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人LGR5基因克隆及其基因转染细胞株的构建
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作者 邓云 陆婷 +2 位作者 葛彦 居颂文 居颂光 《中国血液流变学杂志》 CAS 2013年第1期1-3,72,共4页
目的克隆人LGR5分子并构建其稳定表达的基因转染细胞株.方法提取人宫颈癌细胞株HeLa细胞总RNA,通过RT-PCR克隆获得人LGR5全长cDNA,将人LGR5全长cDNA重组入逆转录病毒载体pEGZ-term,通过293T细胞的包装获得具有感染力的完整重组病毒载体... 目的克隆人LGR5分子并构建其稳定表达的基因转染细胞株.方法提取人宫颈癌细胞株HeLa细胞总RNA,通过RT-PCR克隆获得人LGR5全长cDNA,将人LGR5全长cDNA重组入逆转录病毒载体pEGZ-term,通过293T细胞的包装获得具有感染力的完整重组病毒载体,收集培养上清感染L929细胞,筛选构建稳定表达人LGR5分子的基因转染细胞株.结果成功克隆人LGR5全长cDNA和构建pEGZ/LGR5逆转录病毒表达载体,成功获得稳定表达人LGR5的基因转染细胞株L/LGR5.结论成功克隆了人LGR5基因并构建了稳定表达LGR5分子的基因转染细胞株,为进一步研究LGR5分子的生物学功能奠定了基础. 展开更多
关键词 lgr5 克隆 基因转染细胞株
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miR-340靶向Lgr5基因抑制结肠癌细胞增殖及β-catenin通路的研究
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作者 陈婧华 宋慧东 +3 位作者 盖云竹 温凌 李敏燕 袁燚 《标记免疫分析与临床》 CAS 2021年第1期122-126,共5页
目的研究miR-340靶向富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(Lgr5)基因抑制结肠癌细胞增殖及β-连环蛋白(β-catenin)通路的作用。方法培养人结肠癌细胞株HT29、SW480、LoVo及正常肠上皮细胞HIEC,检测miR-340的表达水平;将SW480细胞分为mi... 目的研究miR-340靶向富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(Lgr5)基因抑制结肠癌细胞增殖及β-连环蛋白(β-catenin)通路的作用。方法培养人结肠癌细胞株HT29、SW480、LoVo及正常肠上皮细胞HIEC,检测miR-340的表达水平;将SW480细胞分为miR-NC组(转染miR-NC mimic)、miR-340组(转染miR-340 mimic)、pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1质粒),pcDNA3.1+miR-340组(转染pcDNA3.1质粒及miR-340 mimic)、pcDNA3.1-Lgr5+miR-340组(转染pcDNA3.1-Lgr5质粒及miR-340 mimic),MTS法检测增殖活力A490,荧光定量PCR检测miR-340的表达水平,Western blot检测Lgr5、β-catenin、cyclinD1的表达水平,双荧光素酶报告基因验证miR-340靶向Lgr5。结果HT29、SW480、LoVo细胞中miR-340的表达水平均低于HIEC细胞,且SW480细胞中miR-340的表达水平最低;miR-340组的A490水平、Lgr5、β-catenin、cyclinD1的表达水平、Lgr5野生型双荧光素酶报告基因的荧光活力均低于miR-NC组;pcDNA3.1+miR-340组的A490水平、Lgr5、β-catenin、cyclinD1的表达水平均低于pcDNA3.1组,pcDNA3.1-Lgr5+miR-340组的A490水平、Lgr5、β-catenin、cyclinD1的表达水平均高于pcDNA3.1+miR-340组。结论miR-340能够抑制结肠癌细胞的增殖,靶向Lgr5基因并抑制β-catenin通路是可能的分子机制。 展开更多
关键词 结肠癌 miR-340 lgr5 Β-CATENIN 增殖 靶基因
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副乳头对奶牛生产性能的影响及其相关基因LGR5的遗传表达分析 被引量:2
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作者 文惠 罗汉鹏 +4 位作者 米思远 刘雪琴 王雅春 肖炜 俞英 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第12期3642-3649,共8页
试验旨在探究副乳头(SNT)对奶牛产奶性能的影响及乳腺发育相关基因LGR 5与副乳头发生的关系。收集325头有副乳头奶牛及同年出生的737头无副乳头奶牛的产奶性能数据,比较有、无副乳头奶牛间的产奶性能差异;利用实时荧光定量PCR技术检测... 试验旨在探究副乳头(SNT)对奶牛产奶性能的影响及乳腺发育相关基因LGR 5与副乳头发生的关系。收集325头有副乳头奶牛及同年出生的737头无副乳头奶牛的产奶性能数据,比较有、无副乳头奶牛间的产奶性能差异;利用实时荧光定量PCR技术检测有、无副乳头奶牛LGR 5基因的表达差异,通过直接测序法测定有、无副乳头奶牛的LGR 5基因序列,寻找该基因上的遗传突变。结果表明,无副乳头奶牛的日产奶量、高峰奶量及泌乳持续力等产奶性能均优于有副乳头奶牛,但未达到统计学显著水平;LGR 5基因在有副乳头奶牛中的表达量显著高于无副乳头奶牛(P<0.05);在LGR 5基因第1内含子中检测到3个SNPs:rs42849472、rs42849471和rs42849470,有副乳头奶牛中3个SNPs的AA基因型频率均极显著高于无副乳头奶牛(P<0.01)。结果提示,LGR 5基因可能与奶牛副乳头发生有关,可作为有效的候选基因。 展开更多
关键词 奶牛 有副乳头 无副乳头 产奶性能 LGR 5基因
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子宫内膜癌病灶内TRPV1、LGR5对下游增殖、侵袭相关基因表达的影响 被引量:2
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作者 刘媚 刘红霞 《海南医学院学报》 CAS 2018年第2期231-234,共4页
目的:探讨子宫内膜癌病灶内TRPV1、LGR5对下游增殖、侵袭相关基因表达的影响。方法:选择在本院接受手术治疗的子宫内膜癌患者40例,检测子宫内膜癌组织、癌旁正常组织中TRPV1、LGR5基因的表达量,根据其中位数分为高TRPV1组、低TRPV1组,高... 目的:探讨子宫内膜癌病灶内TRPV1、LGR5对下游增殖、侵袭相关基因表达的影响。方法:选择在本院接受手术治疗的子宫内膜癌患者40例,检测子宫内膜癌组织、癌旁正常组织中TRPV1、LGR5基因的表达量,根据其中位数分为高TRPV1组、低TRPV1组,高LGR5组、低LGR5组,各20例。对比不同TRPV1、LGR5表达量的子宫内膜癌组织中,增殖、侵袭基因表达量的差异。结果:子宫内膜癌组织中TRPV1、LGR5基因的表达量显著高于癌旁组织(P<0.05)。高TRPV1组、高LGR5组病灶组织中增殖基因HMGB1、SRPX2、Wip-1mRNA的表达量分别高于低TRPV1组、低LGR5组(P<0.05),ITLN-1 mRNA的表达量分别低于低TRPV1组、低LGR5组(P<0.05);高TRPV1组、高LGR5组病灶组织中侵袭基因MTA1、hnRNP H、Snail mRNA的表达量分别高于低TRPV1组、低LGR5组(P<0.05),Dickkopf、DKK1 mRNA的表达量分别低于低TRPV1组、低LGR5组(P<0.05)。结论:子宫内膜癌病灶内TRPV1、LGR5基因表达量异常增高,与下游增殖、侵袭基因表达量直接相关,共同影响病程进展。 展开更多
关键词 子宫内膜癌 TRPV1 lgr5增殖基因 侵袭基因
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Crypt region localization of intestinal stem cells in adults
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作者 Hugh James Freeman 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2008年第47期7160-7162,共3页
The intestinal epithelial lining plays a central role in the digestion and absorption of nutrients,but exists in a harsh luminal environment that necessitates continual renewal.This renewal process involves epithelial... The intestinal epithelial lining plays a central role in the digestion and absorption of nutrients,but exists in a harsh luminal environment that necessitates continual renewal.This renewal process involves epithelial cell proliferation in the crypt base and later cell migration from the crypt base to the luminal surface.This process is dependent on multi-potent progenitor cells,or stem cells,located in each crypt.There are about 4 to 6 stem cells per crypt,and these stem cells are believed to generate distinct end-differentiated epithelial cell types,including absorptive cells,goblet cells,enteroendocrine cells and Paneth cells,while also maintaining their own progenitor cell state.Earlier studies suggested that intestinal stem cells were located either in the crypt base interspersed between the Paneth cells [i.e.crypt base columnar(CBC) cell model] or at an average position of 4 cells from the crypt base [i.e.label-retaining cells(LRC +4) model].Recent studies have employed biomarkers in the in vivo mammalian state to more precisely evaluate the location of these progenitor cells in the intestinal crypt.Most notable of these novel markers are Lgr5,a gene that encodes a G-protein-coupled receptor with expression restricted to CBC cells,and Bmi 1,which encodes a chromatin remodeling protein expressed by LRC.These studies raise the possibility that there may be separate stem cell lines or different states of stem cell activation involved in the renewal of normal mammalian intestinal tract. 展开更多
关键词 Crypt base columnar cells Intestinal epithelial cell renewal lgr5 gene Polycomb bmil protein Progenitor cells Stem cells +4 stem cellmodel
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人结直肠癌干细胞标志物富含亮氨酸重复单位的G蛋白耦联受体5基因的表达及意义 被引量:6
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作者 孙艳 盛春华 +2 位作者 文大成 李玉林 迟宝荣 《中华消化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期187-190,共4页
目的探讨人结直肠癌组织及外周血中干细胞标志物富含亮氨酸重复单位的G蛋白耦联受体5(lgr5)基因的表达及其与临床病理特征间的关系。方法采用SYBRGreen实时定量PCR方法检测27份结直肠癌组织及配对的正常组织中、17例患者及8名健康对... 目的探讨人结直肠癌组织及外周血中干细胞标志物富含亮氨酸重复单位的G蛋白耦联受体5(lgr5)基因的表达及其与临床病理特征间的关系。方法采用SYBRGreen实时定量PCR方法检测27份结直肠癌组织及配对的正常组织中、17例患者及8名健康对照者外周血中lgr5mRNA的表达。应用Wilcoxon秩和检验分析lgr5mRNA在不同组织间、临床病理参数之间的表达差异。结果结直肠癌组织中lgr5mRNA表达水平为1.000(0.012,496.353),高于配对正常组织的0.147(0.004,73.002),差异有统计学意义(Z=8.029,P〈0.01)。结直肠癌患者外周血中lgr5 mRNA表达水平为0.742(0.077,456.566),高于健康对照组的0.104(0.034,0.274),差异有统计学意义(Z=2.048,P〈0.05)。结直肠癌组织lgr5 mRNA在不同性别、年龄、肿瘤原发部位、肿瘤大小、组织学类型组间表达差异均无统计学意义(P均〉0.05),但有淋巴结转移组lgr5 mRNA表达高于无淋巴结转移组,差异有统计学意义(Z=2.066,P〈0.05)。结论lgr5在结直肠癌组织及外周血中的表达上调可能参与了结直肠癌的生长及转移。 展开更多
关键词 结直肠肿瘤 干细胞 lgr5 基因表达
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