LGK974的合成工艺研究

LGK974是一种高度特异性和有效的Porcupine抑制剂。设计了一条新的合成路线,以2-氨基-5-溴吡啶、2-氯-3-甲基吡啶、2-氨基吡嗪和2-甲基-6-氯吡啶为起始原料,采用汇聚法,经取代、Suzuki、酰胺化等10步反应合成了LGK974,总收率11.5%,其结构经^1H NMR、^13C NMR和MS(ESI-TOF)确证。

SOX9活化Wnt/β-catenin信号通路对食管鳞状细胞癌细胞增殖的影响

目的探讨SOX9对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞增殖的影响和分子机制。方法采用免疫组化EnVision法检测ESCC组织和癌旁正常组织中SOX9的表达,并分析其与临床病理特征及预后的关系。对过表达SOX9的Eca109-SOX9细胞和Eca109-Vector进行全转录芯片检测。qRT-PCR技术检测TE-1和干扰SOX9表达的TE-1细胞中差异基因的表达。Western blot法检测干扰和过表达SOX9后活化/非磷酸化β-catenin蛋白表达。使用Wnt抑制剂LGK974处理不同ESCC细胞后,通过CCK-8法检测细胞增殖能力的变化。结果SOX9在ESCC组织(4.58±3.04)中的表达显著高于癌旁正常组织(1.56±2.08,P<0.001)。SOX9表达与ESCC分化程度和浸润深度有关(P<0.05)。生存分析显示,SOX9高表达患者的总生存率明显低于低表达者(P<0.05);生物信息学分析发现AXIN2、FZD7和WNT5A在Eca109-SOX9细胞中的表达明显高于对照组;使用siRNA干扰SOX9后,AXIN2、FZD7和WNT5A的mRNA表达水平及活化/非磷酸化β-catenin的蛋白表达水平均降低,过表达SOX9则活化/非磷酸化β-catenin表达增加;经不同浓度LGK974处理的TE-1和Eca109-SOX9细胞增殖能力均显著降低,而低表达SOX9的Eca109-Vector细胞增殖能力未见明显改变,且SOX9蛋白表达不受LGK974影响。结论SOX9在ESCC中高表达,并可通过活化Wnt/β-catenin信号通路促进ESCC增殖,提示SOX9有望成为ESCC的预后标志物和药物治疗靶点。

在肿瘤类器官中研究阻断Wnt信号治疗结直肠癌的价值

目的在肿瘤类器官中研究阻断Wnt信号治疗结直肠癌的价值。方法从在衡水市第四人民医院就诊的结直肠癌患者中遴选120名适合患者,从患者的手术标本收集癌组织、癌旁组织,然后利用类器官培养技术进行体外3D建模,选择Porcupine蛋白(PROCN)抑制剂LGK974进行药物处理,测定癌组织和癌旁组织WntmRNA的表达水平,研究LGK974药物干预Wnt通路靶点后对结直肠癌肿瘤成瘤性的影响。结果实验中采取半定量PCR方法对比癌旁组织和癌组织中Wnt表达水平,我们发现在LGK974抑制剂后,癌旁组织WntmRNA表达水平(1.17±0.04),癌组织中WntmRNA表达水平(2.83±0.19),经对比其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论通过本次研究证实,Wnt信号通路的激活与结直肠癌发生密切相关,LGK974药物对结直肠癌肿瘤有明显抑制作用,肿瘤类器官对于寻找抗癌药物具有十分重要的研究价值。

过表达RNF43抑制肾透明细胞癌细胞系786-O增殖、迁移与侵袭

目的探究RNF43对肾透明细胞癌(ccRCC)细胞系786-O的增殖、迁移及侵袭功能的影响及其潜在机制。方法应用GEPIA网站分析人肾透明细胞癌样本的RNF43表达并预测RNF43对肾透明细胞癌患者预后的影响。将786-O细胞分为RNF43过表达组和Wnt通路抑制剂LGK974药物干预组。用Western blot及qPCR检测RNF43表达、Wnt/β-catenin通路蛋白的表达和LGK974抑制Wnt通路的效率;用CCK-8和克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成;用划痕实验和Transwell小室法检测细胞迁移及侵袭。结果RNF43在人肾透明细胞癌组织中低表达且与预后不良相关。与对照组相比,过表达RNF43或使用LGK974处理后,786-O细胞中β-catenin和non-phospho(active)β-catenin蛋白质表达显著下降(P<0.05),且细胞增殖、迁移及侵袭能力显著减弱(P<0.001)。结论RNF43能够通过下调Wnt/β-catenin通路来抑制786-O细胞的增殖、迁移及侵袭。

原代结直肠癌类器官中WNT通路的功能和分子机制TOPFlash报告基因系统的变化

目的探讨原代结直肠癌类器官中WNT通路的功能和分子机制TOPFlash报告基因系统的变化,以期为研究干预WNT通路靶点治疗原代结直肠癌提供新思考方向。方法收集衡水市第四人民医院就诊的120例结直肠癌患者的活检标本,对肿瘤组织进行体外3D建模,使用PORCN抑制剂LGK974处理结直肠癌类器官,通过相应检测方法测定类器官WNT蛋白水平变化、WNT通路激活情况,通过TOPFlash报告基因系统研究LGK974对WNT通路的作用。结果肿瘤组织中的WNT3、Lgr5与Ascl2表达水平高于癌旁组织(P<0.05);LGK974处理可明显抑制结直肠癌类器官的生长,处理前后类器官面积分别是(10.00±1.32)×104 m2,(2.96±0.60)×104 m2。相比癌旁组织,结直肠癌组织AXIN蛋白表达量下降,β-链蛋白表达量升高。结论 WNT通路激活与结直肠癌的发生有关,抑制Porcupine蛋白可阻断WNT通路,阻断WNT通路可抑制结直肠癌细胞生长,这或可成为抗结直肠癌的新思考方向。