA-MS/MS方法研究

目的:建立同时检测大鼠组织中真武汤有效成分的表面液滴萃取-质谱联用(LESA-MS/MS)方法,为中药体内分布研究探索新的检测方法。方法:清洁级健康雄性SD大鼠40只,随机分为两组:正常对照组、真武汤组。真武汤组给予真武汤粉剂9.1g/kg,每日早晚各1次,均以0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃给药,灌胃体积为10mL/kg,正常对照组大鼠根据体质量给予0.5%羧甲基纤维素钠溶液,连续灌胃给药60d。给药60d后取两组大鼠心脏、肾脏和肝脏组织制备冰冻切片。本研究以甲醇、水和氨水作为萃取溶液,采用LESA-MS/MS方法进行检测:通过工作站控制机器人在多重反应监测(MRM)模式下进行检测,负离子扫描模式,扫描范围120到1000Da,分辨率100000,采集时间2min。监测离子对:去甲乌药碱m/z 270.1→135.1,茯苓酸m/z 527.3→221.2,次乌头碱m/z 616.3→338.1。结果:稳定性考察显示,心脏、肾脏和肝脏组织中的待测物在反复复融3次后检测结果稳定,在-80℃冰箱中冷冻保存14d后检测结果稳定,在室温下放置24h后检测结果稳定。结论:本研究建立了同时测定大鼠组织中去甲乌药碱、茯苓酸和次乌头碱3种真武汤中有效成分的LESA-MS/MS分析方法。该方法样品前处理简单,省时省力,稳定性好,适于在临床医学领域推广和应用。